白(bai)蘞探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒(jian)定試劑盒*

特(te)點(dian)：
1. 即開(kai)即用(yong)，用(yong)戶(hu)只需要(yao)提(ti)供病毒(du)樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃保(bao)守序列設(she)計的專壹性引(yin)物，與相關(guan)病(bing)毒(du)無交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。
3. 靈敏(min)度可以達到(dao)幾(ji)百拷(kao)貝(bei)/反(fan)應(ying)。
4. 壹管(guan)式(shi)熒(ying)光定量 PCR 檢測(ce)，避免後(hou)續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本試劑盒足(zu)夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)的熒(ying)光定量 PCR。
6. 本產品(pin)只適用(yong)於科研，不能(neng)用(yong)於臨床診(zhen)斷。

使用(yong)方(fang)法(fa)：
壹、樣品(pin)采(cai)集(ji)：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采(cai)集(ji)與預(yu)培(pei)養(yang)按照樣品(pin)的采(cai)集(ji)與預(yu)培(pei)養(yang)按照《食(shi)品(pin)衛生(sheng)微生物學(xue)檢驗(yan)阪崎(qi)腸桿菌(jun)檢(jian)驗(yan)要(yao)求(qiu)進行(xing)。
2、血液(ye)樣品(pin)：用(yong)無菌(jun)註(zhu)射(she)器抽取(qu)受(shou)檢(jian)者靜脈(mai)血(xue)2mL，註(zhu)入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸檬(meng)酸鈉(na))抗凝(ning)管(guan)，立即混勻(yun)。
3、糞便樣品(pin)：取(qu)糞便置於滅菌(jun)的收集(ji)管(guan)中送(song)檢(jian)。
4、病竈(zao)部(bu)位樣品(pin)：取(qu)發病(bing)部(bu)位新鮮滲(shen)出(chu)物、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血(xue)送(song)檢(jian)。
壹、稀釋 PCR 陽性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋度為(wei)例(li)）
1. 註(zhu)意：由(you)於標準品(pin)濃(nong)度非(fei)常(chang)高(gao)，因(yin)此下列稀(xi)釋操(cao)作(zuo)壹定要(yao)在獨立的區(qu)域(yu)進行(xing)，千萬(wan)不能(neng)汙(wu)染(ran)樣品(pin)或本試劑盒的其(qi)他(ta)成分(fen)）。為(wei)增(zeng)加(jia)產品(pin)穩定性和避免擴(kuo)散傳(chuan)染(ran)性(xing)病原，本(ben)產品(pin)不提(ti)供活體(ti)樣品(pin)做(zuo)陽性對(dui)照，只提(ti)供可以直接使(shi)用(yong)的 DNA段(duan)作(zuo)為(wei)陽性對(dui)照。
2. 標記(ji) 6 個離(li)心管(guan)，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)分(fen)別(bie)加(jia)入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模(mo)板(ban)稀釋液(ye)（用(yong)帶(dai)芯槍(qiang)頭(tou)，下同(tong)）。
4. 在 7 號管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
5. 換槍(qiang)頭(tou)，在 6 號管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照(上步(bu)稀(xi)釋所(suo)得)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
6. 換槍(qiang)頭(tou)，在 5 號管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照到(dao) 5 號管(guan)中，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong)，得 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
7. 重復(fu)上(shang)面的操(cao)作(zuo)直到(dao)得到(dao) 6 個稀(xi)釋度的陽性對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上述(shu)樣品(pin)建議經過(guo)增(zeng)菌(jun)後(hou)，收集(ji)培(pei)養(yang)物用(yong)於檢測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可采(cai)用(yong)PCR試劑盒配備(bei)的DNA抽提(ti)液(ye)，按(an)以(yi)下說明(ming)進行(xing)DNA核酸的粗(cu)提(ti)。也(ye)可采(cai)購(gou)上海澤葉生(sheng)物科(ke)技有(you)限公司(si)生產的DNA提(ti)取(qu)試劑盒(過(guo)柱法-熒(ying)光配套(tao))或其他(ta)合適的商業(ye)化產品(pin)，並(bing)按(an)照相應試劑盒說明(ming)進行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物：取(qu)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌(jun)離(li)心管(guan)中，8000rpm離心3min，盡量吸(xi)棄上(shang)清，加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取(qu)上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固體(ti)培(pei)養(yang)物：挑取(qu)單克(ke)隆菌(jun)落(luo)與50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取(qu)上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞便樣品(pin)：挑取(qu)米(mi)粒(li)大(da)小糞(fen)便於滅菌(jun)離(li)心管(guan)中，加(jia)入0.5mL生理(li)鹽水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離心3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取(qu)上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其他(ta)液(ye)體(ti)標本(ben)：取(qu)標本(ben)2-3mL，13000rpm離心3min，棄上(shang)清，沈澱中加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液(ye)充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取(qu)上清(qing)5μL進行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽性對(dui)照和(he)陰性對(dui)照為(wei)已經抽提(ti)好(hao)的核酸(無需提(ti)取(qu))，直接取(qu)5μL加(jia)入到(dao)反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中即可。由於陽性對(dui)照濃(nong)度較(jiao)高(gao)，建議在樣品(pin)制備(bei)區(qu)域加(jia)入陽性對(dui)照。 
實(shi)驗(yan)流程(cheng)：
1. 整個檢(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)應嚴(yan)格按(an)照本(ben)說明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)分(fen)別(bie)在(zai)試劑準備(bei)區(qu)、樣本處(chu)理區(qu)和(he)PCR擴增(zeng)區進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)，各(ge)區實(shi)驗(yan)服(fu)、儀器 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨立使用(yong)，不能(neng)混用(yong)；實(shi)驗(yan)用(yong)吸(xi)頭(tou)采(cai)用(yong)帶(dai)濾芯吸(xi)頭(tou)；樣本處(chu)理區(qu)應(ying)配有(you)生物安(an)全櫃，樣本處(chu)理在(zai)生(sheng)物安(an)全櫃中進行(xing)操(cao)作(zuo)；三(san)個(ge)區應該(gai)配有(you)紫外(wai)線(xian)殺菌(jun)裝(zhuang)置。
2. 為避免RNA降(jiang)解(jie)，樣本處(chu)理過(guo)程(cheng)應在(zai)0-4℃條件(jian)下操作(zuo)，且(qie)完(wan)成(cheng)實(shi)驗(yan)後(hou)立即上機(ji)檢測(ce)；樣本處(chu)理過(guo)程(cheng)中使用(yong)的器具耗(hao)材(cai)應(ying)經(jing)過(guo)無核酶處(chu)理。
3. 每次(ci)實(shi)驗(yan)應該(gai)設置陰、陽性對(dui)照。
4. 試劑盒所(suo)有(you)試劑在使(shi)用(yong)前(qian)應該(gai)在常溫(wen)下充(chong)分(fen)融(rong)化混勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬時(shi)離心。
5. 試劑盒內(nei)所(suo)配陰性和(he)陽性對(dui)照在(zai)壹次(ci)使(shi)用(yong)前(qian)應全(quan)部(bu)轉(zhuan)移至(zhi)標(biao)本準備(bei)區(qu)，並(bing)單(dan)獨存(cun)放。
6. 為防(fang)止熒(ying)光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避免裸(luo)手直接接觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避免在(zai)PCR反(fan)應(ying)管(guan)上(shang)進(jin)行(xing)任(ren)何(he)標(biao)記(ji)。
7. 儀器 擴增(zeng)相關(guan)參(can)數(shu)應按(an)照本(ben)說明(ming)書(shu)相關(guan)要(yao)求(qiu)進行(xing)設(she)置；不同(tong)批(pi)號試劑不能(neng)混用(yong)。
8. ABI系(xi)列熒(ying)光定量PCR儀參(can)數(shu)設置中不選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，淬滅基(ji)因(yin)選(xuan)擇None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)中產品(pin)的廢(fei)棄(qi)物應(ying)該進行(xing)無(wu)害化處理(li)後(hou)方(fang)可丟棄(qi)。
儲(chu)存(cun)條(tiao)件(jian)：
14℃或－20℃樣品(pin)收集(ji)、處(chu)理及(ji)保存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血清(qing)：使用(yong)不含(han)熱原和(he)內(nei)毒(du)素的試管(guan)，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中避免任(ren)何(he)細胞刺(ci)激，收集(ji)血(xue)液(ye)後(hou)，3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和紅細胞(bao)迅速小(xiao)心地分(fen)離(li)。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)酸鹽或肝(gan)素抗凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心30 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。
3. 細胞(bao)上清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物。
4. 組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組織(zhi)加(jia)入適量生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。
5. 保存(cun)：如(ru)果(guo)樣本收集(ji)後(hou)不及(ji)時(shi)檢測(ce)，請按壹次(ci)用(yong)量分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於-20℃，避免反(fan)復(fu)凍融(rong)，在(zai)室(shi)溫(wen)下解凍並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍。
草魚(yu)腎(shen)細胞;GIK檸檬(meng)苦素，黃柏(bai)內(nei)酯(橙皮提(ti)取(qu)) Limonin質量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%,橙皮提(ti)取(qu)

615小鼠滑膜肉瘤(liu)瘤(liu)株;ZM755 小鼠膀(pang)胱(guang)平(ping)滑肌細胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji) 100mL硬脂(zhi)酸(50%)Stearic acid質量規(gui)格(ge)：含(han)量50%，藥(yao)用(yong)級

mRTEC, 小鼠腎(shen)小管(guan)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao) Mouse硬脂(zhi)酸(98%)Stearic acid質量規(gui)格(ge)：含(han)量98%,藥(yao)用(yong)級

EPCAM Others Mouse 小鼠 EpCAM / OP1 / CD326 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照) 牛蒡(bang)苷元(標準(zhun)品(pin))Arctigenin質量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準(zhun)品(pin)

人正(zheng)常上(shang)皮細胞;MCF 10A牛蒡(bang)子苷（標準(zhun)品(pin)）Arctiin質量規(gui)格(ge)：HPLC≥98%，標準(zhun)品(pin)
人肝(gan)癌細胞;SMMC-7721固K鹽Fast Black K Salt質量規(gui)格(ge)：>80%,BR

MG-63細胞(bao)，骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞(bao) 人鼻咽(yan)癌細胞,CNE細胞(bao) CL-0248ZR-75-30(人癌細胞)5×106cells/瓶×2氨(an)基(ji)10BAmido black 10B質量規(gui)格(ge)：AR

中國(guo)倉鼠卵(luan)巢細胞(亞(ya)系(xi)克隆(long));CHO-HCV-NS21-癸烷(wan)磺(huang)酸鈉(na)[離子對色譜(pu)級]IPC-ALKS-10質量規(gui)格(ge)：離(li)子對色譜(pu)用(yong)試劑

VEGFC Others Human 人 VEGF-C 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照) 1-十(shi)壹烷基(ji)磺(huang)酸鈉(na)[離子對色譜(pu)級]IPC-ALKS-11質量規(gui)格(ge)：離(li)子對色譜(pu)用(yong)試劑

肺(fei)動(dong)脈(mai)成(cheng)纖維細胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)1-十(shi)二(er)烷(wan)基(ji)磺(huang)酸鈉(na)[離子對色譜(pu)級]IPC-ALKS-12質量規(gui)格(ge)：離(li)子對色譜(pu)用(yong)試劑
LLC-MK2 恒(heng)河猴腎(shen)細胞鈀(ba)粉(>99%,BR)質量規(gui)格(ge)：>99%,BRPalladium, powder

CM-H027人成(cheng)纖維細胞*培(pei)養(yang)基(ji)100mL乙酸副(fu)品(pin)紅(>85%,BS)質量規(gui)格(ge)：>85%,BSPararosaniline acetate

SKOV3/Taxol-25, 人卵(luan)巢癌耐(nai)藥(yao)細(xi)胞株鈣(gai)激活鉀(jia)通(tong)道(dao)阻(zu)斷劑來源於覃(tan)青(qing)黴(mei)質量規(gui)格(ge)：>98%,BC Paxilline*, from Penicillium paxilli

人骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞(bao);U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS] 大(da)鼠肺(fei)血管(guan)平(ping)滑肌細胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji) 100mL青黴(mei)酸(>98% (HPLC),BC)質量規(gui)格(ge)：>98% (HPLC),BCPenicillic acid

內(nei)膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)（標準(zhun)品(pin)）質量規(gui)格(ge)：HPLC法含(han)量測(ce)定Oxiconazole Nitrate
白(bai)蘞探(tan)針(zhen)法(fa)PCR鑒定試劑盒*人胰(yi)腺癌細胞;AsPC-1甲基(ji)-α-D-半(ban)乳(ru)糖苷100克

VSIG4 Others Mouse 小鼠 VSIG4 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照) 流吩(fen)嗪(-20℃) 5-Mqthylphqnczinium mqthosulfctq 1999/11/6

人胚肺(fei)二(er)倍(bei)體(ti)細胞(bao);KMB-17IMIDAZOLECHROMA.BUFFER,5X,PH7.0咪唑(zuo)層(ceng)析緩(huan)沖(chong)液(ye)蛋白(bai)組學(xue)級100MLCOLD

AGT Others Mouse 小鼠 AGT / SerpinA8 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性對(dui)照) 三(san)乙(yi)酸100毫(hao)克保(bao)存(cun)：-20