白蘞(lian)染料法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒說明書(shu)

實(shi)驗流(liu)程(cheng)：
1. 整個(ge)檢(jian)測過(guo)程(cheng)應(ying)嚴格(ge)按(an)照(zhao)本說明書(shu)要(yao)求分別(bie)在試(shi)劑(ji)準備(bei)區、樣(yang)本處理區和(he)PCR擴(kuo)增區(qu)進行操(cao)作(zuo)，各區(qu)實驗(yan)服、儀(yi)器(qi) 、耗(hao)材應(ying)獨(du)立(li)使(shi)用，不(bu)能(neng)混用；實(shi)驗(yan)用吸頭采用帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸頭；樣本處理區應(ying)配(pei)有生物(wu)安全(quan)櫃(gui)，樣本處理在生物(wu)安全(quan)櫃(gui)中進行操(cao)作(zuo)；三(san)個區應(ying)該(gai)配(pei)有紫外(wai)線殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置。
2. 為避免RNA降(jiang)解，樣(yang)本處理過程(cheng)應(ying)在(zai)0-4℃條(tiao)件下(xia)操作(zuo)，且完(wan)成實(shi)驗(yan)後立(li)即上機檢(jian)測；樣(yang)本處理過程(cheng)中使(shi)用的(de)器(qi)具(ju)耗材(cai)應(ying)經(jing)過(guo)無核酶處理(li)。
3. 每次(ci)實驗(yan)應(ying)該(gai)設(she)置陰(yin)、陽性對(dui)照。
4. 試(shi)劑(ji)盒所有試(shi)劑(ji)在使(shi)用前(qian)應(ying)該(gai)在(zai)常溫(wen)下(xia)充分(fen)融化混勻(yun)，並應(ying)瞬(shun)時(shi)離(li)心(xin)。
5. 試(shi)劑(ji)盒內所(suo)配(pei)陰(yin)性(xing)和(he)陽性對(dui)照在(zai)壹(yi)次(ci)使(shi)用前(qian)應(ying)全(quan)部轉(zhuan)移至標(biao)本準備(bei)區，並(bing)單(dan)獨存放(fang)。
6. 為防(fang)止熒光幹擾，應(ying)避免裸(luo)手(shou)直接(jie)接觸PCR反(fan)應(ying)管，並(bing)應(ying)避免在PCR反(fan)應(ying)管上進行任(ren)何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增相(xiang)關參數應(ying)按(an)照(zhao)本說明書(shu)相(xiang)關要(yao)求進行設(she)置；不(bu)同(tong)批號(hao)試(shi)劑(ji)不能(neng)混用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光定量PCR儀(yi)參(can)數設(she)置中不選(xuan)ROX校(xiao)正，淬滅(mie)基因選擇None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中產品(pin)的廢棄(qi)物(wu)應(ying)該(gai)進行無害化處理(li)後(hou)方可(ke)丟(diu)棄(qi)。

特點(dian)：
1. 即(ji)開即(ji)用，用戶(hu)只需(xu)要(yao)提(ti)供病毒樣品(pin)。
2. 根據地黃保(bao)守(shou)序(xu)列設(she)計(ji)的(de)專(zhuan)壹(yi)性引(yin)物(wu)，與相關病毒無交(jiao)叉反應(ying)。
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可(ke)以(yi)達(da)到(dao)幾百(bai)拷貝(bei)/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管式(shi)熒光定量 PCR 檢(jian)測，避免後續(xu)汙染。
5. 本試劑(ji)盒足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)的(de)熒光定量 PCR。
6. 本產品(pin)只適用於(yu)科研(yan)，不(bu)能(neng)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)。
使(shi)用方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣品(pin)采集：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采(cai)集與預培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)樣(yang)品(pin)的采(cai)集與預培(pei)養(yang)按(an)照(zhao)《食品(pin)衛(wei)生微(wei)生物(wu)學(xue)檢(jian)驗(yan)阪崎腸(chang)桿菌(jun)檢驗(yan)要(yao)求進行。
2、血(xue)液(ye)樣品(pin)：用無菌(jun)註射(she)器(qi)抽取受(shou)檢者(zhe)靜(jing)脈血2mL，註(zhu)入無菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸檬酸(suan)鈉)抗凝(ning)管，立(li)即混勻(yun)。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：取糞便(bian)置於(yu)滅(mie)菌(jun)的收(shou)集管中送(song)檢。
4、病竈(zao)部位樣品(pin)：取發(fa)病部位新(xin)鮮(xian)滲(shen)出(chu)物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血送(song)檢。
壹(yi)、稀釋(shi) PCR 陽性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋(shi)度(du)為例）
1. 註(zhu)意：由(you)於標(biao)準品(pin)濃度(du)非(fei)常高(gao)，因此下(xia)列稀(xi)釋操(cao)作壹(yi)定要(yao)在(zai)獨立(li)的區域進行，千(qian)萬不能(neng)汙染樣(yang)品(pin)或(huo)本試劑(ji)盒的其他(ta)成分(fen)）。為增(zeng)加(jia)產品(pin)穩(wen)定性(xing)和(he)避免擴(kuo)散(san)傳染(ran)性病原，本產品(pin)不提(ti)供活體(ti)樣(yang)品(pin)做陽性對(dui)照，只提(ti)供(gong)可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)使(shi)用的(de) DNA段作為陽性對(dui)照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離心(xin)管，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)分(fen)別加(jia)入 45 μL 熒光 PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液(ye)（用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭(tou)，下(xia)同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待用。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在 6 號(hao)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照(上步稀(xi)釋所(suo)得(de))，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待用。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在 5 號(hao)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照到(dao) 5 號(hao)管中，充分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的(de)陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待用。
7. 重(zhong)復上面的(de)操作(zuo)直(zhi)到(dao)得(de)到(dao) 6 個(ge)稀釋(shi)度(du)的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上待用。
註(zhu)：上述樣(yang)品(pin)建(jian)議(yi)經(jing)過(guo)增菌(jun)後，收(shou)集培(pei)養(yang)物(wu)用於(yu)檢(jian)測。 
二、DNA提(ti)取：
可(ke)采(cai)用PCR試(shi)劑(ji)盒配備(bei)的DNA抽提液(ye)，按(an)以(yi)下(xia)說明進行DNA核(he)酸(suan)的(de)粗提。也可(ke)采(cai)購(gou)上海(hai)澤(ze)葉(ye)生物(wu)科技(ji)有限(xian)公(gong)司(si)生產的DNA提(ti)取試(shi)劑(ji)盒(過(guo)柱法(fa)-熒光配套)或(huo)其他(ta)合適的(de)商(shang)業(ye)化產品(pin)，並按(an)照(zhao)相(xiang)應(ying)試(shi)劑(ji)盒說明進行操(cao)作(zuo)。
1、液(ye)體培(pei)養(yang)物(wu)：取(qu)液(ye)體培(pei)養(yang)物(wu)100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌(jun)離心(xin)管中，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量吸棄(qi)上清，加(jia)入50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
2、固(gu)體培(pei)養(yang)物(wu)：挑取單(dan)克隆菌(jun)落與50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
3、糞便(bian)樣(yang)品(pin)：挑取米(mi)粒(li)大小(xiao)糞便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離心(xin)管中，加入0.5mL生理(li)鹽水，振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上清，沈澱中加入50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
4、其他(ta)液(ye)體標(biao)本：取標本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上清，沈澱中加入50μL DNA抽提液(ye)充分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進行PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽性對(dui)照和(he)陰(yin)性(xing)對(dui)照為已(yi)經(jing)抽提好(hao)的(de)核(he)酸(suan)(無需提取)，直(zhi)接取(qu)5μL加(jia)入到(dao)反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中即可(ke)。由(you)於陽性對(dui)照濃度(du)較高，建(jian)議(yi)在(zai)樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區域加(jia)入陽性對(dui)照。 
CM-H107人軟骨(gu)細胞(bao)*培(pei)養(yang)基100mL檸檬酸(suan)鉍(bi)Bismuth (III) 質量規(gui)格(ge)：BR

Hep G2, 人肝癌細胞系(xi)化鉍鉀Bismuth (III) potassium iodide質量規(gui)格(ge)：BR

人癌細胞;MCF7 人角(jiao)膜上皮細(xi)胞*培(pei)養(yang)基 100mL硫酸(suan)鉍(bi)(>98%,BR)Bismuth (III) sulfate質量規(gui)格(ge)：>98%,BR

人正常細(xi)胞(bao);Hs 578Bst堿(jian)式(shi)Bismuth(III) subcarbonate basic質量規(gui)格(ge)：BR

大鼠腹部脊髓(sui)神(shen)經(jing)元(RVSCI)(1×106)水楊酸(suan)鉍(bi)Bismuth(III) subsalicylate質量規(gui)格(ge)：鉍含量：>56%,BR
CM-M006小(xiao)鼠肺成纖(xian)維(wei)細胞(bao)*培(pei)養(yang)基100mL1-苯(ben)基-5-四(si)氮唑(>98.5%,BR)1-Phenyl-1H-tetrazole-5-thiol質量規(gui)格(ge)：>98.5%,BR

細(xi)胞新(xin)戊二醇(chun)(>98%,BR)2,2-Dimethyl-1,3-propanediol質量規(gui)格(ge)：>98%,BR

EB病毒轉化的人B細(xi)胞;KMY0907 人表皮色素細胞(bao)*培(pei)養(yang)基 100mL1-萘(nai)1-Naphtholphthalein質量規(gui)格(ge)：進口(kou)原裝(zhuang)，>98%

肺泡上皮細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)鹽(yan)酸(suan)達(da)泊西汀(混(hun)旋)Dapoxetine 質量規(gui)格(ge)：>99%,混(hun)旋

VEGFA Others Mouse 小(xiao)鼠 VEGFA / VEGF164 桿狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照) 鹽(yan)酸(suan)達(da)泊西汀(右旋)Dapoxetine 質量規(gui)格(ge)：>99%,右旋
LLC-PK1豬(zhu)腎近(jin)曲(qu)小(xiao)管上皮細(xi)胞 LLC-PK1 porcine kidney proximal tubular epithelial cells M199+3% FBS/DMEM+F12+12%FBSCAPRYLICACID辛(xin)酸(suan)超(chao)級(ji)10ML124-07-2RT

IFNB1 Protein Mouse 重(zhong)組小(xiao)鼠 IFNB1 / IFN-beta / Ierferon beta 蛋(dan)白 (Fc 標(biao)簽)奎(kui)諾二基炳1酯(zhi) ≥99% cMPSO 68399-79-1

MDA-MB-468-06(人癌細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 Y1(腎(shen)上腺皮質細胞(bao))metxyl-β-cyclodextrin2,6-二甲(jia)基-β-環糊精(jing)1KU高(gao)，80%

C57小(xiao)鼠色素瘤瘤(liu)株;ME (Me)BOC-D-本5克2～8℃

OLR1 Others Human 人 OLR1 / LOX1 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照) Baird-ParkerAgarBase 2kg原裝(zhuang)/500g原裝(zhuang) BD 276810
白蘞(lian)染料法(fa)PCR鑒(jian)定試(shi)劑(ji)盒說明書(shu)F3 Others Human 人 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照) TAEBUFFER,50XTAE緩沖(chong)液(ye), 50X超(chao)級(ji)1.6LRT

22RV1 人前(qian)列腺癌細胞碳醋(cu)銨(an) cMMoniuM ccronctq (cS);Crystcl cMMonic 206-87-6

MDCK-EGFP-puro(慢(man)病毒構建(jian)穩(wen)定株)狗(gou)腎上皮細(xi)胞 MDCK-EGFP-puro (leiviral consuct stable sains o
儲(chu)存條(tiao)件：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集、處(chu)理及保(bao)存方(fang)法(fa)
1. 血(xue)清：使(shi)用不(bu)含熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素的試(shi)管，操(cao)作(zuo)過程(cheng)中避免任(ren)何(he)細(xi)胞(bao)刺激，收(shou)集血(xue)液(ye)後，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清和(he)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地分離(li)。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸檬酸(suan)鹽(yan)或(huo)肝素抗凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清。
3. 細(xi)胞上清液(ye)：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆粒(li)和(he)聚(ju)合物(wu)。
4. 組織勻(yun)漿：將(jiang)組織加(jia)入適量生理(li)鹽水搗碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清。
5. 保(bao)存：如果(guo)樣本收(shou)集後(hou)不及時檢測，請(qing)按(an)壹(yi)次(ci)用量分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避免反復凍融(rong)，在(zai)室(shi)溫下(xia)解凍(dong)並確(que)保(bao)樣品(pin)均勻(yun)地充分(fen)解(jie)凍。