白蘞PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒(he)保(bao)存(cun)

儲存條(tiao)件：
14℃或－20℃樣品(pin)收(shou)集、處(chu)理(li)及(ji)保(bao)存(cun)方(fang)法
1. 血清：使(shi)用(yong)不含熱(re)原(yuan)和內(nei)毒素(su)的(de)試(shi)管(guan)，操作(zuo)過程中(zhong)避免(mian)任何細胞(bao)刺(ci)激(ji)，收(shou)集血(xue)液後(hou)，3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)將血(xue)清和紅(hong)細胞(bao)迅速(su)小心地分離(li)。
2. 血漿：EDTA、檸檬(meng)酸鹽或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉離(li)心(xin)30 分鐘(zhong)取上清。
3. 細胞(bao)上清液：3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)去除顆粒(li)和聚(ju)合(he)物。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿：將(jiang)組(zu)織(zhi)加入適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽水搗碎。3000 轉離(li)心(xin)10 分鐘(zhong)取上清。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣本收(shou)集後(hou)不及(ji)時(shi)檢測，請按(an)壹次用量(liang)分(fen)裝，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避免(mian)反復凍(dong)融，在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)解凍並(bing)確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地充分(fen)解凍。

特點(dian)：
1. 即開即用(yong)，用(yong)戶(hu)只(zhi)需(xu)要提供(gong)病(bing)毒樣品(pin)。
2. 根(gen)據地黃保(bao)守序(xu)列設計的專(zhuan)壹性(xing)引(yin)物，與相關病毒(du)無交(jiao)叉(cha)反應。
3. 靈(ling)敏度可以(yi)達(da)到(dao)幾百拷(kao)貝/反應。
4. 壹管式熒(ying)光定量(liang) PCR 檢測，避免(mian)後(hou)續汙(wu)染。
5. 本試劑(ji)盒(he)足(zu)夠 50 次 20μL 反應體(ti)系的(de)熒(ying)光定量(liang) PCR。
6. 本產品(pin)只適(shi)用於(yu)科(ke)研，不能(neng)用於(yu)臨(lin)床診斷。

使(shi)用(yong)方(fang)法：
壹、樣品(pin)采集：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采集與(yu)預(yu)培(pei)養按照樣品(pin)的采集與(yu)預(yu)培(pei)養按照《食品(pin)衛生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)檢驗阪崎腸桿菌檢驗要求進(jin)行(xing)。
2、血液樣品(pin)：用無菌註射器抽取(qu)受(shou)檢者(zhe)靜脈(mai)血(xue)2mL，註入無菌EDTA2Na(或檸檬(meng)酸鈉)抗(kang)凝(ning)管，立(li)即(ji)混(hun)勻(yun)。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅菌(jun)的(de)收(shou)集管(guan)中(zhong)送(song)檢。
4、病竈(zao)部位樣品(pin)：取發(fa)病(bing)部位新(xin)鮮(xian)滲出(chu)物(wu)、粘(zhan)液膿(nong)血(xue)送檢。
壹、稀釋 PCR 陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這(zhe) 6 個 10 倍稀釋度為(wei)例(li)）
1. 註意(yi)：由於標(biao)準(zhun)品(pin)濃度非(fei)常高，因(yin)此(ci)下(xia)列(lie)稀(xi)釋操作(zuo)壹定要在(zai)獨(du)立(li)的(de)區(qu)域進(jin)行(xing)，千萬(wan)不能(neng)汙(wu)染樣(yang)品(pin)或本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)其他(ta)成(cheng)分）。為(wei)增(zeng)加(jia)產品(pin)穩定性(xing)和避(bi)免(mian)擴(kuo)散傳染性(xing)病(bing)原(yuan)，本(ben)產品(pin)不提供(gong)活(huo)體樣(yang)品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)，只(zhi)提(ti)供可以(yi)直接(jie)使(shi)用(yong)的(de) DNA段作為(wei)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。
2. 標(biao)記 6 個離(li)心(xin)管(guan)，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍(qiang)頭(tou)分別(bie)加入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液（用帶芯槍(qiang)頭(tou)，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)，充(chong)分(fen)震蕩 1 分鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
5. 換槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 6 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)(上步(bu)稀(xi)釋(shi)所(suo)得)，充分震蕩 1 分鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
6. 換槍(qiang)頭(tou)，在(zai) 5 號管中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)到(dao) 5 號管中，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
7. 重(zhong)復上面的操作(zuo)直到得(de)到 6 個稀釋度的陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
註：上述(shu)樣品(pin)建議(yi)經(jing)過增(zeng)菌(jun)後(hou)，收(shou)集培(pei)養物用於檢測。 
二、DNA提取：
可采用PCR試劑(ji)盒(he)配(pei)備的(de)DNA抽提(ti)液，按以(yi)下(xia)說(shuo)明進(jin)行(xing)DNA核酸的粗(cu)提(ti)。也(ye)可采購上海(hai)澤(ze)葉生(sheng)物(wu)科(ke)技有限公(gong)司(si)生(sheng)產的DNA提取試劑(ji)盒(he)(過柱(zhu)法-熒(ying)光配(pei)套(tao))或其他合(he)適(shi)的商業化產品(pin)，並按(an)照(zhao)相(xiang)應試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明進(jin)行(xing)操作(zuo)。
1、液體培(pei)養物：取液體培(pei)養物100μL加到1.5mL無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡量(liang)吸(xi)棄上清，加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
2、固(gu)體培(pei)養物：挑取單克(ke)隆菌(jun)落(luo)與50μL DNA抽提(ti)液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：挑取(qu)米粒(li)大(da)小(xiao)糞(fen)便(bian)於(yu)滅菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入0.5mL生(sheng)理(li)鹽水，振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分鐘(zhong)，棄上清，沈澱中(zhong)加入50μL DNA抽提(ti)液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
4、其他液體標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄上清，沈澱中(zhong)加入50μL DNA抽提(ti)液充分(fen)混(hun)勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
註：陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)和陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)為(wei)已經(jing)抽提(ti)好(hao)的核(he)酸(suan)(無需提(ti)取)，直接(jie)取5μL加入到反應體(ti)系中(zhong)即(ji)可(ke)。由於陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)濃(nong)度較高，建議(yi)在(zai)樣(yang)品(pin)制(zhi)備區(qu)域加(jia)入陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。 
LTEP-a-2(人肺(fei)腺癌細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2檸檬(meng)酸鋰四水(>98%,BR)Lithium , tetrahydrate質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,BR

Promocell C-21160 Airway Epithelial Cell GrowthMedium KIT,呼(hu)吸道(dao)上皮(pi)細胞(bao)生(sheng)長(chang)培(pei)養基套(tao)裝(zhuang) 500ml4-甲基傘形(xing)酮酰(xian)-beta-D-吡(bi)喃(nan)糖苷(gan)MU-Gal質量(liang)規(gui)格(ge)：分(fen)子生(sheng)物(wu)學(xue)級(ji)

人支(zhi)氣管成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)HBF4-甲基傘形(xing)酮酰(xian)-Β-D-吡(bi)喃(nan)葡糖酸(suan)苷(gan)MU-GLU質量(liang)規(gui)格(ge)：>99%，分子生(sheng)物(wu)學(xue)級(ji)

HA Others H1N1 甲型流(liu)感 H1N1 (A/Texas/05/2009) 血凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 4-甲基傘花基1酸鈉三水MUP, di salt, trihydrate質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%，分子生(sheng)物(wu)學(xue)級(ji)

J774A.1 小鼠巨噬細胞(bao)1,4-雙(shuang)(5-苯(ben)基-2-噁唑(zuo)基)苯(ben)(>98%,Scint Grade)POPOP質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%
人張(zhang)氏(shi)肝(gan)細胞(bao);Chang liverO-4-硝基芐基羥(qiang)胺鹽酸(suan)鹽(>99.0%(HPLC),用於高效(xiao)液相色(se)譜(pu)標(biao)記)O-4-Nitrobenzylhydroxylamine 質量(liang)規(gui)格(ge)：>99.0%(HPLC),用於高效(xiao)液相色(se)譜(pu)標(biao)記

JAM2 Others Mouse 小鼠 JAM2 / CD322 / VE-JAM 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 7-乙(yi)酰(xian)氧基-4-溴甲基(>98.0%(HPLC)(T),用於高效(xiao)液相色(se)譜(pu)標(biao))7-Acetoxy-4-bromomethylcoumarin質量(liang)規(gui)格(ge)：>98.0%(HPLC)(T),用於高效(xiao)液相色(se)譜(pu)標(biao)記

肺(fei)泡上皮(pi)細胞(bao)培(pei)養基AEpiCM1-萘乙(yi)醇(chun)(>98%,BR)1-Naphthalene ethal質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,BR

MET Others Canine 狗 c-MET / HGFR 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 乙(yi)酸(suan)-1-萘酯(zhi)(>98%,BR)1-Naphthyl acetate質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,BR

GPL1 豚鼠肺(fei)成(cheng)纖(xian)維樣細胞(bao)二(er)十(shi)八烷(wan)醇(chun)(>98%,BR)1-Octacosal質量(liang)規(gui)格(ge)：>98%,BR
LRP11 Others Human 人 LRP11 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 美托拉宗質(zhi)量(liang)規(gui)格(ge)：>99%,BRMetolazone

內膜(mo)上皮(pi)細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(1ml)美托拉宗(標(biao)準(zhun)品(pin))質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC≥99.0%,標(biao)準(zhun)品(pin)Metolazone

HSF細胞(bao)，人皮(pi)膚(fu)成(cheng)纖(xian)維細胞(bao) 人癌(ai)細胞(bao),MDA-MB-435S細胞(bao) 平(ping)滑肌細胞(bao)培(pei)養基SMCM-sf-prf雌二醇(chun),β-雌二醇(chun)質量(liang)規(gui)格(ge)：>98.0%,BR,可用於細胞(bao)培(pei)養Estradiol

荷(he)蘭白花奶肺(fei)細胞(bao);DCL1雌二醇(chun),β-雌二醇(chun)（標(biao)準(zhun)品(pin)）質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)Estradiol

IL6R Others Human 人 IL6R / CD126 人細胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 雌三醇(chun)質量(liang)規(gui)格(ge)：>98.5%,BR,可用於細胞(bao)培(pei)養Estriol
白蘞PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒(he)保(bao)存(cun)CL-0340GH3(大鼠垂(chui)體(ti)瘤細胞(bao))5×106cells/瓶×27-磺酰(xian)胺基-N-羥(qiang)甲(jia)基質量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口7-Sulfonamido-N-hydroxymethyl Hydrochlorothiazide

SF9, 昆(kun)蟲卵(luan)巢細胞(bao) 人癌(ai)細胞(bao)，MCF7B細胞(bao) hFOB 1.19(人SV40轉染成(cheng)骨(gu)細胞(bao))5-氯質量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口5-Chloro Hydrochlorothiazide

人髓母細胞(bao)瘤(liu)細胞(bao);Daoy雜質C質量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國進(jin)口Hydrochlorothiazide Impuri
實驗流(liu)程(cheng)：
1. 整個檢測過程應(ying)嚴(yan)格(ge)按(an)照本說(shuo)明書要求分(fen)別(bie)在(zai)試(shi)劑(ji)準(zhun)備區(qu)、樣(yang)本(ben)處理(li)區(qu)和PCR擴(kuo)增(zeng)區(qu)進(jin)行(xing)操作(zuo)，各(ge)區(qu)實(shi)驗(yan)服、儀器 、耗材(cai)應(ying)獨(du)立(li)使(shi)用(yong)，不能(neng)混用(yong)；實(shi)驗用(yong)吸(xi)頭(tou)采用帶濾芯吸(xi)頭(tou)；樣本(ben)處(chu)理(li)區(qu)應(ying)配(pei)有生(sheng)物(wu)安全櫃(gui)，樣(yang)本(ben)處(chu)理在(zai)生(sheng)物(wu)安全櫃(gui)中(zhong)進(jin)行(xing)操作(zuo)；三(san)個區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有紫外線殺(sha)菌裝置(zhi)。
2. 為(wei)避免(mian)RNA降解，樣本(ben)處理(li)過程應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件下(xia)操作(zuo)，且完(wan)成(cheng)實驗後(hou)立(li)即(ji)上機檢測；樣本(ben)處理過程中(zhong)使(shi)用(yong)的(de)器具耗材(cai)應(ying)經過無核酶(mei)處(chu)理。

3. 每次實驗(yan)應(ying)該(gai)設置陰(yin)、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。
4. 試劑(ji)盒(he)所(suo)有試劑(ji)在(zai)使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常溫下(xia)充(chong)分(fen)融化混(hun)勻(yun)，並應(ying)瞬(shun)時離(li)心(xin)。
5. 試劑(ji)盒(he)內(nei)所配(pei)陰(yin)性(xing)和陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)在(zai)壹次使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)全部轉移至(zhi)標(biao)本準(zhun)備區(qu)，並(bing)單(dan)獨(du)存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒(ying)光幹(gan)擾，應(ying)避免(mian)裸手直接(jie)接(jie)觸PCR反應管(guan)，並應(ying)避(bi)免(mian)在(zai)PCR反應管(guan)上進(jin)行(xing)任何標(biao)記。
7. 儀器 擴(kuo)增(zeng)相(xiang)關參(can)數應按(an)照(zhao)本說(shuo)明書相(xiang)關要求進(jin)行(xing)設置；不同(tong)批號(hao)試(shi)劑(ji)不能(neng)混用(yong)。
8. ABI系列熒(ying)光定量(liang)PCR儀參(can)數設置中(zhong)不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中(zhong)產品(pin)的廢棄(qi)物應(ying)該(gai)進(jin)行(xing)無害(hai)化處(chu)理(li)後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄(qi)。