地黃染(ran)料法PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒保(bao)存

實驗流程(cheng)：
1. 整個(ge)檢(jian)測過程(cheng)應嚴(yan)格(ge)按照(zhao)本說(shuo)明(ming)書要求分(fen)別在試(shi)劑(ji)準備(bei)區、樣本(ben)處理(li)區和PCR擴增(zeng)區進行(xing)操作，各區實驗服(fu)、儀器 、耗(hao)材應獨立使(shi)用，不能混(hun)用；實驗用吸(xi)頭采(cai)用帶濾(lv)芯吸(xi)頭；樣本處理(li)區應配(pei)有生物(wu)安(an)全櫃，樣(yang)本(ben)處理(li)在(zai)生物(wu)安(an)全櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操作；三個區應該(gai)配(pei)有紫外(wai)線殺菌裝置(zhi)。
2. 為避免RNA降解，樣本(ben)處理(li)過程(cheng)應在(zai)0-4℃條件(jian)下(xia)操作，且完(wan)成(cheng)實驗後立即上(shang)機(ji)檢(jian)測；樣本(ben)處理(li)過程(cheng)中(zhong)使(shi)用的器具耗(hao)材應經(jing)過無(wu)核酶處理(li)。
3. 每(mei)次(ci)實驗應該(gai)設(she)置(zhi)陰(yin)、陽性對(dui)照。
4. 試(shi)劑(ji)盒所有試劑(ji)在使(shi)用前應該(gai)在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分(fen)融(rong)化(hua)混勻，並應瞬(shun)時(shi)離心。
5. 試(shi)劑(ji)盒內(nei)所配(pei)陰性和(he)陽性對(dui)照在(zai)壹次(ci)使(shi)用前應全(quan)部轉(zhuan)移至標(biao)本準備區，並單獨存放。
6. 為防止熒光(guang)幹擾，應避(bi)免(mian)裸(luo)手直接(jie)接(jie)觸PCR反(fan)應管(guan)，並應避(bi)免(mian)在(zai)PCR反(fan)應管(guan)上(shang)進(jin)行(xing)任何標(biao)記。
7. 儀(yi)器 擴增(zeng)相關參(can)數應按(an)照(zhao)本(ben)說(shuo)明(ming)書相關要求(qiu)進行(xing)設(she)置(zhi)；不同批(pi)號試劑(ji)不能混(hun)用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀(yi)參(can)數設置(zhi)中(zhong)不選(xuan)ROX校(xiao)正，淬滅基因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗過程(cheng)中(zhong)產品的廢棄(qi)物應該(gai)進(jin)行(xing)無(wu)害(hai)化(hua)處理(li)後(hou)方可(ke)丟(diu)棄。

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開即用，用戶只需(xu)要(yao)提供(gong)病毒(du)樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃保(bao)守序列(lie)設計(ji)的專壹性引(yin)物(wu)，與(yu)相關病毒(du)無(wu)交叉反(fan)應。
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可(ke)以(yi)達到(dao)幾百拷(kao)貝(bei)/反(fan)應。
4. 壹管(guan)式(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 檢(jian)測，避免(mian)後續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本(ben)試劑(ji)盒足(zu)夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體系(xi)的熒光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本(ben)產品只適用於科(ke)研，不能用於臨床(chuang)診斷(duan)。
使(shi)用方法(fa)：
壹、樣(yang)品采(cai)集(ji)：
1、食品(pin)樣品：樣品的采(cai)集(ji)與預培(pei)養按(an)照樣(yang)品的采(cai)集(ji)與預培(pei)養按(an)照《食品(pin)衛生微生物(wu)學檢(jian)驗(yan)阪崎(qi)腸桿(gan)菌檢(jian)驗(yan)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血液樣品：用無(wu)菌註射器抽(chou)取受(shou)檢(jian)者(zhe)靜(jing)脈(mai)血2mL，註入(ru)無(wu)菌EDTA2Na(或(huo)檸檬酸鈉)抗(kang)凝(ning)管(guan)，立即混(hun)勻。
3、糞便(bian)樣(yang)品：取糞便(bian)置(zhi)於滅菌的收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部位(wei)樣(yang)品：取發病(bing)部位(wei)新鮮滲(shen)出物、粘(zhan)液(ye)膿血送(song)檢(jian)。
壹、稀(xi)釋 PCR 陽性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀(xi)釋度為例(li)）
1. 註意：由於(yu)標(biao)準品濃度(du)非(fei)常高(gao)，因(yin)此(ci)下(xia)列(lie)稀釋操作壹定(ding)要在(zai)獨立的區域(yu)進行(xing)，千萬(wan)不能汙(wu)染樣(yang)品(pin)或(huo)本(ben)試劑(ji)盒的其他成(cheng)分(fen)）。為增(zeng)加(jia)產品穩定(ding)性和(he)避(bi)免(mian)擴散(san)傳染性病(bing)原，本產品不提供(gong)活體樣(yang)品做陽性對(dui)照，只提供(gong)可以(yi)直接(jie)使(shi)用的 DNA段(duan)作為陽性對(dui)照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離心管(guan)，分(fen)別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分(fen)別加(jia)入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模(mo)板(ban)稀(xi)釋(shi)液（用帶芯槍頭，下(xia)同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
5. 換(huan)槍頭，在 6 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照(上(shang)步(bu)稀釋(shi)所得)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
6. 換(huan)槍頭，在 5 號管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照到(dao) 5 號管(guan)中(zhong)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
7. 重(zhong)復上(shang)面(mian)的操作直到(dao)得到(dao) 6 個(ge)稀釋度的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待(dai)用。
註：上(shang)述樣(yang)品(pin)建(jian)議經(jing)過增(zeng)菌後，收(shou)集(ji)培(pei)養物(wu)用於檢(jian)測。 
二(er)、DNA提取：
可(ke)采(cai)用PCR試(shi)劑(ji)盒配(pei)備的DNA抽(chou)提液，按以(yi)下(xia)說(shuo)明(ming)進行(xing)DNA核(he)酸的粗提。也可采(cai)購(gou)上(shang)海(hai)澤葉生物(wu)科(ke)技有限(xian)公(gong)司生產的DNA提取試(shi)劑(ji)盒(過柱(zhu)法(fa)-熒(ying)光(guang)配(pei)套)或(huo)其他合適的商業(ye)化(hua)產品，並按照(zhao)相(xiang)應試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明(ming)進行(xing)操作。
1、液(ye)體培(pei)養物(wu)：取液(ye)體培(pei)養物(wu)100μL加(jia)到(dao)1.5mL無(wu)菌離心管(guan)中(zhong)，8000rpm離心3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄上(shang)清(qing)，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
2、固(gu)體培(pei)養物(wu)：挑取單(dan)克隆菌落(luo)與50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
3、糞便(bian)樣(yang)品：挑取米粒大(da)小(xiao)糞便(bian)於(yu)滅菌離心管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)0.5mL生理(li)鹽水(shui)，振蕩混(hun)勻，13000rpm離心3分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
4、其(qi)他液體標(biao)本：取標(biao)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱中(zhong)加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應。
註：陽性對(dui)照和(he)陰(yin)性對(dui)照為已(yi)經(jing)抽(chou)提好的核酸(suan)(無(wu)需(xu)提取)，直(zhi)接取5μL加(jia)入(ru)到(dao)反(fan)應體系(xi)中(zhong)即(ji)可。由於(yu)陽性對(dui)照濃度(du)較(jiao)高(gao)，建(jian)議在樣(yang)品(pin)制(zhi)備區域(yu)加(jia)入(ru)陽性對(dui)照。 
人(ren)外(wai)根(gen)殼(ke)細(xi)胞RNAHHORSC miRNA5 μg1酸(suan)西他列(lie)汀(ting)壹水(shui)Sitagliptin phosphate mohydrate質量(liang)規格(ge)：≥98.5%,BR,可(ke)用於細(xi)胞(bao)培(pei)養

CFHR2 Others Human 人(ren) CFHR2 / FHR2 / HFL3 人(ren)細(xi)胞裂解液 (陽性對(dui)照) 1酸(suan)西他列(lie)汀(ting)壹水(shui)（標(biao)準品）Sitagliptin phosphate mohydrate質量(liang)規格(ge)：HPLC>98%,標(biao)準品

人(ren)臍靜(jing)脈(mai)平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞(bao)*培(pei)養基 100mL,鹽(yan)酸Spectimycin  質量(liang)規格(ge)：>95%,BR

BRL大(da)鼠Buffalo細(xi)胞，大(da)鼠肝(gan)細(xi)胞(bao) SH-SY5Y(神(shen)經(jing)母(mu)細胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)) 人(ren)肺(fei)粘(zhan)液(ye)上(shang)皮(pi)樣癌(ai)細(xi)胞(bao);NCI-H292(標(biao)準品)Spectimycin  質量(liang)規格(ge)：含(han)量(liang)測定(ding)

CSF2 Protein Rat 重(zhong)組(zu)大(da)鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白(bai) (His 標(biao)簽)/Tamsulosin  質量(liang)規格(ge)：>98.5%,EP6.5
大(da)鼠肺(fei)細(xi)胞(bao);WL1黴(mei)酚酸(suan); 麥(mai)考酚酸(suan);MPA質量(liang)規格(ge)：>98%,BRMycophelic acid

TFPI2 Others Mouse 小(xiao)鼠 TFPI2 / PP5 人(ren)細(xi)胞裂解液 (陽性對(dui)照) 黴(mei)酚酸(suan); 麥(mai)考酚酸(suan)（標(biao)準品）質量(liang)規格(ge)：HPLC>97%,標(biao)準品Mycophelic acid

KU812 人(ren)外(wai)周血嗜堿性白(bai)血病細胞質量(liang)規格(ge)：>99%,BRMepivacaine HCl

MS751人(ren)頸(jing)表(biao)皮(pi)癌(ai)細(xi)胞(bao) MS751 human cervical epidermoid carcima cells MEM培(pei)養基(GIBCO)+10%FBS安(an)普那(na)韋 質量(liang)規格(ge)：>97%Amprenavir

HGF Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小(xiao)鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白(bai)魯比(bi)替(ti)康; 9-硝基質量(liang)規格(ge)：>99%Rubitecan
HA Others H5N1 甲(jia)型流(liu)感(gan) H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝(ning)素 (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細(xi)胞裂解液 (陽性對(dui)照) 醋(cu)酸(suan)鋰，二(er)水(shui)(AR)Lithium acetate dihydrate質量(liang)規格(ge)：>99%,AR

人(ren)腦靜(jing)脈(mai)血管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao)*培(pei)養基 100mL聚(ju)蔗糖(tang)400Ficol 400質量(liang)規格(ge)：>98%,BR

BSC-1細(xi)胞，猴(hou)腎細胞系(xi) CHRF(人(ren)巨核細(xi)胞(bao)白(bai)血病) 敘(xu)利(li)亞倉鼠腎細胞;BHK-21二(er)硝基水(shui)楊(yang)酸(suan)3,5-Dinitrosalicylic acid質量(liang)規格(ge)：>98%,BR

EFNA5 Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小(xiao)鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白(bai) (His 標(biao)簽)丙(bing)二(er)酸(suan)鈉 malonate質量(liang)規格(ge)：>98%

BC-022(人(ren)癌(ai)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 小(xiao)鼠漿(jiang)細(xi)胞瘤(liu);MPC-111酸(suan)二(er)氫(qing)鈉二(er)水(shui) phosphate, mobasic, dihydrate質量(liang)規格(ge)：>98.5%,分(fen)子(zi)生物(wu)學級
地黃染(ran)料法PCR鑒定(ding)試劑(ji)盒保(bao)存NHDF-c adult 正(zheng)常人(ren)皮(pi)膚(fu)成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)(NHDF)來(lai)自(zi)成(cheng)年捐(juan)獻者(zhe) 500,000cells 成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105方(fang)(1ml)尿(niao)苷二(er)嶙(lin)酸葡糖醛(quan)酸1克RT

內(nei)臟脂(zhi)肪(fang)細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(fang)(1ml)6-錄嘌(piao)呤(ling) 6-Chloropurinq 1987/4/3

TFPI2 Others Mouse 小(xiao)鼠 TFPI2 / PP5 人(ren)細(xi)胞裂解液 (陽性對(dui)照) EDTADIwo7iumSALTDIHYDRATE乙二(er)安(an)四(si)乙酸二(er)
儲(chu)存條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣(yang)品收(shou)集(ji)、處理(li)及保(bao)存方法(fa)
1. 血清(qing)：使(shi)用不含(han)熱原和內毒素的試管(guan)，操作過程(cheng)中(zhong)避(bi)免任何細胞(bao)刺激(ji)，收(shou)集(ji)血液後，3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血清(qing)和紅(hong)細胞(bao)迅速(su)小(xiao)心地分(fen)離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝(gan)素抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心30 分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞上(shang)清(qing)液：3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆粒和聚(ju)合物(wu)。
4. 組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)：將組(zu)織(zhi)加(jia)入(ru)適量(liang)生理(li)鹽水(shui)搗碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心10 分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清(qing)。
5. 保(bao)存：如(ru)果(guo)樣(yang)本(ben)收(shou)集(ji)後不及時檢(jian)測，請按壹次(ci)用量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存於-20℃，避(bi)免反(fan)復凍融(rong)，在室溫下(xia)解凍並確(que)保(bao)樣(yang)品均(jun)勻地充(chong)分(fen)解凍。