川(chuan)楝(lian)子PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)*

特(te)點(dian)：
1. 即開即用(yong)，用(yong)戶只(zhi)需要提供病(bing)毒(du)樣品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃保守序列設(she)計的專(zhuan)壹(yi)性引物(wu)，與相關病(bing)毒(du)無交(jiao)叉反(fan)應。
3. 靈敏度(du)可(ke)以達到(dao)幾百拷(kao)貝(bei)/反(fan)應(ying)。
4. 壹(yi)管(guan)式熒光定(ding)量(liang) PCR 檢(jian)測，避免(mian)後續(xu)汙染。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)足(zu)夠 50 次(ci) 20μL 反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)的熒光(guang)定(ding)量(liang) PCR。
6. 本(ben)產(chan)品只適(shi)用(yong)於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)能用(yong)於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)。

使(shi)用(yong)方(fang)法(fa)：
壹(yi)、樣品(pin)采集(ji)：
1、食(shi)品(pin)樣品(pin)：樣品(pin)的采集(ji)與預培(pei)養按照樣品(pin)的采集(ji)與預培(pei)養按照《食(shi)品(pin)衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)檢驗(yan)阪崎(qi)腸(chang)桿菌檢驗要求進(jin)行(xing)。
2、血(xue)液(ye)樣品(pin)：用(yong)無菌(jun)註(zhu)射(she)器抽取(qu)受檢(jian)者(zhe)靜(jing)脈(mai)血(xue)2mL，註(zhu)入(ru)無菌(jun)EDTA2Na(或(huo)檸(ning)檬(meng)酸(suan)鈉(na))抗(kang)凝(ning)管(guan)，立(li)即混(hun)勻。
3、糞(fen)便(bian)樣品(pin)：取糞(fen)便(bian)置(zhi)於(yu)滅(mie)菌(jun)的收集(ji)管(guan)中送檢(jian)。
4、病(bing)竈(zao)部(bu)位(wei)樣品(pin)：取發(fa)病(bing)部(bu)位(wei)新(xin)鮮滲出(chu)物(wu)、粘液膿血(xue)送檢(jian)。
壹(yi)、稀釋 PCR 陽性對(dui)照(zhao)（以 10E2-10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 這(zhe) 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋度(du)為例）
1. 註(zhu)意(yi)：由於(yu)標(biao)準品(pin)濃(nong)度(du)非常(chang)高(gao)，因(yin)此下列稀釋操(cao)作(zuo)壹(yi)定(ding)要在獨(du)立(li)的區域進行(xing)，千萬(wan)不(bu)能汙染樣品(pin)或本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)的其他(ta)成(cheng)分）。為增(zeng)加(jia)產(chan)品穩定(ding)性和(he)避免(mian)擴(kuo)散(san)傳染(ran)性病(bing)原(yuan)，本(ben)產(chan)品不提(ti)供活(huo)體(ti)樣品(pin)做陽性對(dui)照(zhao)，只提供可(ke)以直(zhi)接使(shi)用(yong)的 DNA段(duan)作(zuo)為(wei)陽性對(dui)照(zhao)。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離(li)心管(guan)，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭(tou)分別加入 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 模(mo)板(ban)稀釋液(ye)（用(yong)帶芯(xin)槍(qiang)頭(tou)，下同(tong)）。
4. 在(zai) 7 號管(guan)中加入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照(zhao)，充分震蕩 1 分鐘，得(de)1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
5. 換槍(qiang)頭(tou)，在 6 號管(guan)中加入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照(zhao)(上(shang)步(bu)稀釋所得(de))，充(chong)分震蕩 1 分鐘，得(de) 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
6. 換槍(qiang)頭(tou)，在 5 號管(guan)中加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照(zhao)到(dao) 5 號管(guan)中，充分震蕩 1 分鐘，得(de) 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
7. 重(zhong)復上(shang)面(mian)的操作(zuo)直(zhi)到(dao)得(de)到(dao) 6 個(ge)稀釋度(du)的陽性對(dui)照(zhao)。放冰(bing)上(shang)待(dai)用(yong)。
註(zhu)：上(shang)述樣品(pin)建(jian)議經過(guo)增菌(jun)後，收(shou)集(ji)培(pei)養物用(yong)於(yu)檢(jian)測。 
二(er)、DNA提(ti)取(qu)：
可(ke)采(cai)用(yong)PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配(pei)備的DNA抽提(ti)液，按以下說明進行(xing)DNA核(he)酸(suan)的粗提(ti)。也可(ke)采(cai)購(gou)上(shang)海澤葉(ye)生物科(ke)技有限公(gong)司(si)生產(chan)的DNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he)(過(guo)柱(zhu)法(fa)-熒(ying)光(guang)配(pei)套(tao))或(huo)其他(ta)合(he)適的商業(ye)化(hua)產(chan)品，並按照相(xiang)應試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明進行(xing)操(cao)作(zuo)。
1、液(ye)體(ti)培(pei)養物：取液體(ti)培(pei)養物100μL加(jia)到(dao)1.5mL無菌(jun)離(li)心管(guan)中，8000rpm離(li)心3min，盡(jin)量(liang)吸(xi)棄(qi)上(shang)清(qing)，加(jia)入50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
2、固體(ti)培(pei)養物：挑取單(dan)克(ke)隆(long)菌(jun)落(luo)與50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min，取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
3、糞(fen)便(bian)樣品(pin)：挑取(qu)米粒(li)大(da)小(xiao)糞(fen)便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離(li)心管(guan)中，加入0.5mL生(sheng)理鹽(yan)水(shui)，振(zhen)蕩混(hun)勻，13000rpm離(li)心3分鐘，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)中加入50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
4、其他(ta)液(ye)體(ti)標(biao)本：取(qu)標(biao)本2-3mL，13000rpm離(li)心3min，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)中加入50μL DNA抽提(ti)液充分混(hun)勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離(li)心3min取(qu)上(shang)清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反(fan)應(ying)。
註(zhu)：陽性對(dui)照(zhao)和陰(yin)性對(dui)照(zhao)為已經(jing)抽提(ti)好的核(he)酸(suan)(無需提取(qu))，直(zhi)接取5μL加(jia)入(ru)到(dao)反應體(ti)系(xi)中即可(ke)。由於(yu)陽性對(dui)照(zhao)濃度較高，建(jian)議在樣品(pin)制(zhi)備(bei)區(qu)域加入(ru)陽性對(dui)照(zhao)。 
實(shi)驗(yan)流程：
1. 整個(ge)檢(jian)測過(guo)程應(ying)嚴(yan)格(ge)按照本(ben)說明書(shu)要求分別在試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)區、樣本(ben)處(chu)理區(qu)和(he)PCR擴(kuo)增區(qu)進(jin)行操(cao)作(zuo)，各(ge)區(qu)實(shi)驗(yan)服、儀(yi)器 、耗(hao)材(cai)應(ying)獨(du)立(li)使(shi)用(yong)，不能混(hun)用(yong)；實驗(yan)用(yong)吸頭(tou)采用(yong)帶濾(lv)芯(xin)吸頭(tou)；樣本(ben)處(chu)理區(qu)應(ying)配有(you)生物安(an)全(quan)櫃(gui)，樣本(ben)處(chu)理在(zai)生(sheng)物安(an)全(quan)櫃(gui)中進行操作(zuo)；三個(ge)區(qu)應(ying)該配有(you)紫外(wai)線殺(sha)菌(jun)裝(zhuang)置(zhi)。
2. 為(wei)避免(mian)RNA降(jiang)解(jie)，樣本(ben)處(chu)理過(guo)程應(ying)在0-4℃條件下操作(zuo)，且(qie)完成實驗後立(li)即上機(ji)檢測；樣本(ben)處(chu)理過(guo)程中使(shi)用(yong)的器具(ju)耗(hao)材(cai)應(ying)經(jing)過(guo)無核(he)酶處(chu)理。
3. 每次(ci)實(shi)驗(yan)應該設(she)置(zhi)陰(yin)、陽性對(dui)照(zhao)。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所有(you)試(shi)劑(ji)在(zai)使(shi)用(yong)前應(ying)該在常(chang)溫(wen)下充分融(rong)化(hua)混(hun)勻，並應(ying)瞬(shun)時離(li)心。
5. 試(shi)劑(ji)盒(he)內(nei)所配(pei)陰(yin)性和(he)陽性對(dui)照(zhao)在壹次使(shi)用(yong)前應(ying)全(quan)部(bu)轉(zhuan)移至標(biao)本準(zhun)備(bei)區(qu)，並單(dan)獨(du)存(cun)放。
6. 為(wei)防(fang)止(zhi)熒(ying)光(guang)幹擾，應避免(mian)裸手直(zhi)接接觸(chu)PCR反(fan)應(ying)管(guan)，並(bing)應(ying)避免(mian)在PCR反(fan)應(ying)管(guan)上(shang)進(jin)行(xing)任何(he)標(biao)記。
7. 儀(yi)器 擴(kuo)增相(xiang)關(guan)參(can)數(shu)應按照本(ben)說明書(shu)相(xiang)關(guan)要求進(jin)行(xing)設(she)置(zhi)；不同(tong)批號試(shi)劑(ji)不(bu)能混(hun)用(yong)。
8. ABI系(xi)列(lie)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀(yi)參(can)數(shu)設(she)置(zhi)中不選(xuan)ROX校(xiao)正(zheng)，淬滅(mie)基(ji)因(yin)選(xuan)擇(ze)None。
9. 實(shi)驗(yan)過(guo)程中產(chan)品的廢(fei)棄(qi)物(wu)應該進行(xing)無害(hai)化(hua)處(chu)理後方(fang)可(ke)丟棄(qi)。
儲(chu)存(cun)條件：
14℃或(huo)－20℃樣品(pin)收集(ji)、處(chu)理及(ji)保存(cun)方(fang)法(fa)
1. 血(xue)清(qing)：使(shi)用(yong)不含(han)熱(re)原(yuan)和內(nei)毒(du)素(su)的試(shi)管(guan)，操(cao)作(zuo)過(guo)程中避免(mian)任何(he)細(xi)胞(bao)刺激(ji)，收集血液(ye)後，3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘將血清(qing)和(he)紅(hong)細胞(bao)迅速小(xiao)心(xin)地(di)分離(li)。
2. 血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽或(huo)肝素抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離(li)心30 分鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
3. 細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)：3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘去(qu)除顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物。
4. 組織(zhi)勻漿：將組織(zhi)加(jia)入適(shi)量(liang)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離(li)心10 分鐘取(qu)上(shang)清(qing)。
5. 保存(cun)：如果樣本(ben)收集(ji)後不(bu)及(ji)時檢(jian)測，請(qing)按壹次(ci)用(yong)量分裝(zhuang)，凍存(cun)於(yu)-20℃，避免(mian)反復凍融(rong)，在(zai)室(shi)溫(wen)下解(jie)凍並確保樣品(pin)均勻地充(chong)分解(jie)凍。
小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎(tai)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao);BALB/C 3T3Terfenadine質量規(gui)格(ge)：>98%,BR

CD14 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) CD14 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) 維(wei)生(sheng)素(su)C鈉(na)（標(biao)準品(pin)） ascorbate質量規(gui)格(ge)：含(han)量(liang)測定(ding)

小(xiao)鼠(shu)肝癌細(xi)胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6]（標(biao)準品(pin)）Thiamine nitrate質量規(gui)格(ge)：含(han)量(liang)測定(ding)

CX3CL1 Others Canine 狗(gou) Fractalkine / CX3CL1 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) α-,細(xi)辛(xin)(標(biao)準品(pin))alpha-Asarone質量規(gui)格(ge)：HPLC≥99%,標(biao)準品(pin)

PC-12(高(gao)分化)，PC12，大(da)鼠(shu)腎(shen)上(shang)腺(xian)髓質嗜鉻瘤分化細(xi)胞(bao)株(高(gao)分化)鹽(yan)酸(suan)二氧(yang)丙嗪（標(biao)準品(pin)）Dioxopromethazine 質量規(gui)格(ge)：鑒(jian)別
A-498(人(ren)腎(shen)癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2薯(shu)蕷(yu)皂(zao)素Diosgenin質量規(gui)格(ge)：>95%,BR

HNEpC-c 人(ren)鼻粘(zhan)膜上皮細(xi)胞(bao)(HNEpC) 500,000cells 支(zhi)氣(qi)管(guan)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)D-半(ban)鹽(yan)酸(suan)鹽壹(yi)水(shui)D-Cysteine  mohydrate質量規(gui)格(ge)：度(du)大於(yu)98%,BR，壹(yi)水(shui)物(wu)

膀(pang)胱(guang)上皮細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)鈣(gai)蛋(dan)白(bai)酶抑制(zhi)劑(ji)II(進(jin)口(kou))Calpain Inhibitor II(ALLM)質量規(gui)格(ge)：≥95%,美(mei)國(guo)進(jin)口(kou)

LTA4H Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) Leukoiene A4 Hydrolase / LTA4H 桿狀病(bing)毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) 炔孕(yun)酮(tong)/素(su)(標(biao)準品(pin))Ethisterone質量規(gui)格(ge)：>98%,標(biao)準品(pin)

人(ren)癌細(xi)胞;MDA-MB-453炔孕(yun)酮(tong)/素(su)Ethisterone質量規(gui)格(ge)：>98%
WI-38細(xi)胞(bao)，人(ren)二倍(bei)體(ti)胚(pei)肺(fei)細胞(bao) 人(ren)肺(fei)腺癌細(xi)胞,LTEP-a-2細(xi)胞(bao) QBC-939, 人(ren)膽(dan)管(guan)癌細(xi)胞N-*基(ji)矽基(ji)乙酰(xian)胺(>98.0%(GC))質量規(gui)格(ge)：>98.0%(GC)N-Trimethylsilylacetamide

貓(mao)腎(shen)細(xi)胞(bao);CRFK1,1,3,3-四(si)甲基(ji)二矽氮烷(>97.0%(GC))質量規(gui)格(ge)：>97.0%(GC)1,1,3,3-Tetramethyldisilazane

NA Others H1N1 甲型流感(gan) H1N1 (A/California/04/2009) 神(shen)經(jing)氨(an)酸(suan)酶 (Neuraminidase/NA) 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) 1-(叔(shu)丁(ding)基(ji)二甲矽基(ji))咪(mi)唑(>98.0%(T))質量規(gui)格(ge)：>98.0%(T)1-(tert-Butyldimethylsilyl)imidazole

CL-0386MPC-11(小(xiao)鼠(shu)漿(jiang)細(xi)胞(bao)瘤)5×106cells/瓶(ping)×2N-芐氧(yang)羰基(ji)-L-質量規(gui)格(ge)：>98%,BRZ-Gln-OH

EFNB1 Others Rat 大(da)鼠(shu) Ephrin-B1 / EFNB1 人(ren)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) N-CBZ-L-質量規(gui)格(ge)：>98%,BRCBZ-L-Gly
川(chuan)楝(lian)子PCR鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)*EFNA4 Protein Mouse 重(zhong)組小鼠 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋(dan)白(bai) (Fc 標(biao)簽(qian))(Fc 標(biao)簽(qian))3,3'-二(er)硝(xiao)基(ji)二苯(ben)甲酮(tong)(>99.0%(GC))質量規(gui)格(ge)：>99.0%(GC)3,3'-Dinitrobenzophene

BE(2)-M17(人(ren)神經(jing)母(mu)細胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎(tai)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao);PA3172,4'-二(er)氟二(er)苯(ben)甲酮(tong)(>95.0%(GC))質量規(gui)格(ge)：>95.0%(GC)2,4'-Difluorobenzophene

人(ren)心臟(zang)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞(bao)HCF4,4'-二(er)氟二(er)苯(ben)