地黃(huang)探(tan)針法PCR鑒(jian)定(ding)試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書(shu)

特點(dian)：
1. 即開(kai)即用(yong)，用(yong)戶(hu)只(zhi)需(xu)要(yao)提(ti)供病(bing)毒(du)樣(yang)品。
2. 根(gen)據地黃(huang)保(bao)守序(xu)列設計(ji)的(de)專壹性(xing)引物(wu)，與相關病毒無交(jiao)叉(cha)反應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可以達到(dao)幾百(bai)拷貝/反應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 檢(jian)測，避(bi)免(mian)後(hou)續汙染。
5. 本試劑(ji)盒足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反應(ying)體(ti)系(xi)的熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本產品只適用(yong)於科研(yan)，不(bu)能(neng)用(yong)於臨(lin)床診斷(duan)。

使(shi)用(yong)方(fang)法：
壹(yi)、樣(yang)品采(cai)集(ji)：
1、食(shi)品樣(yang)品：樣(yang)品的采集(ji)與(yu)預培養(yang)按(an)照樣品的采集與預培養(yang)按(an)照《食(shi)品衛(wei)生微(wei)生物(wu)學檢(jian)驗(yan)阪崎腸桿菌檢(jian)驗(yan)要(yao)求(qiu)進行。
2、血(xue)液(ye)樣品：用(yong)無菌(jun)註射器抽(chou)取受檢(jian)者靜脈(mai)血(xue)2mL，註入無菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬酸(suan)鈉)抗(kang)凝(ning)管，立(li)即混勻。
3、糞便(bian)樣(yang)品：取糞便(bian)置(zhi)於滅(mie)菌的(de)收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)送檢(jian)。
4、病(bing)竈部(bu)位樣品(pin)：取發病部(bu)位新鮮(xian)滲出(chu)物(wu)、粘液(ye)膿(nong)血送檢(jian)。
壹(yi)、稀(xi)釋(shi) PCR 陽(yang)性(xing)對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這(zhe) 6 個 10 倍(bei)稀(xi)釋(shi)度為例）
1. 註意(yi)：由(you)於(yu)標準(zhun)品(pin)濃(nong)度非(fei)常(chang)高(gao)，因此下(xia)列稀(xi)釋(shi)操作壹定(ding)要(yao)在(zai)獨(du)立(li)的區(qu)域(yu)進行，千萬不(bu)能(neng)汙染樣(yang)品或本試劑(ji)盒的其(qi)他(ta)成分）。為增(zeng)加產品穩定(ding)性(xing)和避(bi)免(mian)擴散(san)傳(chuan)染(ran)性(xing)病原(yuan)，本產品不(bu)提(ti)供活(huo)體(ti)樣(yang)品做陽(yang)性(xing)對照，只提(ti)供可(ke)以直接(jie)使(shi)用(yong)的 DNA段作為陽(yang)性(xing)對照。
2. 標(biao)記 6 個離心管，分別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍頭分別(bie)加(jia)入 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模(mo)板稀(xi)釋(shi)液(ye)（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍頭，下(xia)同）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放冰上(shang)待用(yong)。
5. 換(huan)槍頭，在 6 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照(上(shang)步(bu)稀(xi)釋(shi)所得(de))，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放冰上(shang)待用(yong)。
6. 換(huan)槍頭，在 5 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照到(dao) 5 號(hao)管(guan)中，充(chong)分震蕩(dang) 1 分鐘，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對照。放冰上(shang)待用(yong)。
7. 重復上(shang)面的(de)操(cao)作(zuo)直到(dao)得(de)到(dao) 6 個稀(xi)釋(shi)度的陽(yang)性(xing)對照。放冰上(shang)待用(yong)。
註：上(shang)述樣(yang)品建(jian)議(yi)經(jing)過(guo)增(zeng)菌後(hou)，收集(ji)培養(yang)物(wu)用(yong)於檢(jian)測。 
二(er)、DNA提(ti)取：
可(ke)采(cai)用(yong)PCR試劑(ji)盒配(pei)備的DNA抽(chou)提(ti)液(ye)，按以下(xia)說(shuo)明(ming)進行DNA核(he)酸(suan)的粗(cu)提(ti)。也(ye)可采(cai)購上(shang)海澤葉(ye)生(sheng)物(wu)科技有(you)限公(gong)司生(sheng)產的DNA提(ti)取試劑(ji)盒(過(guo)柱法-熒(ying)光(guang)配(pei)套)或其(qi)他(ta)合適的(de)商業化(hua)產品，並按照相應(ying)試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)進行操作(zuo)。
1、液(ye)體培養(yang)物(wu)：取液(ye)體培養(yang)物(wu)100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌(jun)離心管中，8000rpm離心3min，盡(jin)量(liang)吸棄(qi)上(shang)清(qing)，加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培養(yang)物(wu)：挑取單克隆(long)菌(jun)落與50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min，取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反應(ying)。
3、糞便(bian)樣(yang)品：挑取米粒大小糞便(bian)於(yu)滅(mie)菌離心管中，加(jia)入0.5mL生(sheng)理鹽水，振(zhen)蕩(dang)混勻，13000rpm離心3分鐘，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反應(ying)。
4、其(qi)他(ta)液(ye)體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中(zhong)加入50μL DNA抽(chou)提(ti)液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心3min取上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反應(ying)。
註：陽(yang)性(xing)對照和陰性(xing)對照為已經抽提(ti)好(hao)的(de)核(he)酸(suan)(無需(xu)提(ti)取)，直(zhi)接(jie)取5μL加(jia)入到(dao)反應(ying)體(ti)系(xi)中即可。由(you)於(yu)陽(yang)性(xing)對照濃度較(jiao)高(gao)，建(jian)議(yi)在(zai)樣(yang)品制(zhi)備區(qu)域(yu)加入陽(yang)性(xing)對照。 
實(shi)驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1. 整(zheng)個檢(jian)測過(guo)程(cheng)應(ying)嚴(yan)格按(an)照本說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)分別(bie)在(zai)試劑(ji)準(zhun)備(bei)區(qu)、樣本處理區(qu)和PCR擴(kuo)增(zeng)區(qu)進行操作(zuo)，各區(qu)實驗(yan)服(fu)、儀(yi)器(qi) 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨(du)立(li)使(shi)用(yong)，不(bu)能(neng)混用(yong)；實驗(yan)用(yong)吸頭(tou)采(cai)用(yong)帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣(yang)本處理區(qu)應(ying)配(pei)有生物(wu)安全(quan)櫃(gui)，樣本處理在生(sheng)物(wu)安全(quan)櫃(gui)中進行操作(zuo)；三個區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有紫外線(xian)殺菌裝(zhuang)置。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣本處理過(guo)程(cheng)應(ying)在(zai)0-4℃條件(jian)下(xia)操(cao)作(zuo)，且(qie)完(wan)成(cheng)實(shi)驗(yan)後(hou)立(li)即上(shang)機檢(jian)測；樣(yang)本處理過(guo)程(cheng)中使(shi)用(yong)的器(qi)具(ju)耗(hao)材(cai)應(ying)經(jing)過(guo)無核(he)酶處理。
3. 每次(ci)實(shi)驗(yan)應(ying)該(gai)設置陰、陽(yang)性(xing)對照。
4. 試劑(ji)盒所有試劑(ji)在使(shi)用(yong)前應(ying)該(gai)在常溫(wen)下(xia)充(chong)分融化(hua)混(hun)勻，並應(ying)瞬(shun)時(shi)離心。
5. 試劑(ji)盒內所配(pei)陰性(xing)和陽(yang)性(xing)對照在壹次(ci)使(shi)用(yong)前應(ying)全(quan)部轉移至(zhi)標本準(zhun)備(bei)區(qu)，並單獨(du)存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止熒(ying)光(guang)幹(gan)擾(rao)，應(ying)避(bi)免(mian)裸手直接接觸(chu)PCR反應(ying)管(guan)，並應(ying)避(bi)免(mian)在PCR反應(ying)管(guan)上(shang)進(jin)行任何標記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增(zeng)相關參數應(ying)按(an)照本說(shuo)明(ming)書(shu)相關要(yao)求(qiu)進行設置(zhi)；不(bu)同批號(hao)試劑(ji)不(bu)能(neng)混用(yong)。
8. ABI系(xi)列熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀(yi)參(can)數設(she)置(zhi)中不(bu)選(xuan)ROX校正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基(ji)因(yin)選(xuan)擇None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)中產品的廢棄(qi)物(wu)應(ying)該(gai)進行無害(hai)化(hua)處理後(hou)方(fang)可(ke)丟(diu)棄(qi)。
儲(chu)存(cun)條件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品(pin)收集(ji)、處理及(ji)保(bao)存(cun)方(fang)法
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱原(yuan)和內毒素(su)的(de)試管，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中避(bi)免(mian)任何細(xi)胞刺(ci)激(ji)，收(shou)集(ji)血液(ye)後(hou)，3000 轉(zhuan)離心10 分鐘將血(xue)清和紅細(xi)胞迅(xun)速(su)小心地分離。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽或肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心30 分鐘取上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離心10 分鐘去(qu)除(chu)顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物(wu)。
4. 組織(zhi)勻漿：將組織(zhi)加(jia)入適量(liang)生(sheng)理鹽水搗碎。3000 轉(zhuan)離心10 分鐘取上(shang)清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如果(guo)樣本收(shou)集(ji)後(hou)不(bu)及(ji)時(shi)檢(jian)測，請(qing)按壹(yi)次(ci)用(yong)量分裝(zhuang)，凍存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反復凍融(rong)，在(zai)室溫(wen)下(xia)解(jie)凍並(bing)確(que)保(bao)樣(yang)品均(jun)勻地充(chong)分解凍。
T-24(人膀(pang)胱癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 甲(jia)型流感 H5N1 (A/common magpie/Hong Kong/5052/2007) 血(xue)凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 1酸(suan)三戊(wu)酯(zhi)(>98.0%(GC))Triamyl Phosphate質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98.0%(GC)

人外(wai)根殼(ke)細(xi)胞cDNAHHORSC cDNA三(san)(2-氯乙基(ji))1酸(suan)酯(zhi)(>97.0%(GC))Tris(2-chloroethyl) Phosphate質(zhi)量(liang)規(gui)格：>97.0%(GC)

SELP Others Rat 大(da)鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 1酸(suan)三(1,3-二(er)氯-2-丙(bing)基(ji))酯(zhi)(>95.0%(GC))Tris(1,3-dichloro-2-propyl) Phosphate質(zhi)量(liang)規(gui)格：>95.0%(GC)

小鼠腹水瘤細(xi)胞;S-1801酸(suan)三(2-正(zheng)丁(ding)氧(yang)乙基(ji))酯(zhi)(>95.0%(GC))Tris(2-butoxyethyl) Phosphate質(zhi)量(liang)規(gui)格：>95.0%(GC)

小鼠誘導(dao)性(xing)多潛(qian)能(neng)幹細(xi)胞;PUMC-mips-B4 I型膠原(yuan)酶(含(han)10mL酶解緩(huan)沖液(ye)) 1mL1酸(suan)2-乙基(ji)己(ji)基(ji)二(er)苯酯(zhi)(>90.0%(GC))2-Ethylhexyl Diphenyl Phosphate質(zhi)量(liang)規(gui)格：>90.0%(GC)
小小腦星形膠質(zhi)細(xi)胞(MA-c)(5×105) MG-63, 人骨肉(rou)瘤細(xi)胞 Human泊洛(luo)沙(sha)姆407質(zhi)量(liang)規(gui)格：M.W12000，進(jin)口(kou)BASF分包(bao)Polyethylene-polypropylene glycol

大(da)鼠肺泡(pao)上(shang)皮(pi)細(xi)胞RPAEpiC1酸(suan)長春(chun)質堿(jian)質量規(gui)格：>95%,BRCatharanthine hemitartrate

ENPP2 Others Mouse 小鼠 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) (標(biao)準(zhun)品(pin))質(zhi)量(liang)規(gui)格：含(han)量測(ce)定(ding)Meclofexate HCl

HEL2 人胚(pei)胎肺成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(女(nv))質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%,BR,USP31Megestrol Acetate

CM-R067大(da)鼠腎足突細(xi)胞*培養(yang)基(ji)100mL（標(biao)準(zhun)品(pin)）質(zhi)量(liang)規(gui)格：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)Megestrol Acetate
HA Others H5N1 甲(jia)型流感 H5N1 (A/Cambodia/R0405050/2007) 血(xue)凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98.5%,USP31Nizatidine

CL-0444SNU-5(人胃(wei)癌細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2羧(suo)甲(jia)基(ji)纖(xian)維素(su)質(zhi)量(liang)規(gui)格：粘度(1%,25℃) ≥500 mpa.sCarboxymethyl cellulose

LCK Others Human 人 Lck Kinase 桿狀(zhuang)病(bing)毒(du)-昆蟲細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 氟(fu)達(da)拉賓(bin)質(zhi)量規(gui)格：≥99.0%,BRFludarabine

人支(zhi)氣管平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞RNAHBSMC miRNA5 μg（標(biao)準(zhun)品(pin)）質(zhi)量(liang)規(gui)格：HPLC>98%,標(biao)準(zhun)品(pin)Amiglutethimide

WISH細(xi)胞，羊膜(mo)細(xi)胞 人肺癌(ai)細(xi)胞,A-427細(xi)胞 rCSC, 大(da)鼠心肌細(xi)胞質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%,USP29Flutamide
地黃(huang)探(tan)針法PCR鑒(jian)定(ding)試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書(shu)人胰(yi)腺癌細(xi)胞;AsPC-15’-DMT-2’-TBDMS-iBu-rG質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%,BR5’-DMT-2’-TBDMS-iBu-rG

CD48 Others Rat 大(da)鼠 CD48 / SLAMF2 / BCM1 人細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照) 5’-DMT-2’-TBDMS-Ac-rC質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%,BR5’-DMT-2’-TBDMS-Ac-rC

兔(tu)骨髓(sui)間(jian)質幹細(xi)胞 Rabbit bone marrow mesenchymal stem cells5’-DMT-2’-TBDMS-Bz-rA質(zhi)量(liang)規(gui)格：