法(fa)半(ban)夏(xia)探(tan)針法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書

儲(chu)存(cun)條件：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品(pin)收(shou)集(ji)、處理及保存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血清(qing)：使(shi)用(yong)不含熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試(shi)管，操(cao)作(zuo)過(guo)程中(zhong)避免(mian)任何(he)細(xi)胞(bao)刺激(ji)，收集(ji)血液(ye)後(hou)，3000 轉離心(xin)10 分鐘將(jiang)血清(qing)和(he)紅(hong)細胞(bao)迅(xun)速小心(xin)地分離。
2. 血漿：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽或(huo)肝(gan)素抗凝。3000 轉離心(xin)30 分鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上清(qing)液(ye)：3000 轉離心(xin)10 分鐘去(qu)除(chu)顆粒(li)和(he)聚合(he)物(wu)。
4. 組織勻漿：將組織加(jia)入(ru)適量生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗碎。3000 轉離心(xin)10 分鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保存(cun)：如(ru)果樣(yang)本收(shou)集(ji)後(hou)不及(ji)時檢測(ce)，請按壹(yi)次用(yong)量分裝，凍存於-20℃，避(bi)免(mian)反復(fu)凍融，在室溫(wen)下(xia)解(jie)凍並確(que)保樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地充(chong)分解(jie)凍。

特(te)點：
1. 即(ji)開(kai)即用(yong)，用(yong)戶只(zhi)需要提(ti)供(gong)病(bing)毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根據(ju)地黃保守(shou)序(xu)列(lie)設計的專壹(yi)性引(yin)物(wu)，與相關病(bing)毒(du)無(wu)交叉(cha)反應。
3. 靈(ling)敏(min)度可(ke)以達到幾百拷(kao)貝(bei)/反應。
4. 壹(yi)管(guan)式熒光定(ding)量(liang) PCR 檢(jian)測(ce)，避免後(hou)續汙(wu)染(ran)。
5. 本試(shi)劑盒(he)足夠(gou) 50 次 20μL 反應體(ti)系(xi)的熒光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產品(pin)只(zhi)適用(yong)於科(ke)研，不能(neng)用(yong)於臨(lin)床診斷。

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使(shi)用(yong)方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣(yang)品(pin)采集(ji)：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的采集(ji)與預培(pei)養按照樣(yang)品(pin)的采集(ji)與預培(pei)養按照《食品(pin)衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)檢(jian)驗阪崎(qi)腸桿(gan)菌檢(jian)驗要求(qiu)進行。
2、血液(ye)樣(yang)品(pin)：用(yong)無(wu)菌註射器抽(chou)取(qu)受(shou)檢者靜(jing)脈血2mL，註入(ru)無(wu)菌EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬(meng)酸鈉(na))抗凝管(guan)，立即(ji)混勻。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：取(qu)糞(fen)便置於滅(mie)菌(jun)的收集(ji)管(guan)中(zhong)送檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位(wei)樣(yang)品(pin)：取(qu)發(fa)病(bing)部(bu)位(wei)新鮮滲出物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血送檢。
壹(yi)、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性(xing)對(dui)照（以 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍稀(xi)釋度為(wei)例(li)）
1. 註意(yi)：由於標準(zhun)品(pin)濃度非(fei)常(chang)高(gao)，因此下(xia)列(lie)稀(xi)釋(shi)操(cao)作(zuo)壹定(ding)要(yao)在獨立的區域(yu)進行，千(qian)萬(wan)不(bu)能(neng)汙(wu)染(ran)樣(yang)品(pin)或(huo)本試(shi)劑盒(he)的其(qi)他成(cheng)分）。為增(zeng)加(jia)產品(pin)穩(wen)定(ding)性(xing)和(he)避(bi)免(mian)擴(kuo)散傳(chuan)染性病(bing)原(yuan)，本產品(pin)不(bu)提(ti)供(gong)活(huo)體樣(yang)品(pin)做(zuo)陽(yang)性(xing)對(dui)照，只(zhi)提供(gong)可(ke)以直(zhi)接(jie)使(shi)用(yong)的 DNA段(duan)作(zuo)為陽(yang)性(xing)對(dui)照。
2. 標記 6 個(ge)離(li)心(xin)管(guan)，分別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯(xin)槍頭分別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模(mo)板稀釋(shi)液(ye)（用(yong)帶芯(xin)槍頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得(de)1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照(上(shang)步(bu)稀釋(shi)所得(de))，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照到 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
7. 重復(fu)上面的操作(zuo)直(zhi)到得(de)到 6 個(ge)稀(xi)釋(shi)度的陽(yang)性(xing)對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
註：上(shang)述(shu)樣(yang)品(pin)建議經(jing)過(guo)增(zeng)菌後(hou)，收集(ji)培(pei)養物(wu)用(yong)於檢(jian)測(ce)。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采用(yong)PCR試(shi)劑盒(he)配備(bei)的DNA抽(chou)提液(ye)，按以(yi)下(xia)說(shuo)明進行DNA核(he)酸的粗提(ti)。也可(ke)采購(gou)上(shang)海澤(ze)葉(ye)生(sheng)物(wu)科(ke)技有(you)限(xian)公司(si)生(sheng)產的DNA提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)(過(guo)柱(zhu)法(fa)-熒(ying)光(guang)配套(tao))或(huo)其(qi)他合(he)適的商(shang)業化產品(pin)，並按照相應試(shi)劑盒(he)說(shuo)明進行操作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養物(wu)：取(qu)液(ye)體(ti)培(pei)養物(wu)100μL加(jia)到(dao)1.5mL無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量(liang)吸棄上清(qing)，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行PCR反應。
2、固體培(pei)養物(wu)：挑取(qu)單(dan)克(ke)隆(long)菌(jun)落(luo)與50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行PCR反應。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：挑取(qu)米粒(li)大小糞便於滅(mie)菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混勻，13000rpm離(li)心(xin)3分鐘，棄上清(qing)，沈(chen)澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行PCR反應。
4、其(qi)他液(ye)體(ti)標本：取(qu)標本2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄上清(qing)，沈(chen)澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進行PCR反應。
註：陽(yang)性(xing)對(dui)照和陰(yin)性(xing)對(dui)照為已(yi)經(jing)抽(chou)提好的核(he)酸(無(wu)需提(ti)取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加(jia)入(ru)到反應體(ti)系(xi)中(zhong)即可(ke)。由於陽(yang)性(xing)對(dui)照濃度較(jiao)高(gao)，建議在樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)域加(jia)入(ru)陽(yang)性(xing)對(dui)照。 
ERAP2 Others Human 人 LRAP / ERAP2 人細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 普魯(lu)卡因(yin)（標準(zhun)品(pin)）Chloroprocaine 質量(liang)規(gui)格(ge)：含量測定(ding)

原(yuan)代(dai)平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)特制(zhi)基(ji)礎(chu)培(pei)養基(ji)Many types of cells包(bao)裝：500/250/100ml鹽(yan)酸乙哌(pai)立（標準(zhun)品(pin)）Eperisone 質量(liang)規(gui)格(ge)：含量測定(ding)

PDGFRB Others Human 人 PDGFRB / CD140b 人細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 孕(yun)三(san)1酮(tong)（標準(zhun)品(pin)）Gestrinone質量(liang)規(gui)格(ge)：含量測定(ding)

MDBK (NBL-1) 牛(niu)腎(shen)細(xi)胞(bao)西(xi)尼(ni)地平(標準(zhun)品(pin))Cilnidipine質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC>97%,標準(zhun)品(pin)

CM-H002人肺大動(dong)脈(mai)內(nei)皮(pi)細胞(bao)*培(pei)養基(ji)100mL西(xi)尼(ni)地平Cilnidipine質量(liang)規(gui)格(ge)：>97%,BR,可(ke)用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養
人肺癌細胞(bao);A549 [A-549] 人腦(nao)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)*培(pei)養基(ji) 100mL5-O-去(qu)甲(jia)基(ji)硫(liu)化(hua)物(wu)5-O-Desmethyl Omeprazole Sulfide質量(liang)規(gui)格(ge)：美(mei)國(guo)進口

人肝(gan)竇內(nei)皮(pi)細胞(bao)cDNAHHSEC cDNA Omeprazole質量(liang)規(gui)格(ge)：>99%,USP33,BR,可(ke)用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養

小鼠(shu)胚(pei)胎(tai)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)(MEF-mt)(5×105) （標準(zhun)品(pin)）Omeprazole質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)

大鼠(shu)肝(gan)細胞(bao);IAR20Chlorzoxazone質量(liang)規(gui)格(ge)：>98.5%,BR

小鼠(shu)誘(you)導(dao)性多(duo)潛(qian)能(neng)幹(gan)細(xi)胞(bao);PUMC-mips-A2 小鼠(shu)肝(gan)外膽管(guan)上(shang)皮(pi)細胞(bao)*培(pei)養基(ji) 100mL（標準(zhun)品(pin)）Chlorzoxazone質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)
人星形(xing)膠(jiao)質細(xi)胞(bao) (HA) (1×106 ) 小鼠(shu)皮(pi)層神經(jing)膠(jiao)質細(xi)胞(bao)(EGFP標記) Mouse釩(fan)標準(zhun)溶(rong)液(ye)(100mg/L,基(ji)體(ti):1%HCI)質量(liang)規(gui)格(ge)：100mg/L,基(ji)體(ti):1%HCIVanadium standard

CM-H073人膀胱(guang)成纖維(wei)細胞(bao)*培(pei)養基(ji)100mL鐿(yi)標準(zhun)溶(rong)液(ye)(1000μg/ml)質量(liang)規(gui)格(ge)：1000μg/mlYtterbium standard

TNFRSF10D Others Cynomolgus 食(shi)蟹(xie)猴 AIL R4 / CD264 / TNFRSF10D 人細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照) / 5-氮(dan)雜(za)-2'-脫(tuo)氧(yang)胞(bao)嘧啶(ding)核(he)苷(gan)質量(liang)規(gui)格(ge)：>99.5%,BR,可(ke)用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養Decitabine

人成纖維(wei)母細(xi)胞(bao)-新生(sheng)HDF-n/ 5-氮(dan)雜(za)-2'-脫(tuo)氧(yang)胞(bao)嘧啶(ding)核(he)苷(gan)（標準(zhun)品(pin)）質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)Decitabine

RWPE-1細(xi)胞(bao)，人正(zheng)常前(qian)列(lie)腺上皮(pi)細胞(bao) 小鼠(shu)B細(xi)胞(bao)雜交瘤(liu)細(xi)胞(bao),SH3細(xi)胞(bao) 成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)培(pei)養基(ji)-2(用(yong)於心(xin)肌成(cheng)纖維(wei)細胞(bao))FM-25-氮(dan)雜(za)-2'-脫(tuo)氧(yang)胞(bao)嘧啶(ding)核(he)苷(gan)質量(liang)規(gui)格(ge)：>97%,進分sigma貨號(hao)A3656 5-Aza-2′-deoxycytidine
法(fa)半(ban)夏(xia)探(tan)針法(fa)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書人內(nei)膜(mo)腺癌細胞(bao);HEC-1-B磺(huang)胺二(er)甲(jia)氧(yang)嗪(qin); 磺(huang)胺二(er)甲(jia)氧(yang)基(ji)嘧啶(ding)質量(liang)規(gui)格(ge)：>99%,ARSulfadimethoxine

人成纖維(wei)母細(xi)胞(bao)-(HDF-a)( 5×105 )磺(huang)胺二(er)甲(jia)氧(yang)基(ji)嘧啶(ding)(標準(zhun)品(pin))質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)Sulfadimethoxine

人星形(xing)膠(jiao)質細(xi)胞(bao)奧(ao)斯他偉(wei)酸;羧酸質量(liang)規(gui)格(ge)：>97,BROseltamivir acid

人結直(zhi)腸腺癌細胞(bao);LoVo 大鼠(shu)輸(shu)尿(niao)管上皮(pi)細胞(bao)*培(pei)養基(ji) 100mLalpha-熊果(guo)苷(gan)(標準(zhun)品(pin))質量(liang)規(gui)格(ge)：HPLC≥98%,標準(zhun)品(pin)alpha-Ar
實驗流程(cheng)：
1. 整個(ge)檢(jian)測(ce)過(guo)程應嚴格按照本說(shuo)明書要(yao)求(qiu)分別(bie)在試(shi)劑準(zhun)備(bei)區(qu)、樣(yang)本處理區和PCR擴(kuo)增(zeng)區進行操作(zuo)，各(ge)區實驗服(fu)、儀器(qi) 、耗材應獨(du)立使(shi)用(yong)，不能(neng)混用(yong)；實驗用(yong)吸頭(tou)采用(yong)帶濾(lv)芯吸(xi)頭；樣(yang)本處理區應配(pei)有生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃，樣(yang)本處理在生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃中(zhong)進行操作(zuo)；三(san)個(ge)區(qu)應該(gai)配有(you)紫外(wai)線(xian)殺菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免RNA降(jiang)解(jie)，樣(yang)本處理過(guo)程應在0-4℃條件下(xia)操(cao)作(zuo)，且完(wan)成實驗後(hou)立即(ji)上機(ji)檢(jian)測(ce)；樣(yang)本處理過(guo)程中(zhong)使用(yong)的器具耗材應經(jing)過(guo)無(wu)核(he)酶處理。

3. 每次實驗應該(gai)設置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性(xing)對(dui)照。
4. 試(shi)劑盒(he)所有(you)試(shi)劑在使用(yong)前應該(gai)在常溫(wen)下(xia)充(chong)分融化(hua)混勻，並應瞬(shun)時離心(xin)。
5. 試(shi)劑盒(he)內(nei)所(suo)配陰(yin)性(xing)和(he)陽(yang)性(xing)對(dui)照在壹次使(shi)用(yong)前應全(quan)部(bu)轉移(yi)至標本準(zhun)備(bei)區(qu)，並單(dan)獨存(cun)放(fang)。
6. 為(wei)防(fang)止熒光幹擾(rao)，應避(bi)免裸手(shou)直(zhi)接(jie)接(jie)觸PCR反應管(guan)，並應避(bi)免在PCR反應管(guan)上進行任何(he)標記。
7. 儀器(qi) 擴(kuo)增(zeng)相關(guan)參數應按照本說(shuo)明書相(xiang)關(guan)要求進行設置(zhi)；不(bu)同批(pi)號(hao)試(shi)劑不(bu)能(neng)混用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀參(can)數設置(zhi)中(zhong)不選ROX校(xiao)正(zheng)，淬滅基(ji)因(yin)選擇(ze)None。
9. 實驗過(guo)程中(zhong)產品(pin)的廢棄物應該(gai)進行無(wu)害化處理後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄。