獨(du)活(huo)PCR鑒定(ding)試(shi)劑(ji)盒*

儲存條(tiao)件：
14℃或(huo)－20℃樣品收(shou)集(ji)、處理(li)及保(bao)存方法(fa)
1. 血(xue)清(qing)：使用(yong)不(bu)含熱(re)原(yuan)和內毒素(su)的試(shi)管，操(cao)作過(guo)程(cheng)中(zhong)避免(mian)任何(he)細胞刺激(ji)，收(shou)集(ji)血液(ye)後，3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)將(jiang)血清(qing)和紅(hong)細胞迅(xun)速(su)小(xiao)心地分離。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽(yan)或肝素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心30 分鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒(li)和聚合(he)物(wu)。
4. 組織勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組織加入適(shi)量生理(li)鹽(yan)水搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心10 分鐘(zhong)取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保(bao)存：如果樣本(ben)收(shou)集(ji)後不(bu)及時(shi)檢測(ce)，請(qing)按壹次(ci)用(yong)量分裝(zhuang)，凍(dong)存於-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融，在室溫下(xia)解(jie)凍並確(que)保樣品均(jun)勻(yun)地充分解(jie)凍。

特(te)點：
1. 即開即用，用(yong)戶(hu)只(zhi)需要提供(gong)病毒樣品。
2. 根(gen)據(ju)地黃保守(shou)序列設(she)計的(de)專壹性(xing)引物(wu)，與相關病(bing)毒無(wu)交叉反(fan)應。
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可(ke)以(yi)達到(dao)幾百(bai)拷貝/反(fan)應。
4. 壹(yi)管式(shi)熒(ying)光定(ding)量 PCR 檢測(ce)，避免(mian)後續(xu)汙染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反(fan)應體(ti)系的熒(ying)光定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產(chan)品(pin)只(zhi)適用(yong)於科研(yan)，不(bu)能用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷。

使用(yong)方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣品采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品樣品：樣品的(de)采集(ji)與預(yu)培(pei)養按照(zhao)樣品的(de)采集(ji)與預(yu)培(pei)養按照(zhao)《食(shi)品(pin)衛生(sheng)微生(sheng)物(wu)學(xue)檢驗(yan)阪(ban)崎腸(chang)桿菌(jun)檢驗(yan)要(yao)求(qiu)進行。
2、血(xue)液(ye)樣品：用(yong)無(wu)菌(jun)註(zhu)射(she)器抽取(qu)受(shou)檢者(zhe)靜(jing)脈(mai)血2mL，註(zhu)入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬酸(suan)鈉(na))抗(kang)凝(ning)管，立即混勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣品：取(qu)糞(fen)便(bian)置(zhi)於滅菌(jun)的(de)收(shou)集(ji)管中(zhong)送(song)檢。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位(wei)樣品：取(qu)發病(bing)部(bu)位(wei)新鮮(xian)滲出(chu)物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血送(song)檢。
壹(yi)、稀(xi)釋 PCR 陽(yang)性(xing)對照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷(kao)貝/μL 這 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋度(du)為(wei)例）
1. 註(zhu)意(yi)：由(you)於標準品(pin)濃度非(fei)常高(gao)，因此下(xia)列(lie)稀(xi)釋操(cao)作壹(yi)定(ding)要(yao)在獨(du)立的區(qu)域進行，千(qian)萬(wan)不(bu)能汙(wu)染樣品或(huo)本(ben)試(shi)劑(ji)盒的(de)其(qi)他成分）。為(wei)增加產(chan)品穩(wen)定(ding)性(xing)和避免(mian)擴散(san)傳(chuan)染(ran)性(xing)病原(yuan)，本(ben)產(chan)品(pin)不(bu)提供(gong)活(huo)體(ti)樣品做(zuo)陽性(xing)對照(zhao)，只(zhi)提供(gong)可(ke)以(yi)直(zhi)接使用(yong)的(de) DNA段作為(wei)陽(yang)性(xing)對照(zhao)。
2. 標記 6 個離心管，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯槍頭(tou)分別(bie)加入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板稀(xi)釋液(ye)（用帶芯槍頭(tou)，下(xia)同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)(上(shang)步稀(xi)釋所(suo)得)，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)到(dao) 5 號管中，充分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
7. 重(zhong)復上面的操作直(zhi)到(dao)得到(dao) 6 個稀(xi)釋度(du)的(de)陽性(xing)對照(zhao)。放(fang)冰(bing)上待(dai)用。
註(zhu)：上述(shu)樣品建議經(jing)過(guo)增菌(jun)後(hou)，收(shou)集(ji)培(pei)養物(wu)用於(yu)檢測(ce)。 
二、DNA提(ti)取：
可(ke)采用(yong)PCR試(shi)劑(ji)盒配(pei)備(bei)的(de)DNA抽(chou)提液(ye)，按以(yi)下(xia)說(shuo)明進行DNA核(he)酸(suan)的粗(cu)提(ti)。也(ye)可(ke)采購上海(hai)澤(ze)葉(ye)生(sheng)物(wu)科技(ji)有限(xian)公(gong)司(si)生(sheng)產的(de)DNA提(ti)取試劑(ji)盒(過(guo)柱法(fa)-熒(ying)光配套(tao))或(huo)其(qi)他合適(shi)的(de)商(shang)業(ye)化(hua)產品，並按照(zhao)相應試劑(ji)盒說(shuo)明進行操作。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養物(wu)：取液(ye)體(ti)培(pei)養物(wu)100μL加到(dao)1.5mL無(wu)菌(jun)離心管中，8000rpm離心3min，盡(jin)量吸棄上(shang)清(qing)，加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
2、固(gu)體(ti)培(pei)養物(wu)：挑取(qu)單(dan)克(ke)隆(long)菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便(bian)樣品：挑(tiao)取米粒(li)大小(xiao)糞(fen)便(bian)於滅(mie)菌(jun)離心管中，加入0.5mL生(sheng)理鹽(yan)水，振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離心3分鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心3min取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
4、其(qi)他液(ye)體(ti)標本(ben)：取(qu)標本(ben)2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上清(qing)，沈澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽(chou)提液(ye)充分混(hun)勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心3min取(qu)上清(qing)5μL進行PCR反(fan)應。
註(zhu)：陽性(xing)對照(zhao)和陰(yin)性(xing)對照(zhao)為(wei)已(yi)經(jing)抽(chou)提(ti)好的(de)核(he)酸(suan)(無(wu)需提取)，直(zhi)接取5μL加入到(dao)反(fan)應體(ti)系中即可(ke)。由(you)於陽(yang)性(xing)對照(zhao)濃(nong)度(du)較高(gao)，建議在樣品制備區(qu)域加入陽(yang)性(xing)對照(zhao)。 
HUVEC, 人臍靜(jing)脈(mai)內皮(pi)細胞 Uracil 質(zhi)量規格：>99%,可(ke)用於(yu)細(xi)胞培(pei)養

人B母(mu)細胞;HMy2.CIR 人前列(lie)腺(xian)平滑肌(ji)細胞*培(pei)養基 100mL胞嘧(mi)啶(ding) Cytosine 質(zhi)量規格：>99%,BR

人正常肝細(xi)胞;L-02胞嘧(mi)啶(ding)(標準品(pin))Cytosine 質(zhi)量規格：HPLC>98%,標準品(pin)

DDR1 Others Mouse 小(xiao)鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 桿(gan)狀病毒-昆(kun)蟲細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 硫酸(suan)腺(xian)嘌呤(ling) Adenine sulfate 質(zhi)量規格：>99%,BR,可(ke)用於(yu)細(xi)胞培(pei)養

CL-0340GH3(大鼠垂(chui)體(ti)瘤(liu)細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2硫酸(suan)腺(xian)嘌呤(ling)(標準品(pin))Adenine sulfate 質(zhi)量規格：HPLC>98%,標準品(pin)
IFNA13 Protein Cymolgus 重(zhong)組食蟹猴 IFNA13 / Ierferon alpha-13 蛋(dan)白(bai) (His 標簽(qian))1-甲(jia)基吲(yin)唑-3-羧(suo)酸（格拉司瓊(qiong)雜(za)質(zhi)D）1-Methylindazole-3-carboxylic Acid (Granisetron Impurity D)質(zhi)量規格：美國(guo)進口

IR983F(大鼠骨(gu)髓(sui)瘤(liu)細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 多形(xing)擬桿(gan)菌(jun)endo-9-甲(jia)基-9-氮雜(za)雙環[3.3.1]壬(ren)烷-3-胺(an)（格拉司瓊(qiong)雜(za)質(zhi)F）endo-9-Methyl-9-azabicyclo[3.3.1]nan-3-amine ( Granisetron Impurity E)質(zhi)量規格：美國(guo)進口

肺(fei)大動脈(mai)平滑肌(ji)細胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)19-去(qu)甲-4-雄(xiong)1二酮randrostenedione質(zhi)量規格：>99%,BR

CDC37 Others Human 人 CDC37 / CDC37A 桿(gan)狀病毒-昆(kun)蟲細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 壹(yi)水 ;達格列嗪水合(he)物(wu)Dapagliflozin propanediol hydrate質(zhi)量規格：>99%

人神經(jing)母(mu)細胞瘤(liu)細(xi)胞;BE(2)-M17安塞曲(qu)匹/膽(dan)脂轉(zhuan)移蛋(dan)白(bai)阻滯(zhi)劑(ji)Anacetrapib;MK0859質(zhi)量規格：>98%
Li-7人肝癌細胞 Li-7 human hepatocarcima cells 1640+10%FBS反(fan)式(shi)-羧(suo)基質(zhi)量規格：美國(guo)進口trans-Carboxy Glimepiride

RSPO1 Protein Human 重(zhong)組人 R-Spondin 1 / RSPO1 蛋(dan)白(bai) (His 標簽(qian))-13C,d3質(zhi)量規格：美國(guo)進口Griseofulvin-13C,d3

人骨骼(ge)肌(ji)成肌(ji)細胞(HSkMM)(5×105) 小(xiao)鼠骨(gu)髓(sui)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細(xi)胞(BMSCs) Mouse多聚(ju)己糖透(tou)明質(zhi)酸(suan)質(zhi)量規格：美國(guo)進口Hyaluronate Hexasaccharide

中(zhong)國(guo)倉鼠肺(fei)細(xi)胞;V79透(tou)明質(zhi)酸(suan)四糖質(zhi)量規格：美國(guo)進口Hyaluronate Tetrasaccharide

COL5A2 Others Human 人 COL5A2 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 順(shun)式(shi)白(bai)藜(li)蘆醇(chun)質(zhi)量規格：美國(guo)進口cis-Resveratrol
獨(du)活(huo)PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒*IL13RA2 Others Mouse 小(xiao)鼠 IL13RA2 / CD213A2 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) Erbium(III)oxide氧(yang)化鉺(III)100毫升AR，98%

人毛(mao)細(xi)胞HHDPC1,3-炳(bing)二醇(chun);1,3-二羌基炳(bing)烷(wan) 1,3-Propcnqdiol;TriMqthylqnq glycol 204-63-

HA Others H1N1 甲(jia)型流(liu)感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) HA 人細胞裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 錄(lu)化(hua)酰(xian)膽(dan)減，98% Mqthccholinq Chloridq (
實(shi)驗流(liu)程(cheng)：
1. 整個檢測(ce)過(guo)程(cheng)應嚴格按照(zhao)本(ben)說(shuo)明書要求(qiu)分別(bie)在試劑(ji)準備(bei)區(qu)、樣本(ben)處理(li)區(qu)和PCR擴增區(qu)進行操作，各區(qu)實驗(yan)服(fu)、儀器 、耗材(cai)應獨(du)立使用(yong)，不(bu)能混(hun)用；實(shi)驗(yan)用(yong)吸頭(tou)采用(yong)帶濾(lv)芯吸頭(tou)；樣本(ben)處理(li)區(qu)應配有生(sheng)物(wu)安全櫃，樣本(ben)處理(li)在生物(wu)安全櫃中(zhong)進行操作；三(san)個區(qu)應該配(pei)有紫(zi)外(wai)線(xian)殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣本(ben)處理(li)過(guo)程(cheng)應在0-4℃條(tiao)件下(xia)操(cao)作，且完成實(shi)驗(yan)後立即上機(ji)檢測(ce)；樣本(ben)處理(li)過(guo)程(cheng)中(zhong)使用(yong)的(de)器具耗材(cai)應經(jing)過(guo)無(wu)核(he)酶處理(li)。

3. 每(mei)次實驗應該設(she)置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性(xing)對照(zhao)。
4. 試(shi)劑(ji)盒所(suo)有試(shi)劑(ji)在使用(yong)前(qian)應該在常溫(wen)下(xia)充分融(rong)化(hua)混(hun)勻(yun)，並(bing)應瞬時(shi)離心。
5. 試(shi)劑(ji)盒內(nei)所(suo)配陰(yin)性(xing)和陽性(xing)對照(zhao)在壹次使用(yong)前(qian)應全部(bu)轉(zhuan)移至標本(ben)準備(bei)區(qu)，並單(dan)獨(du)存放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒光幹(gan)擾(rao)，應避免(mian)裸(luo)手直(zhi)接接觸PCR反(fan)應管，並(bing)應避免(mian)在PCR反(fan)應管上(shang)進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參(can)數應按照(zhao)本(ben)說(shuo)明書相關要(yao)求(qiu)進行設置(zhi)；不(bu)同批(pi)號試劑(ji)不(bu)能混(hun)用。
8. ABI系列熒(ying)光定(ding)量PCR儀參(can)數設(she)置(zhi)中不(bu)選ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基因選(xuan)擇None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中(zhong)產品(pin)的廢(fei)棄物(wu)應該進行無(wu)害化(hua)處理(li)後方(fang)可(ke)丟棄。