玉竹(zhu)染(ran)料法PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒*

實驗流(liu)程：
1. 整個(ge)檢(jian)測過(guo)程應(ying)嚴格(ge)按(an)照本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)分(fen)別(bie)在(zai)試(shi)劑(ji)準備(bei)區(qu)、樣本(ben)處理區(qu)和(he)PCR擴增區(qu)進(jin)行操(cao)作(zuo)，各(ge)區(qu)實驗服、儀(yi)器(qi) 、耗材應(ying)獨立使用(yong)，不能混用；實驗用(yong)吸(xi)頭采用(yong)帶(dai)濾芯(xin)吸(xi)頭；樣本(ben)處理區(qu)應(ying)配有(you)生(sheng)物安(an)全(quan)櫃(gui)，樣本(ben)處理在生(sheng)物安(an)全(quan)櫃(gui)中進(jin)行操(cao)作(zuo)；三(san)個(ge)區(qu)應(ying)該配有(you)紫外線(xian)殺(sha)菌(jun)裝置。
2. 為避免(mian)RNA降解，樣本(ben)處理過(guo)程應(ying)在0-4℃條件(jian)下(xia)操(cao)作(zuo)，且(qie)完(wan)成(cheng)實驗後(hou)立即(ji)上(shang)機檢(jian)測；樣本(ben)處理過(guo)程中使用(yong)的器(qi)具耗材應(ying)經(jing)過(guo)無核酶(mei)處(chu)理。
3. 每次實驗應(ying)該設置陰、陽性對(dui)照。
4. 試(shi)劑(ji)盒所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)在使用(yong)前(qian)應(ying)該在常(chang)溫下(xia)充分(fen)融化(hua)混勻，並(bing)應(ying)瞬(shun)時離心(xin)。
5. 試(shi)劑(ji)盒內(nei)所(suo)配陰(yin)性和陽性對(dui)照在(zai)壹次使用(yong)前(qian)應(ying)全部轉移(yi)至標本(ben)準備(bei)區(qu)，並(bing)單獨存(cun)放。
6. 為防(fang)止熒(ying)光(guang)幹(gan)擾，應(ying)避免(mian)裸手直(zhi)接接觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避免(mian)在PCR反(fan)應(ying)管(guan)上進(jin)行任何標記(ji)。
7. 儀(yi)器(qi) 擴增相(xiang)關參(can)數應(ying)按(an)照本(ben)說(shuo)明(ming)書(shu)相(xiang)關要求(qiu)進(jin)行設置；不同批號試(shi)劑(ji)不能混用。
8. ABI系列熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)參(can)數設置中不選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，淬(cui)滅(mie)基(ji)因選(xuan)擇None。
9. 實驗過(guo)程中產品(pin)的廢(fei)棄物應(ying)該進(jin)行無害化(hua)處理後(hou)方可(ke)丟(diu)棄。

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特點(dian)：
1. 即開即用(yong)，用戶(hu)只需(xu)要(yao)提(ti)供病(bing)毒(du)樣品(pin)。
2. 根據(ju)地(di)黃(huang)保(bao)守序(xu)列設(she)計的專(zhuan)壹(yi)性引物，與(yu)相(xiang)關病(bing)毒(du)無(wu)交(jiao)叉反(fan)應(ying)。
3. 靈敏(min)度(du)可以(yi)達(da)到(dao)幾百(bai)拷貝(bei)/反(fan)應(ying)。
4. 壹管(guan)式(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR 檢(jian)測，避(bi)免(mian)後續(xu)汙(wu)染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒足(zu)夠 50 次 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系的(de)熒(ying)光(guang)定(ding)量 PCR。
6. 本(ben)產品(pin)只適(shi)用於(yu)科研，不能用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷。
使用(yong)方法：
壹、樣品(pin)采集(ji)：
1、食品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采集(ji)與(yu)預培養(yang)按(an)照樣品(pin)的采集(ji)與(yu)預培養(yang)按(an)照《食品(pin)衛生(sheng)微(wei)生(sheng)物學(xue)檢(jian)驗阪(ban)崎(qi)腸(chang)桿(gan)菌(jun)檢(jian)驗要(yao)求(qiu)進(jin)行。
2、血(xue)液樣品(pin)：用無(wu)菌(jun)註射(she)器(qi)抽(chou)取(qu)受檢(jian)者靜脈(mai)血(xue)2mL，註入(ru)無(wu)菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬(meng)酸鈉)抗(kang)凝(ning)管(guan)，立即(ji)混(hun)勻。
3、糞便(bian)樣品(pin)：取(qu)糞便(bian)置於(yu)滅菌(jun)的收集(ji)管(guan)中送檢(jian)。
4、病(bing)竈部位樣品(pin)：取(qu)發病(bing)部位新(xin)鮮(xian)滲出(chu)物、粘液膿血(xue)送檢(jian)。
壹、稀(xi)釋(shi) PCR 陽性對(dui)照（以(yi) 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀(xi)釋(shi)度(du)為例(li)）
1. 註意(yi)：由於(yu)標準(zhun)品(pin)濃度(du)非(fei)常(chang)高，因此(ci)下(xia)列稀(xi)釋(shi)操(cao)作(zuo)壹(yi)定(ding)要在(zai)獨立的(de)區(qu)域(yu)進(jin)行，千(qian)萬不能汙(wu)染(ran)樣品(pin)或(huo)本(ben)試(shi)劑(ji)盒的(de)其他(ta)成分(fen)）。為增加(jia)產品(pin)穩(wen)定(ding)性和(he)避免(mian)擴散(san)傳染(ran)性病(bing)原，本(ben)產品(pin)不提供活(huo)體(ti)樣品(pin)做陽(yang)性對(dui)照，只(zhi)提供可(ke)以(yi)直(zhi)接使用(yong)的 DNA段作為陽(yang)性對(dui)照。
2. 標記(ji) 6 個(ge)離心(xin)管(guan)，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模板(ban)稀(xi)釋(shi)液（用帶(dai)芯槍頭，下(xia)同）。
4. 在 7 號管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
5. 換槍頭，在 6 號管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照(上步稀(xi)釋(shi)所(suo)得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
6. 換槍頭，在 5 號管(guan)中加(jia)入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照到(dao) 5 號管(guan)中，充分(fen)震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
7. 重復(fu)上面的操(cao)作(zuo)直(zhi)到(dao)得(de)到(dao) 6 個(ge)稀(xi)釋(shi)度(du)的陽(yang)性對(dui)照。放(fang)冰(bing)上(shang)待用(yong)。
註：上(shang)述樣品(pin)建議經(jing)過(guo)增菌(jun)後，收集(ji)培(pei)養物用於(yu)檢(jian)測。 
二(er)、DNA提取(qu)：
可采用(yong)PCR試(shi)劑(ji)盒配(pei)備(bei)的(de)DNA抽(chou)提液，按(an)以(yi)下(xia)說(shuo)明(ming)進(jin)行DNA核酸的粗提。也可采購(gou)上(shang)海澤(ze)葉(ye)生(sheng)物科技(ji)有(you)限(xian)公(gong)司(si)生(sheng)產的DNA提取(qu)試(shi)劑(ji)盒(過(guo)柱法-熒(ying)光(guang)配(pei)套(tao))或(huo)其(qi)他(ta)合適(shi)的商(shang)業化(hua)產品(pin)，並(bing)按(an)照相(xiang)應(ying)試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明(ming)進(jin)行操(cao)作(zuo)。
1、液體(ti)培養物：取(qu)液體(ti)培養物100μL加(jia)到1.5mL無菌(jun)離心(xin)管(guan)中，8000rpm離心(xin)3min，盡量吸(xi)棄上(shang)清(qing)，加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
2、固體(ti)培養物：挑取(qu)單克隆(long)菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min，取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
3、糞便(bian)樣品(pin)：挑取(qu)米粒(li)大小糞便(bian)於(yu)滅菌(jun)離心(xin)管(guan)中，加(jia)入(ru)0.5mL生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離心(xin)3分鐘，棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
4、其他(ta)液體(ti)標本(ben)：取(qu)標本(ben)2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中加(jia)入(ru)50μL DNA抽(chou)提液充分(fen)混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心(xin)3min取(qu)上清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應(ying)。
註：陽(yang)性對(dui)照和(he)陰性對(dui)照為(wei)已經(jing)抽(chou)提好(hao)的核酸(無需(xu)提(ti)取(qu))，直(zhi)接取(qu)5μL加(jia)入(ru)到(dao)反(fan)應(ying)體(ti)系中即可(ke)。由於(yu)陽性(xing)對(dui)照濃度(du)較高，建(jian)議在(zai)樣品(pin)制備(bei)區(qu)域(yu)加(jia)入(ru)陽(yang)性(xing)對(dui)照。 
F9 小鼠畸胎瘤細(xi)胞(bao)脫氫(qing)諾龍醋(cu)酸酯Dehydronandrolon質量規格(ge)：>96%

ERBB2 Others Rat 大鼠 ErbB2 / HER2 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對(dui)照) 延(yan)胡索(suo)酸/富馬(ma)酸/ 反(fan)丁(ding)1二(er)酸Fumaric acid質量規格(ge)：AR,99%

小鼠結締(di)組(zu)織(zhi)L細(xi)胞(bao)株(zhu)929克隆(long);L-929 [L929]甲(jia)磺酸達(da)氟沙星(xing)Danofloxacin mesylate質量規格(ge)：>98%,BR

PLBD2 Others Human 人 PLBD2 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對(dui)照) 甲(jia)磺酸達(da)氟沙星(xing)(標準(zhun)品(pin))Danofloxacin mesylate質量規格(ge)：HPLC>98%,標準(zhun)品(pin)

CM-M053小鼠卵巢(chao)上(shang)皮細(xi)胞(bao)*培(pei)養基100mL海藻(zao)酸鈣Calcium Alginate質量規格(ge)：AR,99%
中國倉(cang)鼠(shu)卵巢(chao)細(xi)胞(bao);CHOUTP;5‘-三1酸尿苷三鈉UTP, Tri Salt質量規格(ge)：>98%,BR

SCARB2 Others Human 人 SCARB2 / LIMP2 / CD36L2 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對(dui)照) Fmoc-N'-甲(jia)基三苯甲(jia)基-L-賴氨酸Fmoc-Lys(Mtt)-OH質量規格(ge)：0.98

氣(qi)管(guan)上皮細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)芴甲(jia)氧(yang)羰基(ji)-O-芐(bian)基(ji)-L-Fmoc-Thr(Bzl)-OH質量規格(ge)：0.98

IFNA1 Others Rat 大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對(dui)照) N'-Fmoc-L-賴氨酸Fmoc-Lys-OH質量規格(ge)：>98%

大鼠尿道上皮(pi)細(xi)胞(bao)*培(pei)養基 100mLFmoc-天(tian)-β-芐(bian)酯Fmoc-L-aspartic acid β-benzyl ester質量規格(ge)：>98%
大鼠胚胎心(xin)肌細(xi)胞(bao);H9c2(2-1)蛋白(bai)激(ji)酶(mei)C（530-558）質量規格(ge)：>95%,BRProtein Kinase C (530-558)

HCT 116細(xi)胞(bao)，結(jie)腸(chang)癌細(xi)胞(bao) 人肝癌細(xi)胞(bao),Bel-7404細(xi)胞(bao) CL-0016A549(人非(fei)小細(xi)胞(bao)肺(fei)癌細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2甲(jia)狀旁腺(xian)激素(su)相(xiang)關蛋白(bai)拼接同(tong)種型3（104-173），人質量規格(ge)：>95%,BRpTH-Related Protein Splice Isoform 3 (140-173) (human)

二(er)氫(qing)還原酶(mei)缺(que)陷型(xing)中國倉(cang)鼠(shu)卵巢(chao)細(xi)胞(bao);CHO/dhFr-甲(jia)狀旁腺(xian)激素(su)（13-34），人質量規格(ge)：>95%,BRpTH (13-34) (human)

CSF1R Others Human 人 M-CSFR 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對(dui)照) 甲(jia)狀旁腺(xian)激素(su)（3-34），牛質量規格(ge)：>95%,BRpTH (3-34) (bovine)

小梁網細(xi)胞(bao)Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105方(1ml)膽(dan)酸質量規格(ge)：≥98%,BR，無水(shui)Cholic acid
玉竹(zhu)染(ran)料法PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒*RN-h, 大鼠海馬(ma)趾(zhi)神經(jing)元(yuan) Rattus瓊脂糖凝(ning)膠6FF1克2～8℃

EPHA7 Others Mouse 小鼠 EPHA7 / EHK-3 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽性對(dui)照) 順-十輕-1-酚(fen) CIS-DqCcxy7-NcPHTHOL 99 36129-47-4

人B細(xi)胞(bao)瘤細(xi)胞(bao);RAMOS1,2,3,4-環丁四羧二(er)酐(gan) Cyclobutcnq-1,2,3,4-tqtrcccrboxylic dicnhydridq 4412-87-6

GREM1 Others Mouse 小鼠 Gremlin 1 / G
儲(chu)存(cun)條件(jian)：
14℃或(huo)－20℃樣品(pin)收集(ji)、處(chu)理及保(bao)存(cun)方法
1. 血(xue)清(qing)：使用(yong)不含熱(re)原和內毒(du)素(su)的(de)試(shi)管(guan)，操(cao)作(zuo)過(guo)程中避免(mian)任何(he)細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收集(ji)血(xue)液後，3000 轉離心(xin)10 分鐘將(jiang)血(xue)清(qing)和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小心(xin)地(di)分(fen)離。
2. 血(xue)漿：EDTA、檸檬酸鹽或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝(ning)。3000 轉離心(xin)30 分鐘取(qu)上清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液：3000 轉離心(xin)10 分鐘去除(chu)顆粒(li)和聚合物。
4. 組織(zhi)勻漿：將(jiang)組(zu)織(zhi)加(jia)入(ru)適(shi)量生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉離心(xin)10 分鐘取(qu)上清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如果樣本(ben)收集(ji)後(hou)不及時檢(jian)測，請(qing)按(an)壹次用量分裝(zhuang)，凍(dong)存於(yu)-20℃，避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融，在(zai)室溫下(xia)解凍(dong)並(bing)確(que)保(bao)樣品(pin)均勻地(di)充(chong)分解凍(dong)。