槐(huai)角(jiao)探(tan)針(zhen)法PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書(shu)

實(shi)驗(yan)流程：
1. 整(zheng)個(ge)檢(jian)測(ce)過程應嚴格按照(zhao)本說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)分(fen)別(bie)在試劑(ji)準備區(qu)、樣本(ben)處(chu)理(li)區(qu)和PCR擴(kuo)增區(qu)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)，各區(qu)實(shi)驗(yan)服、儀器 、耗(hao)材應(ying)獨立使用(yong)，不能(neng)混用(yong)；實驗(yan)用(yong)吸頭(tou)采用(yong)帶(dai)濾(lv)芯吸頭(tou)；樣本(ben)處(chu)理(li)區(qu)應(ying)配(pei)有(you)生(sheng)物(wu)安全櫃，樣本(ben)處(chu)理(li)在生(sheng)物(wu)安全櫃中進(jin)行操作(zuo)；三個(ge)區(qu)應(ying)該配有(you)紫(zi)外(wai)線(xian)殺菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程應在0-4℃條(tiao)件下操作(zuo)，且完(wan)成實驗(yan)後立即(ji)上機(ji)檢(jian)測(ce)；樣本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程中使用(yong)的器具耗(hao)材應(ying)經過無核(he)酶(mei)處理(li)。
3. 每(mei)次(ci)實(shi)驗(yan)應該設(she)置(zhi)陰、陽(yang)性(xing)對照(zhao)。
4. 試劑(ji)盒所有試劑(ji)在使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)該在常溫(wen)下充分(fen)融化混勻(yun)，並(bing)應(ying)瞬(shun)時離心(xin)。
5. 試劑(ji)盒內(nei)所配陰性(xing)和陽性對照(zhao)在壹(yi)次(ci)使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)全部轉移(yi)至標本(ben)準備區(qu)，並(bing)單(dan)獨(du)存(cun)放(fang)。
6. 為(wei)防(fang)止熒光(guang)幹(gan)擾(rao)，應避免(mian)裸(luo)手(shou)直(zhi)接接觸(chu)PCR反應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避免(mian)在PCR反應(ying)管(guan)上(shang)進(jin)行(xing)任(ren)何標(biao)記(ji)。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增相(xiang)關(guan)參(can)數應按照本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)相(xiang)關(guan)要(yao)求進行設(she)置(zhi)；不同批(pi)號(hao)試劑(ji)不能(neng)混用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光(guang)定量(liang)PCR儀(yi)參(can)數設(she)置(zhi)中不選ROX校(xiao)正(zheng)，淬滅(mie)基因選擇None。
9. 實(shi)驗(yan)過程中產(chan)品的廢(fei)棄物(wu)應該進行(xing)無害(hai)化處(chu)理(li)後方(fang)可丟(diu)棄(qi)。

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即(ji)用(yong)，用(yong)戶只需要(yao)提(ti)供(gong)病(bing)毒樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃(huang)保(bao)守序(xu)列(lie)設(she)計的專壹性引(yin)物(wu)，與相(xiang)關(guan)病(bing)毒無交(jiao)叉反應(ying)。
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可以(yi)達到幾百(bai)拷貝(bei)/反應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式(shi)熒(ying)光(guang)定量(liang) PCR 檢(jian)測(ce)，避免(mian)後續汙染(ran)。
5. 本(ben)試劑(ji)盒足夠(gou) 50 次(ci) 20μL 反應(ying)體系(xi)的熒光(guang)定量(liang) PCR。
6. 本(ben)產(chan)品只適(shi)用(yong)於科研，不(bu)能(neng)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷(duan)。
使(shi)用(yong)方(fang)法：
壹(yi)、樣品(pin)采集(ji)：
1、食(shi)品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采集(ji)與(yu)預培養(yang)按(an)照樣品(pin)的采集(ji)與(yu)預培養(yang)按(an)照《食品(pin)衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學檢(jian)驗(yan)阪崎腸桿菌(jun)檢(jian)驗(yan)要求(qiu)進(jin)行。
2、血(xue)液(ye)樣品(pin)：用(yong)無菌(jun)註(zhu)射器抽取(qu)受檢(jian)者靜(jing)脈血2mL，註(zhu)入(ru)無菌(jun)EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗(kang)凝(ning)管(guan)，立即(ji)混勻(yun)。
3、糞(fen)便(bian)樣品(pin)：取(qu)糞(fen)便(bian)置於(yu)滅(mie)菌(jun)的收集(ji)管(guan)中(zhong)送(song)檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位(wei)樣品(pin)：取(qu)發(fa)病部(bu)位(wei)新(xin)鮮(xian)滲(shen)出(chu)物(wu)、粘液膿血(xue)送檢(jian)。
壹(yi)、稀釋(shi) PCR 陽(yang)性(xing)對照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍稀釋(shi)度為(wei)例）
1. 註(zhu)意：由(you)於標準品濃度非(fei)常高，因(yin)此(ci)下列(lie)稀釋(shi)操作(zuo)壹定(ding)要在獨(du)立的區(qu)域(yu)進(jin)行(xing)，千萬不(bu)能(neng)汙染(ran)樣品(pin)或本(ben)試劑(ji)盒的其(qi)他成分(fen)）。為(wei)增加產(chan)品穩(wen)定(ding)性(xing)和避免(mian)擴(kuo)散傳(chuan)染性病原，本產(chan)品不提供(gong)活(huo)體樣品(pin)做陽(yang)性對照(zhao)，只提(ti)供(gong)可以(yi)直(zhi)接使用(yong)的 DNA段作(zuo)為陽(yang)性對照(zhao)。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離(li)心(xin)管(guan)，分(fen)別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯槍(qiang)頭分(fen)別(bie)加入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模(mo)板(ban)稀釋(shi)液（用(yong)帶(dai)芯槍(qiang)頭，下同）。
4. 在 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)，充分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)(上(shang)步(bu)稀釋(shi)所得(de))，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)到 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充(chong)分(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的陽性(xing)對照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復上面的操作(zuo)直(zhi)到得(de)到 6 個(ge)稀釋(shi)度的陽性(xing)對照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上述樣品(pin)建(jian)議經(jing)過增(zeng)菌(jun)後，收集(ji)培養(yang)物(wu)用(yong)於檢(jian)測(ce)。 
二、DNA提(ti)取(qu)：
可采用(yong)PCR試劑(ji)盒配(pei)備的DNA抽提(ti)液，按(an)以(yi)下說(shuo)明(ming)進行(xing)DNA核(he)酸的粗(cu)提。也(ye)可采購(gou)上(shang)海澤葉生(sheng)物(wu)科技(ji)有限(xian)公(gong)司(si)生(sheng)產(chan)的DNA提(ti)取(qu)試劑(ji)盒(過(guo)柱法-熒(ying)光(guang)配套(tao))或其(qi)他合適(shi)的商業(ye)化產(chan)品，並(bing)按(an)照(zhao)相(xiang)應試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)進行(xing)操作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培養(yang)物(wu)：取液(ye)體(ti)培養(yang)物(wu)100μL加到1.5mL無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡(jin)量(liang)吸棄上清，加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
2、固體(ti)培養(yang)物(wu)：挑取單(dan)克(ke)隆菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣品(pin)：挑取米(mi)粒(li)大小糞(fen)便(bian)於滅(mie)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩混勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分(fen)鐘(zhong)，棄上清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
4、其(qi)他液體標(biao)本(ben)：取(qu)標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混勻(yun)，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上(shang)清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
註(zhu)：陽性對照(zhao)和陰性(xing)對照(zhao)為已(yi)經抽提(ti)好的核(he)酸(無需提(ti)取(qu))，直(zhi)接取5μL加入(ru)到反應(ying)體系(xi)中即(ji)可。由(you)於(yu)陽(yang)性(xing)對照(zhao)濃度較(jiao)高，建(jian)議在樣品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)域(yu)加入(ru)陽性(xing)對照(zhao)。 
人(ren)肝(gan)竇(dou)內(nei)皮(pi)細(xi)胞 (HHSEC) ( 5×105 ) 大鼠骨髓(sui)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細胞(bao)(BMSCs) Rattus碳(tan)酸氫鉀(jia)(AR)Potassium bicarbonate質(zhi)量(liang)規格：>99%,AR

小(xiao)鼠(shu)肝(gan)癌細胞(bao);Hepa 1-6 [Hepa1-6]十二烷(wan)基磺酸鈉(BR) dodecanesulfonate質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR

SERPINB3 Others Human 人(ren) SerpinB3 / SCCA-1 桿(gan)狀(zhuang)病毒-昆蟲細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) Theophylline質(zhi)量(liang)規格：>99%,BR

CM-R102大鼠腦(nao)靜脈血管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞*培養(yang)基100mL纖維(wei)素(su)酶(mei)Cellulase質(zhi)量(liang)規格：>2000U/mg

786-O [786-0], 人(ren)腎(shen)透(tou)明(ming)腺(xian)癌(ai)細胞 小(xiao)鼠(shu)T細(xi)胞(bao),CTLL-2細(xi)胞(bao) HT-29(人(ren)結腸(chang)癌(ai)細胞(bao))Chondroitin sulfate質(zhi)量(liang)規格：>95%,BR
hFOB 1.19(SV40轉(zhuan)染(ran)人成骨細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 產(chan)氣腸(chang)桿(gan)菌(jun)D-D-Tryptophan質(zhi)量(liang)規格：>98%,BR

膀(pang)胱上(shang)皮(pi)細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)D-半(ban)乳糖(tang)胺鹽(yan)酸鹽(yan)D(+)-Galactosamine 質(zhi)量(liang)規格：BR,98%

TSPAN8 Others Human 人(ren) TSPAN8 / Teaspanin 8 / TM4SF3 人(ren)細(xi)胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) ;重(zhong)樓皂(zao)苷(gan)III(標(biao)準品)Dioscin質(zhi)量(liang)規格：HPLC≥98.0%,標(biao)準品

人(ren)成(cheng)骨肉(rou)瘤(liu)細胞;Saos-2薯(shu)蕷(yu)皂甙(dai)Dioscin質(zhi)量(liang)規格：BR，含(han)量(liang)≥95.0%

AD293細(xi)胞(bao)，人胚(pei)腎(shen)細(xi)胞(bao) 牛(niu)胚(pei)氣管(guan)細(xi)胞(bao),EB(NBL-4)細(xi)胞(bao) CL-0303PATU8988(人(ren)胰(yi)腺(xian)癌(ai)細胞)5×106cells/瓶(ping)×2薯(shu)蕷(yu)皂素(su)(標(biao)準品)Diosgenin質(zhi)量(liang)規格：HPLC>98.0%,標(biao)準品
WISH細(xi)胞(bao)，人羊膜(mo)細(xi)胞 普通(tong)變形桿(gan)菌(jun) 中(zhong)國(guo)倉鼠卵巢細(xi)胞(bao)(亞系(xi)克(ke)隆);CHO DUX B11 Carrying pBSCRLc/pTCSgpt clone 35.6草(cao)(>98%,BR)質(zhi)量(liang)規格：>98%，BROxalyldihydrazide

CXCL9 Protein Cymolgus 重(zhong)組(zu)食蟹猴(hou) CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋(dan)白(bai)惡唑(>96%，BC)質(zhi)量(liang)規格：>96%，BCOxazole

NCI-H292(人(ren)肺癌(ai)細胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 甲(jia)型(xing)流感(gan) H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血(xue)凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細(xi)胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 乙(yi)酸鈀(ba)質(zhi)量(liang)規格：BCPalladium (II) acetate

小(xiao)鼠(shu)誘導性多潛能幹(gan)細胞(bao);PUMC-mips-D2氯化鈀(ba)質(zhi)量(liang)規格：BCPalladium (II) chloride

ALOX15B Others Human 人(ren) ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 桿(gan)狀(zhuang)病毒-昆蟲細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) 鄰(lin)苯(ben)二甲腈(>99.0%(GC))質(zhi)量(liang)規格：>99.0%(GC)Phthalonitrile
槐(huai)角(jiao)探(tan)針(zhen)法PCR鑒(jian)定試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書(shu)EPCAM Others Human 人(ren) EpCAM / OP1 人(ren)細(xi)胞裂解液 (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) Antipaindixy7chloride抗(kang)痛(tong)素(su)100克(ke)生(sheng)物(wu)技(ji)術級，600u/mg

人(ren)肝(gan)內(nei)膽(dan)管(guan)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)總RNAHIBEpiC NA啊匹(pi)油脂　L cPIqZON GRqcSq L 1678-0-3

PAK3 Others Human 人(ren) PAK3 桿(gan)狀(zhuang)病毒-昆蟲細胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao)) Sulforhodaminep磺酰(xian)羅丹(dan)明(ming)B細(xi)胞(bao)培養(yang)試劑(ji)染料(liao)100毫(hao)克(ke)BS

中(zhong)國(guo)倉鼠卵巢細(xi)胞(bao);TPO-CHO-IBOVINESERU
儲(chu)存(cun)條(tiao)件：
14℃或－20℃樣品(pin)收(shou)集(ji)、處(chu)理及(ji)保(bao)存(cun)方(fang)法
1. 血(xue)清(qing)：使用(yong)不含(han)熱原和內(nei)毒素(su)的試管(guan)，操(cao)作(zuo)過程中避免(mian)任(ren)何細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收(shou)集血液後，3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)將血清和紅(hong)細胞(bao)迅速(su)小心(xin)地分(fen)離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬酸鹽(yan)或肝(gan)素(su)抗凝。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)30 分(fen)鐘(zhong)取上清。
3. 細(xi)胞(bao)上清液：3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒(li)和聚(ju)合物(wu)。
4. 組(zu)織勻(yun)漿(jiang)：將組(zu)織加入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)取上清。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣本(ben)收(shou)集(ji)後不及(ji)時檢(jian)測(ce)，請按(an)壹次(ci)用(yong)量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於(yu)-20℃，避免(mian)反復凍融，在室(shi)溫(wen)下解凍(dong)並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均勻地充(chong)分(fen)解(jie)凍。