獨活探(tan)針法(fa)PCR鑒定試(shi)劑盒保存(cun)

特(te)點(dian)：
1. 即(ji)開(kai)即用(yong)，用戶(hu)只需(xu)要(yao)提供(gong)病毒樣品。
2. 根據(ju)地黃保守序(xu)列設計(ji)的專(zhuan)壹性(xing)引(yin)物，與(yu)相(xiang)關病毒無交叉反應(ying)。
3. 靈(ling)敏(min)度可(ke)以達(da)到幾(ji)百(bai)拷貝(bei)/反(fan)應。
4. 壹管式熒光(guang)定量(liang) PCR 檢測，避(bi)免(mian)後續汙染。
5. 本(ben)試劑盒足夠 50 次 20μL 反(fan)應體(ti)系(xi)的熒光(guang)定量(liang) PCR。
6. 本(ben)產品只適用(yong)於科(ke)研(yan)，不(bu)能(neng)用(yong)於臨(lin)床診(zhen)斷。

使(shi)用方法：
壹、樣品采集(ji)：
1、食(shi)品樣品：樣品的采集(ji)與(yu)預(yu)培養(yang)按(an)照(zhao)樣品的采集(ji)與(yu)預(yu)培養(yang)按(an)照(zhao)《食(shi)品衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)檢驗阪(ban)崎(qi)腸桿(gan)菌檢驗要(yao)求進行(xing)。
2、血(xue)液(ye)樣品：用無菌註射(she)器(qi)抽取(qu)受檢者靜脈(mai)血(xue)2mL，註(zhu)入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉(na))抗(kang)凝管，立即混(hun)勻。
3、糞(fen)便樣品：取(qu)糞便(bian)置於滅菌(jun)的(de)收(shou)集(ji)管中送(song)檢。
4、病(bing)竈(zao)部位(wei)樣品：取(qu)發(fa)病(bing)部位(wei)新(xin)鮮(xian)滲(shen)出(chu)物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿血(xue)送(song)檢。
壹、稀釋(shi) PCR 陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)（以(yi) 10E2-10E7 拷貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋(shi)度為(wei)例）
1. 註(zhu)意：由於標(biao)準品濃度非(fei)常高(gao)，因(yin)此(ci)下列稀釋(shi)操作(zuo)壹定要(yao)在獨立的區(qu)域進(jin)行(xing)，千(qian)萬不能(neng)汙染樣品或本(ben)試(shi)劑盒的其他(ta)成分(fen)）。為(wei)增(zeng)加產(chan)品穩定性(xing)和避(bi)免(mian)擴散傳染性(xing)病(bing)原，本產(chan)品不提供(gong)活體(ti)樣品做(zuo)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)，只(zhi)提(ti)供(gong)可以直(zhi)接(jie)使用的 DNA段作為(wei)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離(li)心管(guan)，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭(tou)分(fen)別(bie)加入(ru) 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模板(ban)稀釋(shi)液(ye)（用帶芯(xin)槍(qiang)頭(tou)，下同）。
4. 在 7 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
5. 換(huan)槍頭(tou)，在 6 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)(上(shang)步(bu)稀釋(shi)所(suo)得)，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
6. 換(huan)槍頭(tou)，在 5 號(hao)管中加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)到 5 號(hao)管中，充(chong)分(fen)震蕩(dang) 1 分(fen)鐘，得 1×10E5 拷貝(bei)/μL 的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
7. 重(zhong)復上(shang)面(mian)的(de)操作(zuo)直(zhi)到得(de)到 6 個(ge)稀釋(shi)度的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。放冰上(shang)待(dai)用。
註(zhu)：上(shang)述(shu)樣品建(jian)議經(jing)過增(zeng)菌後，收(shou)集(ji)培養(yang)物(wu)用於檢測。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采用PCR試(shi)劑盒配(pei)備(bei)的(de)DNA抽提(ti)液，按以下說明進行(xing)DNA核酸的(de)粗提。也(ye)可(ke)采購上(shang)海澤(ze)葉生(sheng)物(wu)科(ke)技(ji)有限公司(si)生(sheng)產(chan)的DNA提(ti)取(qu)試劑盒(過柱法(fa)-熒(ying)光(guang)配(pei)套(tao))或其(qi)他(ta)合(he)適的(de)商(shang)業(ye)化(hua)產品，並按照(zhao)相(xiang)應(ying)試(shi)劑盒說明進行(xing)操作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：取(qu)液體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)100μL加到1.5mL無菌離(li)心管(guan)中，8000rpm離(li)心3min，盡量吸(xi)棄(qi)上(shang)清(qing)，加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
2、固體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：挑取(qu)單克(ke)隆菌落與(yu)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
3、糞(fen)便樣品：挑取(qu)米粒(li)大小(xiao)糞便(bian)於滅菌(jun)離(li)心管(guan)中，加入(ru)0.5mL生(sheng)理鹽水(shui)，振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，13000rpm離(li)心3分(fen)鐘，棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
4、其(qi)他(ta)液體(ti)標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱(dian)中加入(ru)50μL DNA抽提(ti)液充(chong)分(fen)混(hun)勻，100℃恒(heng)溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行PCR反(fan)應。
註(zhu)：陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)和陰性(xing)對(dui)照(zhao)為(wei)已經(jing)抽提(ti)好的核酸(無需(xu)提(ti)取(qu))，直(zhi)接(jie)取(qu)5μL加入(ru)到反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中即(ji)可。由於陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)濃度較(jiao)高(gao)，建(jian)議在樣品制備(bei)區(qu)域加入(ru)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。 
實驗流程：
1. 整(zheng)個檢測過程應(ying)嚴格按照(zhao)本(ben)說明書要(yao)求分別(bie)在試劑準備(bei)區(qu)、樣本處(chu)理區(qu)和PCR擴增(zeng)區(qu)進(jin)行(xing)操作(zuo)，各(ge)區(qu)實驗服、儀器(qi) 、耗(hao)材(cai)應獨立使用(yong)，不能(neng)混(hun)用；實驗用吸頭(tou)采(cai)用帶濾(lv)芯(xin)吸(xi)頭(tou)；樣本處(chu)理區(qu)應(ying)配(pei)有生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)，樣本處(chu)理在生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)中進(jin)行操作(zuo)；三個(ge)區(qu)應(ying)該(gai)配(pei)有紫外(wai)線(xian)殺菌(jun)裝置。
2. 為(wei)避(bi)免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣本處(chu)理過程應(ying)在0-4℃條(tiao)件下操作(zuo)，且完成實驗後立即上(shang)機檢測；樣本處(chu)理過程中使(shi)用的器(qi)具(ju)耗(hao)材(cai)應經(jing)過無核酶處(chu)理。
3. 每(mei)次實驗應該設置陰(yin)、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)。
4. 試(shi)劑盒所有試劑在使用前(qian)應(ying)該(gai)在常溫下充(chong)分(fen)融(rong)化(hua)混(hun)勻，並(bing)應瞬(shun)時離(li)心。
5. 試(shi)劑盒內所配(pei)陰(yin)性(xing)和陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)在壹次使(shi)用(yong)前(qian)應(ying)全(quan)部轉移(yi)至(zhi)標(biao)本準備(bei)區(qu)，並(bing)單(dan)獨存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒(ying)光(guang)幹擾(rao)，應(ying)避(bi)免(mian)裸(luo)手直接(jie)接(jie)觸PCR反(fan)應管，並應(ying)避(bi)免(mian)在PCR反(fan)應管上(shang)進(jin)行(xing)任何標(biao)記。
7. 儀器(qi) 擴增(zeng)相(xiang)關參(can)數應按照(zhao)本(ben)說明書相(xiang)關要(yao)求進行(xing)設置；不(bu)同批號試劑不能(neng)混(hun)用。
8. ABI系(xi)列熒光(guang)定量(liang)PCR儀參(can)數設置中不(bu)選ROX校正(zheng)，淬(cui)滅基(ji)因(yin)選擇None。
9. 實驗過程中產(chan)品的廢棄(qi)物(wu)應該(gai)進行無害(hai)化(hua)處(chu)理後方可丟(diu)棄。
儲(chu)存(cun)條(tiao)件：
14℃或－20℃樣品收(shou)集(ji)、處(chu)理及(ji)保存(cun)方法
1. 血(xue)清(qing)：使用不(bu)含(han)熱原和內毒素(su)的試管，操作(zuo)過程中避(bi)免(mian)任何細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收(shou)集(ji)血(xue)液(ye)後，3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘將血(xue)清(qing)和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速(su)小(xiao)心地分離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬酸鹽(yan)或肝(gan)素(su)抗凝。3000 轉(zhuan)離(li)心30 分(fen)鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘去(qu)除顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物(wu)。
4. 組織(zhi)勻漿(jiang)：將組織(zhi)加入(ru)適量(liang)生(sheng)理鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離(li)心10 分(fen)鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保存(cun)：如果(guo)樣本收(shou)集(ji)後不及(ji)時檢測，請(qing)按(an)壹次用(yong)量(liang)分(fen)裝，凍存(cun)於-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)，在室溫下解(jie)凍並(bing)確(que)保樣品均勻地充(chong)分(fen)解(jie)凍。
CL-0327Calu-6(人(ren)肺退行性(xing)癌(ai)細胞(bao))5×106cells/瓶×2硫(liu)酸鹽(yan)Guanine Sulfate質(zhi)量規格：>98.0%，進(jin)口原裝

P3-X63-Ag8細(xi)胞(bao)，骨髓(sui)瘤細胞(bao) 人(ren)T細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細胞(bao),A3細(xi)胞(bao) EB病(bing)毒轉化(hua)的人B細(xi)胞(bao);KMY0909腺(xian)嘌(piao)呤(ling)鹽(yan)酸鹽(yan)Adenine 質(zhi)量規格：>98%,BR

5637(人(ren)膀胱癌(ai)細胞(bao)) 5×106cells/瓶×2；核苷Isine質(zhi)量規格：>98.5%,BR

FCGR2A Others Human 人(ren) CD32a / FCGR2A 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) (標(biao)準品)Isine質(zhi)量規格：HPLC>98%,標(biao)準品

人(ren)整合(he)SV40基(ji)因(yin)的上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao);HBL-100 [HBL100]5‘-腺(xian)嘌(piao)呤(ling)核苷酸二(er)鈉(na)鹽(AMP2Na)5'-AMP-Na2質(zhi)量規格：>98%,BR
人(ren)多發(fa)性(xing)骨髓(sui)瘤細胞(bao);RPMI-8226 [RPMI8826]24-冠8-(>93.0%(GC))24-Crown 8-Ether質(zhi)量規格：>93.0%(GC)

293T/17細(xi)胞(bao)，SV40T轉(zhuan)化(hua)的人胚腎細(xi)胞(bao)(亞(ya)系) 鼠小(xiao)腦細胞(bao),C8-D1A細(xi)胞(bao) CL-0259BC-020(人(ren)癌(ai)細胞(bao))5×106cells/瓶×2二(er)苯(ben)並(bing)-18-冠-6-(>99.0%(GC))Dibenzo-18-crown 6-Ether質(zhi)量規格：>99.0%(GC)

ZR-75-30(人(ren)癌(ai)細胞(bao)) 5×106cells/瓶×216-DOXYL-硬(ying)脂(zhi)酸自(zi)由(you)基(>95.0%(HPLC)(T))16-DOXYL-stearic Acid Free Radical質(zhi)量規格：>95.0%(HPLC)(T)

HBSMC-c 人(ren)類(lei)支氣(qi)管平滑(hua)肌(ji)細胞(bao)(HBSMC) 500,000cells 嬰(ying)兒成纖維細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(1ml)CLA (>98.0%(HPLC))CLA質(zhi)量規格：>98.0%(HPLC)

肺(fei)成纖維細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105方(1ml)MCLA (>98.0%(HPLC))MCLA質(zhi)量規格：>98.0%(HPLC)
LCN2 Others Mouse 小(xiao)鼠 LCN2 / NGAL 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 膽壬(ren)酸酯(zhi)(>89.0%(GC))質(zhi)量規格：>89.0%(GC)Cholesterol Pelargonate

3T3-L1, 小(xiao)鼠前(qian)脂(zhi)肪(fang)細(xi)胞(bao)膽壬(ren)基碳(tan)酸酯(zhi)質量(liang)規(gui)格：Cholesterol nyl Carbonate

B2M Others Rat 大鼠 B2M / Beta-2-microglobulin 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 膽庚(geng)基碳(tan)酸酯(zhi)質量(liang)規(gui)格：Cholesterol Heptyl Carbonate

大鼠海馬神(shen)經(jing)元(yuan)細(xi)胞(bao)*培(pei)養(yang)基(ji) 100mL膽油(you)醇(chun)碳(tan)酸酯(zhi)(>70.0%(HPLC))質(zhi)量規格：>70.0%(HPLC)Cholesterol Oleyl Carbonate

MDCK(NBL-2)狗(gou)腎細胞(bao) MDCK (NBL-2) dog kidney cells MEM(GIBCO)+10%FBS熊(xiong)果(guo)苷(gan)質(zhi)量規格：≥98%，BRArbutin
獨活探(tan)針法(fa)PCR鑒定試(shi)劑盒保存(cun)HA Others H7N9 甲型(xing)流感(gan) H7N9 (A/Hangzhou/1/2013) 血(xue)凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) eetonitnILEWITH0.1%GLACIALACETIC以(yi),含(han)0.1%HPLC級透(tou)明無色液體(ti)RT不(bu)sigma

CL-0289MDA-MB-435(人(ren)癌(ai)高(gao)轉移(yi)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×21,3,5-三肖(xiao)基本;隊(dui)稱三肖(xiao)基本 1,3,5-Trinitbqnzqnq;syM-Trinitbqnzqnq;Bqnzit;TNB 99-32-4