獨(du)活染(ran)料法PCR鑒定試(shi)劑(ji)盒(he)直銷(xiao)

實驗流(liu)程：
1. 整個檢(jian)測過(guo)程應嚴(yan)格按照本說(shuo)明書要(yao)求分別(bie)在(zai)試(shi)劑(ji)準(zhun)備區(qu)、樣(yang)本處(chu)理區(qu)和(he)PCR擴增區(qu)進(jin)行(xing)操作(zuo)，各區(qu)實(shi)驗服(fu)、儀(yi)器(qi) 、耗材(cai)應獨(du)立(li)使用(yong)，不(bu)能混(hun)用；實驗用(yong)吸(xi)頭(tou)采用(yong)帶(dai)濾(lv)芯(xin)吸頭(tou)；樣本處(chu)理區(qu)應配(pei)有(you)生物安(an)全櫃，樣(yang)本處(chu)理在(zai)生物安(an)全櫃中(zhong)進(jin)行(xing)操作(zuo)；三個(ge)區(qu)應該(gai)配(pei)有紫(zi)外線殺菌裝(zhuang)置。
2. 為避免(mian)RNA降解(jie)，樣本處(chu)理過程應在(zai)0-4℃條件下操作(zuo)，且完成(cheng)實(shi)驗後(hou)立(li)即(ji)上機檢測；樣(yang)本處(chu)理過程中(zhong)使用(yong)的(de)器(qi)具耗材(cai)應經(jing)過(guo)無核(he)酶處(chu)理。
3. 每次實驗應該(gai)設(she)置陰(yin)、陽(yang)性對照。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所(suo)有試(shi)劑(ji)在(zai)使用(yong)前應該(gai)在(zai)常溫(wen)下充分融化(hua)混(hun)勻，並應瞬(shun)時(shi)離心(xin)。
5. 試(shi)劑(ji)盒(he)內(nei)所(suo)配(pei)陰(yin)性(xing)和(he)陽(yang)性對照在(zai)壹次使用(yong)前(qian)應全部轉移至(zhi)標(biao)本準(zhun)備區(qu)，並單獨存(cun)放(fang)。
6. 為防止(zhi)熒(ying)光幹擾，應避(bi)免(mian)裸(luo)手直接接觸PCR反應管，並應避(bi)免(mian)在(zai)PCR反應管上進(jin)行(xing)任(ren)何標(biao)記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴增相關參數(shu)應按(an)照本說(shuo)明書相(xiang)關要(yao)求進(jin)行(xing)設(she)置；不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)試(shi)劑(ji)不(bu)能混(hun)用。
8. ABI系列熒(ying)光定量PCR儀(yi)參數(shu)設(she)置中(zhong)不(bu)選ROX校(xiao)正(zheng)，淬滅基(ji)因(yin)選擇None。
9. 實驗過(guo)程中(zhong)產(chan)品(pin)的(de)廢(fei)棄物(wu)應該(gai)進(jin)行(xing)無(wu)害(hai)化(hua)處(chu)理後方(fang)可丟棄。

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開即(ji)用，用(yong)戶只(zhi)需要(yao)提(ti)供(gong)病(bing)毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根據(ju)地黃保守(shou)序(xu)列設(she)計(ji)的(de)專壹性引(yin)物，與相(xiang)關病(bing)毒(du)無(wu)交(jiao)叉(cha)反應。
3. 靈敏度(du)可以(yi)達(da)到(dao)幾百(bai)拷貝(bei)/反應。
4. 壹管式(shi)熒(ying)光定量 PCR 檢測，避(bi)免(mian)後續(xu)汙染。
5. 本試(shi)劑(ji)盒(he)足(zu)夠 50 次 20μL 反應體(ti)系的(de)熒(ying)光定量 PCR。
6. 本產(chan)品(pin)只(zhi)適用(yong)於科(ke)研，不(bu)能用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷。
使用方(fang)法：
壹、樣品(pin)采集(ji)：
1、食(shi)品樣品(pin)：樣品的(de)采集(ji)與預(yu)培養(yang)按(an)照樣品的(de)采集(ji)與預(yu)培養(yang)按(an)照《食(shi)品衛生微(wei)生物學(xue)檢(jian)驗阪崎腸桿(gan)菌檢驗要(yao)求進(jin)行(xing)。
2、血液樣(yang)品：用無菌註(zhu)射器(qi)抽取受(shou)檢(jian)者靜脈血2mL，註(zhu)入無(wu)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝(ning)管，立(li)即(ji)混(hun)勻。
3、糞便樣(yang)品：取糞便(bian)置於滅(mie)菌的(de)收集(ji)管中(zhong)送(song)檢。
4、病(bing)竈部(bu)位(wei)樣(yang)品(pin)：取發(fa)病(bing)部(bu)位新鮮滲(shen)出(chu)物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿(nong)血(xue)送(song)檢。
壹、稀釋 PCR 陽(yang)性對照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這 6 個 10 倍稀釋度(du)為例）
1. 註(zhu)意：由於標(biao)準(zhun)品濃度(du)非常高(gao)，因(yin)此下列稀釋操作(zuo)壹定要(yao)在(zai)獨立(li)的(de)區(qu)域(yu)進(jin)行(xing)，千(qian)萬不(bu)能汙染(ran)樣品(pin)或本試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)其(qi)他(ta)成(cheng)分(fen)）。為增加產(chan)品(pin)穩(wen)定性和(he)避(bi)免擴散(san)傳染(ran)性(xing)病(bing)原(yuan)，本產(chan)品(pin)不(bu)提(ti)供(gong)活體(ti)樣品做陽(yang)性對照，只(zhi)提(ti)供(gong)可以(yi)直接使用的(de) DNA段作(zuo)為陽(yang)性對照。
2. 標(biao)記 6 個離心(xin)管，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)分別(bie)加入 45 μL 熒(ying)光 PCR 模板(ban)稀釋液(ye)（用(yong)帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)，下同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對照，充分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上待用。
5. 換槍頭(tou)，在(zai) 6 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對照(上步稀釋所(suo)得(de))，充分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上待用。
6. 換槍頭(tou)，在(zai) 5 號(hao)管中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對照到 5 號(hao)管中(zhong)，充分震蕩(dang) 1 分鐘(zhong)，得 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上待用。
7. 重復上面的(de)操作(zuo)直到(dao)得(de)到 6 個稀釋度(du)的(de)陽(yang)性對照。放(fang)冰(bing)上待用。
註(zhu)：上述樣品(pin)建(jian)議經過(guo)增菌後，收集(ji)培養(yang)物(wu)用於檢(jian)測。 
二、DNA提(ti)取：
可采用PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配(pei)備的(de)DNA抽提(ti)液，按(an)以(yi)下說明進(jin)行(xing)DNA核(he)酸的(de)粗提(ti)。也(ye)可采購上海澤葉(ye)生物科(ke)技(ji)有限公司(si)生產(chan)的(de)DNA提(ti)取試(shi)劑(ji)盒(he)(過柱法(fa)-熒(ying)光配(pei)套(tao))或其(qi)他(ta)合適的(de)商業化(hua)產(chan)品(pin)，並按照相應試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明進(jin)行(xing)操作(zuo)。
1、液體培養(yang)物(wu)：取液體(ti)培養(yang)物(wu)100μL加到1.5mL無菌離心(xin)管中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡量吸(xi)棄(qi)上清，加入50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
2、固體培養(yang)物(wu)：挑取(qu)單克(ke)隆(long)菌落與50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
3、糞便樣(yang)品：挑取(qu)米(mi)粒大小(xiao)糞便於滅(mie)菌離心(xin)管中(zhong)，加入0.5mL生理鹽(yan)水，振蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離心(xin)3分鐘(zhong)，棄上清，沈澱中(zhong)加入50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
4、其(qi)他(ta)液體(ti)標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上清，沈澱中(zhong)加入50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上清5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
註(zhu)：陽(yang)性對照和陰(yin)性(xing)對(dui)照為已(yi)經(jing)抽提(ti)好(hao)的(de)核(he)酸(無需提(ti)取)，直接取5μL加入到(dao)反(fan)應體(ti)系中(zhong)即(ji)可。由於陽(yang)性對照濃度(du)較(jiao)高(gao)，建(jian)議(yi)在(zai)樣品(pin)制(zhi)備區(qu)域(yu)加入陽(yang)性對照。 
SF9, 昆(kun)蟲卵(luan)巢(chao)細(xi)胞(bao) 人癌細(xi)胞(bao)，MCF7B細胞(bao) hFOB 1.19(人SV40轉染成(cheng)骨細胞(bao))尿(niao)苷(gan)-5'-二1酸葡萄(tao)糖(tang)鈉鹽(yan)(UDPG)Uridine-5-diphosphoglucose di salt 質(zhi)量規(gui)格：>98%,Sigma

人髓母(mu)細胞(bao)瘤細胞(bao);Daoy5-鳥苷(gan)壹1酸二鈉鹽(yan)(GMP)GMP質(zhi)量規(gui)格：>98%,BR

CHI3L1 Others Human 人 CHI3L1 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對照) 腺(xian)苷(gan)-5單1酸(進(jin)口(kou)原(yuan)裝(zhuang)) AMP 質(zhi)量規(gui)格：>99,ALFA原裝(zhuang)

人正(zheng)常(chang)肺上皮(pi)細胞(bao);BEAS-2B腺(xian)苷(gan)-5單1酸(AMP) Adesine-5-mophosphoric acid 質(zhi)量規(gui)格：>98,BR

FRZB Others Human 人 FRZB / sFRP-3 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對照) 5'-溴 5-Bromouracil 質(zhi)量規(gui)格：>98%,BR
HEC-1-B細胞(bao)，內(nei)膜腺(xian)癌細胞(bao) 人鼻咽(yan)癌細胞(bao)(高(gao)分(fen)化(hua)),CNE1細胞(bao) CL-0257BC-009(人癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2Dabigatran etexilate質(zhi)量規(gui)格：>97%

中(zhong)國倉(cang)鼠卵(luan)巢(chao)細(xi)胞(bao)(亞(ya)系克(ke)隆(long));CHO-HCV-NS3Rivaroxaban質(zhi)量規(gui)格：度(du)≥98%

TNFRSF8 Others Human 人 CD30 / TNFRSF8 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對照) 18-冠-6-(>98.0%(GC))18-Crown 6-Ether質(zhi)量規(gui)格：>98.0%(GC)

肺大動(dong)脈內(nei)皮(pi)細胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)4'-羧基(ji)苯並-15-冠5-(>98.0%(GC)(T))4'-Carboxybenzo-15-crown 5-Ether質(zhi)量規(gui)格：>98.0%(GC)(T)

LILRB2 Others Human 人 LILRB2 / ILT4 / LIR-2 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對照) 4'-羧基(ji)苯並-18-冠6-(>97.0%(GC)(T))4'-Carboxybenzo-18-crown 6-Ether質(zhi)量規(gui)格：>97.0%(GC)(T)
LEFTY2 Protein Human 重組(zu)人 Lefty2 / Lefty A 蛋白(bai) (Fc 標(biao)簽)十二烷基(ji)硫(liu)酸鈉（標(biao)準(zhun)品）質(zhi)量規(gui)格：含量(liang)測定 dodecyl sulfate

人肝內(nei)膽(dan)管上皮(pi)細胞(bao) (HIBEC)( 5×105 ) HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xi)胞(bao)系 Rattus鹽(yan)酸米(mi)安色(se)林（標(biao)準(zhun)品）質(zhi)量規(gui)格：含量(liang)測定Mianserin

C57BL/6小鼠T細胞(bao)瘤細胞(bao);RMA達(da)卡(ka)他(ta)韋;BMS790052質(zhi)量規(gui)格：>98%,BRDaclatasvir;BMS-790052; EBP883

NXPH1 Others Mouse 小鼠 Neurexophilin-1 / NXPH1 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對照) 鹽(yan)酸頭(tou)孢(bao)甲1質(zhi)量規(gui)格：Cefmexime≥ 93%,BRCefmexime

人內(nei)皮(pi)細胞(bao)*培養(yang)基(ji) 100mL鹽(yan)酸曲美他(ta)嗪(qin)質(zhi)量規(gui)格：>97%,EPTrimetazidine di
獨活染(ran)料法PCR鑒定試(shi)劑(ji)盒(he)直銷(xiao)TFRC Others Human 人 TFRC / CD71 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對照) 兔血漿(jiang)1米(mi)

人胚胎(tai)胰腺(xian)組織(zhi)來源(yuan)細(xi)胞(bao);CCC-HPE-2β-乳球(qiu)蛋白(bai) β-Lactoglobulin from bovine milk,≥90% 9045-23-2 50MG 通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)

CFHR1 Others Human 人 CFHR1 人細胞(bao)裂解(jie)液 (陽(yang)性對照) 流醋羌(qiang)安 xy7xylcminq sulfctq 10039-24-0

SD大鼠骨髓間(jian)質(zhi)幹細胞(bao) SD rat bone marrow mesenchym
儲(chu)存(cun)條件：
14℃或－20℃樣品收(shou)集(ji)、處(chu)理及保存(cun)方(fang)法
1. 血清：使(shi)用不(bu)含熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素的(de)試(shi)管，操作(zuo)過程中(zhong)避免(mian)任(ren)何細(xi)胞(bao)刺激(ji)，收(shou)集(ji)血液(ye)後(hou)，3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)將血(xue)清(qing)和(he)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速小(xiao)心(xin)地分(fen)離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽(yan)或肝素抗凝(ning)。3000 轉離心(xin)30 分鐘(zhong)取上清。
3. 細胞(bao)上清液：3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒和聚(ju)合物。
4. 組織(zhi)勻漿：將組(zu)織(zhi)加入適(shi)量(liang)生理鹽(yan)水搗碎。3000 轉離心(xin)10 分鐘(zhong)取上清。
5. 保存(cun)：如(ru)果(guo)樣(yang)本收(shou)集(ji)後不(bu)及時檢(jian)測，請(qing)按(an)壹次用量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於-20℃，避免反(fan)復凍融，在(zai)室溫(wen)下解(jie)凍並確保樣(yang)品均(jun)勻地充分解(jie)凍。