半(ban)夏(xia)探針法PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒保存

特(te)點：
1. 即開(kai)即用，用戶只需要提供病(bing)毒(du)樣(yang)品。
2. 根據(ju)地(di)黃保守序(xu)列(lie)設(she)計的專(zhuan)壹(yi)性(xing)引物(wu)，與相(xiang)關病(bing)毒(du)無(wu)交(jiao)叉反應(ying)。
3. 靈(ling)敏度可以達(da)到幾百(bai)拷貝(bei)/反應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式熒光定(ding)量 PCR 檢(jian)測，避免(mian)後續汙染。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒足夠 50 次(ci) 20μL 反應(ying)體(ti)系(xi)的熒光定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產品只適(shi)用於(yu)科研，不能(neng)用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)。

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使(shi)用方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣(yang)品采(cai)集(ji)：
1、食品樣品：樣品的采(cai)集(ji)與預(yu)培養(yang)按照樣品的采(cai)集(ji)與預(yu)培養(yang)按照《食品衛生(sheng)微(wei)生物學(xue)檢驗(yan)阪崎腸桿菌(jun)檢驗(yan)要求(qiu)進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液樣(yang)品：用無(wu)菌(jun)註(zhu)射(she)器(qi)抽取(qu)受(shou)檢(jian)者(zhe)靜(jing)脈血(xue)2mL，註(zhu)入無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或檸(ning)檬(meng)酸鈉)抗(kang)凝(ning)管，立即混(hun)勻(yun)。
3、糞便(bian)樣(yang)品：取(qu)糞便(bian)置(zhi)於(yu)滅菌的收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)送檢。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位(wei)樣(yang)品：取(qu)發病(bing)部(bu)位(wei)新(xin)鮮滲(shen)出(chu)物、粘(zhan)液膿血(xue)送檢。
壹(yi)、稀釋 PCR 陽(yang)性(xing)對照（以 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍稀釋度為例(li)）
1. 註(zhu)意(yi)：由(you)於(yu)標(biao)準品濃度非常(chang)高，因此(ci)下列(lie)稀釋操作壹(yi)定(ding)要(yao)在獨立的區(qu)域進(jin)行(xing)，千(qian)萬(wan)不能(neng)汙染樣品或本(ben)試(shi)劑(ji)盒的其(qi)他(ta)成分）。為(wei)增(zeng)加(jia)產品穩(wen)定(ding)性(xing)和避免(mian)擴散(san)傳染性(xing)病(bing)原，本(ben)產品不提供活體(ti)樣(yang)品做陽(yang)性(xing)對照，只提供可以直接(jie)使(shi)用的 DNA段作為(wei)陽(yang)性(xing)對照。
2. 標(biao)記(ji) 6 個(ge)離(li)心管(guan)，分別(bie)為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭分別(bie)加(jia)入 45 μL 熒光 PCR 模板(ban)稀釋液（用帶(dai)芯(xin)槍(qiang)頭，下同(tong)）。
4. 在 7 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放冰上(shang)待(dai)用。
5. 換(huan)槍(qiang)頭，在 6 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照(上(shang)步(bu)稀釋所(suo)得(de))，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放冰上(shang)待(dai)用。
6. 換(huan)槍(qiang)頭，在 5 號(hao)管(guan)中(zhong)加(jia)入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照到 5 號(hao)管(guan)中(zhong)，充(chong)分震(zhen)蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽(yang)性(xing)對照。放冰上(shang)待(dai)用。
7. 重復上面(mian)的操(cao)作直(zhi)到得(de)到 6 個(ge)稀釋度的陽(yang)性(xing)對照。放冰上(shang)待(dai)用。
註(zhu)：上(shang)述(shu)樣品建(jian)議經(jing)過(guo)增(zeng)菌(jun)後，收(shou)集(ji)培養(yang)物用於(yu)檢測。 
二(er)、DNA提取(qu)：
可采(cai)用PCR試(shi)劑(ji)盒配(pei)備(bei)的DNA抽提液，按以下說明(ming)進(jin)行(xing)DNA核(he)酸的粗提。也(ye)可采(cai)購上海(hai)澤葉(ye)生(sheng)物科技(ji)有(you)限公司(si)生產(chan)的DNA提取(qu)試(shi)劑(ji)盒(過(guo)柱(zhu)法-熒光配(pei)套(tao))或其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的商業(ye)化產(chan)品，並按照相(xiang)應(ying)試(shi)劑(ji)盒說明(ming)進(jin)行(xing)操作。
1、液(ye)體(ti)培養(yang)物：取(qu)液體(ti)培養(yang)物100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌(jun)離(li)心管中(zhong)，8000rpm離(li)心(xin)3min，盡量吸(xi)棄上清，加(jia)入50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
2、固(gu)體(ti)培養(yang)物：挑(tiao)取(qu)單克(ke)隆(long)菌落(luo)與50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min，取(qu)上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
3、糞便(bian)樣(yang)品：挑取(qu)米粒(li)大(da)小糞便(bian)於(yu)滅菌離(li)心管中(zhong)，加(jia)入0.5mL生(sheng)理(li)鹽水(shui)，振蕩(dang)混勻(yun)，13000rpm離(li)心(xin)3分鐘(zhong)，棄上清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
4、其(qi)他(ta)液體(ti)標(biao)本(ben)：取(qu)標(biao)本(ben)2-3mL，13000rpm離(li)心(xin)3min，棄上清，沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入50μL DNA抽提液充(chong)分混(hun)勻(yun)，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心(xin)3min取(qu)上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。
註(zhu)：陽(yang)性(xing)對照和陰(yin)性(xing)對照為已(yi)經(jing)抽提好的核(he)酸(無(wu)需(xu)提取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加(jia)入到反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)即可。由於(yu)陽(yang)性(xing)對照濃度較(jiao)高，建(jian)議在樣品制備(bei)區(qu)域加(jia)入陽(yang)性(xing)對照。 
實驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1. 整(zheng)個(ge)檢測過程(cheng)應(ying)嚴格按照本(ben)說明(ming)書(shu)要求(qiu)分別(bie)在試(shi)劑(ji)準備(bei)區(qu)、樣本(ben)處(chu)理區(qu)和PCR擴增(zeng)區(qu)進行(xing)操作，各(ge)區(qu)實驗(yan)服、儀器(qi) 、耗材(cai)應獨立使(shi)用，不能(neng)混用；實驗(yan)用吸頭采(cai)用帶(dai)濾芯(xin)吸頭；樣本(ben)處(chu)理區(qu)應配(pei)有(you)生(sheng)物(wu)安(an)全櫃(gui)，樣本(ben)處(chu)理在生物安(an)全櫃(gui)中(zhong)進(jin)行(xing)操作；三(san)個(ge)區(qu)應該(gai)配(pei)有(you)紫外(wai)線殺菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避免(mian)RNA降(jiang)解，樣本(ben)處(chu)理過(guo)程(cheng)應(ying)在0-4℃條(tiao)件(jian)下操(cao)作，且(qie)完成(cheng)實驗(yan)後立即上(shang)機檢測；樣本(ben)處(chu)理過(guo)程(cheng)中(zhong)使(shi)用的器(qi)具耗材(cai)應經(jing)過(guo)無(wu)核(he)酶處(chu)理。
3. 每(mei)次(ci)實驗(yan)應該設(she)置(zhi)陰、陽(yang)性(xing)對照。
4. 試(shi)劑(ji)盒所(suo)有試(shi)劑(ji)在使(shi)用前(qian)應該在常(chang)溫(wen)下(xia)充(chong)分融(rong)化混(hun)勻(yun)，並應瞬時離(li)心(xin)。
5. 試(shi)劑(ji)盒內(nei)所(suo)配(pei)陰(yin)性(xing)和陽(yang)性(xing)對照在壹(yi)次(ci)使(shi)用前(qian)應全部(bu)轉(zhuan)移至標(biao)本(ben)準備(bei)區(qu)，並單獨存放(fang)。
6. 為(wei)防止(zhi)熒光幹(gan)擾(rao)，應(ying)避免(mian)裸(luo)手(shou)直接(jie)接觸PCR反應(ying)管(guan)，並應避免(mian)在PCR反應(ying)管(guan)上進(jin)行(xing)任何標(biao)記(ji)。
7. 儀器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關參(can)數(shu)應(ying)按(an)照本(ben)說明(ming)書(shu)相(xiang)關要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)設(she)置(zhi)；不同(tong)批(pi)號試(shi)劑(ji)不能(neng)混用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光定(ding)量PCR儀參(can)數(shu)設(she)置(zhi)中(zhong)不選(xuan)ROX校正，淬(cui)滅基因選(xuan)擇(ze)None。
9. 實驗(yan)過程(cheng)中(zhong)產(chan)品的廢棄物應該進(jin)行(xing)無(wu)害(hai)化處(chu)理後方(fang)可丟(diu)棄。
儲(chu)存條(tiao)件(jian)：
14℃或－20℃樣(yang)品收(shou)集(ji)、處(chu)理及(ji)保存方(fang)法(fa)
1. 血(xue)清：使(shi)用不含(han)熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試(shi)管(guan)，操作過(guo)程(cheng)中(zhong)避免(mian)任何細(xi)胞(bao)刺激，收(shou)集(ji)血(xue)液後，3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速(su)小(xiao)心地(di)分離(li)。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽或肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離(li)心30 分鐘(zhong)取(qu)上清。
3. 細(xi)胞(bao)上清液：3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆(ke)粒和聚合(he)物。
4. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿：將(jiang)組(zu)織(zhi)加(jia)入適(shi)量生(sheng)理鹽(yan)水搗(dao)碎。3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘(zhong)取(qu)上清。
5. 保(bao)存：如(ru)果(guo)樣本(ben)收(shou)集(ji)後不及(ji)時檢(jian)測，請按壹(yi)次(ci)用量分裝(zhuang)，凍存於(yu)-20℃，避免(mian)反復凍融(rong)，在室溫下解凍並確保(bao)樣品均(jun)勻(yun)地充(chong)分解凍。
F3 Others Human 人(ren) Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照) 熒光素(su)Fluorescein質量規格：AR

A172 人(ren)膠(jiao)質母細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)鈣黃綠(lv)素(su)Calcein質量規格：IND

MCF-7-EGFP-puro(慢病(bing)毒(du)構(gou)建(jian)穩(wen)定(ding)株(zhu))人(ren)癌(ai)細(xi)胞(bao) MCF-7-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) in human breast cancer cells 1640+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin瑞(rui)氏色(se)素(su)Wright's stain質量規格：BS

RSPO1 Protein Human 重組(zu)人 R-Spondin 1 / RSPO1 蛋(dan)白(bai)吉氏色(se)素(su),姬(ji)姆(mu)氏色(se)素(su)Giemsa stain質量規格：BS

人(ren)肺(fei)成纖(xian)維細(xi)胞(bao) (HPF)( 5×105 ) mOPC, 小(xiao)鼠(shu)少(shao)突(tu)膠(jiao)質前(qian)體細(xi)胞(bao) Mouse6-FAM, SE;6-羧(suo)基(ji)熒光素(su)琥(hu)珀酯6-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester質量規格：0.9
HA Others H5N1 甲型流(liu)感(gan) H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血(xue)凝素(su) (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照) 醋(cu)酸鋰，二(er)水(AR)Lithium acetate dihydrate質量規格：>99%,AR

人(ren)腦(nao)靜(jing)脈血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞(bao)*培養(yang)基 100mL聚(ju)蔗(zhe)糖400Ficol 400質量規格：>98%,BR

BSC-1細(xi)胞(bao)，猴腎(shen)細(xi)胞(bao)系(xi) CHRF(人(ren)巨核(he)細(xi)胞(bao)白血(xue)病(bing)) 敘(xu)利(li)亞倉鼠(shu)腎細(xi)胞(bao);BHK-21二(er)硝基(ji)水(shui)楊(yang)酸3,5-Dinitrosalicylic acid質量規格：>98%,BR

EFNA5 Protein Mouse 重組(zu)小鼠(shu) Ephrin-A5 / EFNA5 蛋(dan)白(bai) (His 標(biao)簽)丙(bing)二(er)酸鈉 malonate質量規格：>98%

BC-022(人(ren)癌(ai)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 小(xiao)鼠(shu)漿細(xi)胞(bao)瘤(liu);MPC-111酸二(er)氫鈉二(er)水 phosphate, monobasic, dihydrate質量規格：>98.5%,分子(zi)生(sheng)物學(xue)級
原代(dai)表皮角化細(xi)胞(bao)特(te)制基(ji)礎培養(yang)基Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：500/250/100ml胞(bao)嘧(mi)啶 質量規格：>99%,BRCytosine

CD59 Others Human 人(ren) CD59 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液 (陽(yang)性(xing)對照) 胞(bao)嘧(mi)啶(標(biao)準品)質量規格：HPLC>98%,標(biao)準品Cytosine

MouseS 小(xiao)鼠(shu)皮膚成纖(xian)維樣(yang)細(xi)胞(bao)硫酸腺(xian)嘌(piao)呤(ling) 質量規格：>99%,BR,可用於(yu)細(xi)胞(bao)培養(yang)Adenine sulfate

獼猴(hou)肺細(xi)胞(bao);MML2硫(liu)酸腺(xian)嘌(piao)呤(ling)(標(biao)準品)質量規格：HPLC>98%,標(biao)準品Adenine sulfate

WM451, 人(ren)色(se)素(su)瘤(liu)細(xi)胞(bao)尿苷(gan)-5'-二(er)1酸葡(pu)萄(tao)糖(tang)鈉鹽(UDPG)質量規格：>98%,SigmaUridine-5-diphosphoglucose di salt
半(ban)夏(xia)探針法PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒保存大(da)鼠(shu)肝細(xi)胞(bao);BRL 3A革蘭氏染色液(ye)試(shi)劑(ji)盒(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)shēng huà shì jì容(rong)量：1米

HPAC細(xi)胞(bao)，人胰腺(xian)腺(xian)泡(pao)上皮癌(ai) 人(ren)舌(she)癌(ai)細(xi)胞(bao),T6細(xi)胞(bao) 雜交(jiao)瘤(liu)(B類(lei));C3110D2E11D-賴(lai)酸 D-Lysine (HPLC,≥98%) 923-27-3 1G 通(tong)用試(shi)劑(ji)

JEG-3(人(ren)絨(rong)毛膜(mo)癌(ai)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2相(xiang)關物(wu)質C Ibuprofqn Rqlctqd CoMpound C;4-isobutylccqtophqnonq 38861-78-8

Promocell C-25