蒲(pu)公英(ying)PCR鑒(jian)定(ding)試劑(ji)盒(he)說明(ming)書

特(te)點：
1. 即開(kai)即用，用戶只(zhi)需(xu)要(yao)提供病(bing)毒(du)樣(yang)品(pin)。
2. 根(gen)據(ju)地黃保(bao)守(shou)序(xu)列(lie)設計(ji)的(de)專壹(yi)性引物，與(yu)相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)無(wu)交(jiao)叉反(fan)應。
3. 靈敏(min)度(du)可(ke)以(yi)達到幾百(bai)拷貝/反應。
4. 壹管式(shi)熒光(guang)定(ding)量 PCR 檢測，避免(mian)後續汙染(ran)。
5. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)足(zu)夠 50 次 20μL 反應體系(xi)的(de)熒光(guang)定(ding)量 PCR。
6. 本產品(pin)只(zhi)適(shi)用(yong)於科研，不(bu)能(neng)用(yong)於臨床(chuang)診斷(duan)。

使用(yong)方法：
壹(yi)、樣品(pin)采(cai)集：
1、食(shi)品(pin)樣(yang)品(pin)：樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集(ji)與(yu)預培(pei)養(yang)按(an)照樣品(pin)的(de)采(cai)集(ji)與(yu)預培(pei)養(yang)按(an)照《食(shi)品(pin)衛(wei)生(sheng)微(wei)生(sheng)物學檢驗(yan)阪崎(qi)腸桿(gan)菌(jun)檢驗(yan)要求(qiu)進行(xing)。
2、血液(ye)樣品(pin)：用(yong)無菌(jun)註射器(qi)抽取受檢者(zhe)靜脈(mai)血2mL，註(zhu)入(ru)無(wu)菌EDTA2Na(或(huo)檸檬(meng)酸鈉)抗凝(ning)管，立(li)即(ji)混勻。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：取糞(fen)便(bian)置於滅(mie)菌的(de)收(shou)集(ji)管中(zhong)送檢。
4、病(bing)竈部位樣(yang)品(pin)：取發病(bing)部(bu)位新(xin)鮮滲出(chu)物(wu)、粘(zhan)液(ye)膿血送檢。
壹(yi)、稀釋(shi) PCR 陽(yang)性對(dui)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍(bei)稀釋(shi)度(du)為例）
1. 註(zhu)意(yi)：由於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度非(fei)常高(gao)，因(yin)此下列(lie)稀釋(shi)操(cao)作壹(yi)定(ding)要在獨立的(de)區(qu)域(yu)進(jin)行(xing)，千萬(wan)不(bu)能(neng)汙染(ran)樣品(pin)或(huo)本試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)其(qi)他成分(fen)）。為(wei)增(zeng)加(jia)產品(pin)穩(wen)定(ding)性和避(bi)免(mian)擴(kuo)散(san)傳染(ran)性病(bing)原，本產品(pin)不(bu)提供活(huo)體(ti)樣品(pin)做陽(yang)性對(dui)照，只(zhi)提供可(ke)以(yi)直接使用(yong)的(de) DNA段(duan)作為(wei)陽(yang)性對(dui)照。
2. 標(biao)記 6 個(ge)離心(xin)管，分(fen)別(bie)為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3. 用(yong)帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)分別(bie)加(jia)入(ru) 45 μL 熒光(guang) PCR 模板(ban)稀釋(shi)液(ye)（用帶(dai)芯(xin)槍頭(tou)，下同）。
4. 在 7 號(hao)管中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得(de)1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用。
5. 換槍頭(tou)，在 6 號(hao)管中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照(上(shang)步稀釋(shi)所得(de))，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用。
6. 換槍頭(tou)，在 5 號(hao)管中(zhong)加入(ru) 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照到 5 號(hao)管中(zhong)，充(chong)分震(zhen)蕩 1 分鐘(zhong)，得(de) 1×10E5 拷貝/μL 的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用。
7. 重復上面(mian)的(de)操(cao)作直到得(de)到 6 個(ge)稀釋(shi)度(du)的(de)陽(yang)性對(dui)照。放冰上(shang)待(dai)用。
註：上述(shu)樣品(pin)建(jian)議經(jing)過(guo)增(zeng)菌(jun)後，收(shou)集(ji)培(pei)養(yang)物(wu)用(yong)於檢測。 
二(er)、DNA提取：
可(ke)采(cai)用PCR試(shi)劑(ji)盒(he)配備(bei)的(de)DNA抽(chou)提液(ye)，按(an)以(yi)下(xia)說明(ming)進行(xing)DNA核酸的(de)粗(cu)提。也(ye)可(ke)采(cai)購上海(hai)澤葉(ye)生(sheng)物科技(ji)有限(xian)公司生(sheng)產的(de)DNA提取試劑(ji)盒(he)(過(guo)柱(zhu)法-熒光(guang)配(pei)套(tao))或(huo)其(qi)他合(he)適(shi)的(de)商業化產品(pin)，並(bing)按(an)照相(xiang)應試劑(ji)盒(he)說明(ming)進行(xing)操作。
1、液(ye)體培(pei)養(yang)物(wu)：取液(ye)體培(pei)養(yang)物(wu)100μL加(jia)到1.5mL無(wu)菌離心(xin)管中(zhong)，8000rpm離心(xin)3min，盡量吸棄(qi)上(shang)清，加(jia)入50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
2、固體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)：挑(tiao)取單克(ke)隆菌(jun)落與(yu)50μL DNA抽(chou)提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min，取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
3、糞(fen)便(bian)樣(yang)品(pin)：挑(tiao)取米粒大小(xiao)糞(fen)便(bian)於(yu)滅(mie)菌(jun)離心(xin)管中(zhong)，加入(ru)0.5mL生理鹽水(shui)，振蕩混勻，13000rpm離心(xin)3分鐘，棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
4、其他液(ye)體標(biao)本：取標(biao)本2-3mL，13000rpm離心(xin)3min，棄上清(qing)，沈澱中(zhong)加入(ru)50μL DNA抽提液(ye)充(chong)分混勻，100℃恒溫(wen)10min，13000rpm離心(xin)3min取上清(qing)5μL進(jin)行(xing)PCR反應。
註：陽(yang)性對(dui)照和陰(yin)性對(dui)照為已經(jing)抽提好的(de)核(he)酸(suan)(無需(xu)提取)，直接取5μL加入(ru)到反(fan)應體系(xi)中(zhong)即可(ke)。由(you)於陽(yang)性對(dui)照濃(nong)度較高(gao)，建(jian)議在(zai)樣(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)區域(yu)加(jia)入陽(yang)性對(dui)照。 
實(shi)驗流程(cheng)：
1. 整個(ge)檢測過(guo)程(cheng)應嚴格按(an)照本說明(ming)書要(yao)求分別(bie)在(zai)試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)區、樣本(ben)處(chu)理(li)區和PCR擴(kuo)增(zeng)區(qu)進(jin)行(xing)操作，各(ge)區實(shi)驗服(fu)、儀(yi)器(qi) 、耗材應獨立(li)使用(yong)，不能(neng)混用；實驗用吸頭(tou)采用帶(dai)濾芯(xin)吸頭(tou)；樣本處(chu)理(li)區應配有(you)生物(wu)安(an)全櫃，樣(yang)本處(chu)理(li)在生(sheng)物安(an)全櫃中(zhong)進行(xing)操作；三個(ge)區應該(gai)配有(you)紫(zi)外線殺(sha)菌裝(zhuang)置。
2. 為避(bi)免(mian)RNA降解，樣本處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)應在0-4℃條件下(xia)操(cao)作，且(qie)完(wan)成實(shi)驗(yan)後立(li)即(ji)上機檢測；樣本(ben)處(chu)理(li)過(guo)程(cheng)中(zhong)使用(yong)的(de)器(qi)具耗材應經過(guo)無(wu)核酶處(chu)理(li)。
3. 每次實(shi)驗應該(gai)設置陰、陽(yang)性對(dui)照。
4. 試(shi)劑(ji)盒(he)所有試(shi)劑(ji)在(zai)使用(yong)前(qian)應該(gai)在常(chang)溫(wen)下充(chong)分融(rong)化混勻，並(bing)應瞬時(shi)離心(xin)。
5. 試劑(ji)盒(he)內所配陰(yin)性和陽(yang)性對(dui)照在壹次使用(yong)前(qian)應全部(bu)轉(zhuan)移至(zhi)標(biao)本準(zhun)備(bei)區，並單(dan)獨存放。
6. 為防(fang)止熒光(guang)幹(gan)擾，應避免(mian)裸(luo)手直接接觸PCR反應管，並(bing)應避免(mian)在(zai)PCR反應管上(shang)進(jin)行(xing)任何(he)標(biao)記。
7. 儀(yi)器(qi) 擴(kuo)增(zeng)相(xiang)關(guan)參(can)數(shu)應按(an)照本說明(ming)書相(xiang)關(guan)要(yao)求進行(xing)設置；不同(tong)批號(hao)試(shi)劑(ji)不(bu)能(neng)混用。
8. ABI系(xi)列(lie)熒光(guang)定(ding)量PCR儀(yi)參(can)數(shu)設置中(zhong)不選(xuan)ROX校正(zheng)，淬(cui)滅基(ji)因選(xuan)擇None。
9. 實(shi)驗過(guo)程(cheng)中(zhong)產品(pin)的(de)廢(fei)棄(qi)物(wu)應該(gai)進行(xing)無害(hai)化處(chu)理(li)後方(fang)可(ke)丟棄。
儲存(cun)條件：
14℃或－20℃樣品(pin)收(shou)集(ji)、處(chu)理(li)及(ji)保存(cun)方法
1. 血清(qing)：使用(yong)不含(han)熱(re)原和內毒(du)素(su)的(de)試(shi)管，操(cao)作過(guo)程(cheng)中(zhong)避免(mian)任(ren)何(he)細(xi)胞刺激，收(shou)集(ji)血液(ye)後，3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘將(jiang)血清(qing)和紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速小(xiao)心(xin)地分離。
2. 血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽或(huo)肝素抗(kang)凝(ning)。3000 轉(zhuan)離心(xin)30 分鐘取上清(qing)。
3. 細(xi)胞上(shang)清液(ye)：3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘去(qu)除顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物。
4. 組織勻漿(jiang)：將(jiang)組織加入適(shi)量(liang)生理鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。3000 轉(zhuan)離心(xin)10 分鐘取上清(qing)。
5. 保(bao)存(cun)：如(ru)果樣(yang)本收(shou)集(ji)後不(bu)及(ji)時檢測，請(qing)按(an)壹(yi)次用(yong)量分裝(zhuang)，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避免(mian)反(fan)復凍融(rong)，在(zai)室(shi)溫(wen)下解凍並確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻地充(chong)分解凍。
GRK6 Others Human 人(ren) GRK6 / GPRK6 桿狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 舒(shu)巴(ba)坦酸(標(biao)準(zhun)品(pin))Sulbactam Acid質(zhi)量(liang)規(gui)格：≥98%,標(biao)準(zhun)品(pin)

tTA基(ji)因修(xiu)飾(shi)的(de)小(xiao)鼠胰(yi)腺(xian)癌細(xi)胞(B類(lei));Pan02-CAG-tTA-4B3沙蟾(chan)毒(du)精(jing)(標(biao)準(zhun)品(pin))Arebufagin質(zhi)量(liang)規(gui)格：HPLC≥98%，標(biao)準(zhun)品(pin)

SH-SY5Y細(xi)胞，神(shen)經母(mu)細(xi)胞瘤細(xi)胞 人(ren)膽(dan)囊癌細(xi)胞,GBC-SD細(xi)胞 CL-0048Ca Ski(人(ren)上皮(pi)細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2坦(tan)西(xi)莫司,脂化物(wu)Temsirolimus;CCI-779;NSC 683864質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98%,選(xuan)擇性的(de)mTOR抑制(zhi)劑(ji)

人(ren)APP-PS1(C410Y)雙(shuang)基(ji)因(yin)轉(zhuan)染(ran)細(xi)胞株(zhu);7WCY1.0富馬(ma)酸盧(lu)帕(pa)他定(ding)Rupatadine fumarate質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99%,BR

IL32 Others Human 人 Ierleukin-32 / IL-32 (isoform alpha) 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 富馬(ma)酸盧(lu)帕(pa)他定(ding)(標(biao)準(zhun)品(pin))Rupatadine fumarate質(zhi)量(liang)規(gui)格：>99%,標(biao)準(zhun)品(pin)
IL23R Others Human 人(ren) IL23R / IL23 Receptor 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 雌(ci)激(ji)素酮-d4Estrone-d4質(zhi)量(liang)規(gui)格：美國進口(kou)

腎動脈內皮(pi)細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105方(fang)(1ml)Clindamycin質(zhi)量(liang)規(gui)格：美國進口(kou)

CGM1細(xi)胞，人(ren)EB病(bing)毒(du)轉(zhuan)化的(de)B細(xi)胞 615小(xiao)鼠滑膜(mo)肉(rou)瘤瘤株(zhu),ZM755細(xi)胞 人(ren)腦血管周細(xi)胞裂(lie)解物HBVCL4'-羥(qiang)基(ji)苯(ben)偶(ou)氮(dan)基(ji)-4-羧酸水(shui)合(he)物(>98.0%(HPLC)(T))4'-Hydroxyazobenzene-4-carboxylic Acid Hydrate質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98.0%(HPLC)(T)

NCI-H716(人結直腸腺(xian)癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2羧(suo)基(ji)甲(jia)氧(yang)基胺(an)半鹽酸(suan)鹽(>98.0%(T))Carboxymethoxylamine Hemi質(zhi)量(liang)規(gui)格：>98.0%(T)

CA46(人Butts瘤細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 CL-0022AGS(人(ren)胃(wei)腺癌細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2 小(xiao)鼠瘤細(xi)胞(NK靶(ba)細(xi)胞);YAC-1吉(ji)拉德(de)試劑(ji) P(>95.0%(T))Girard's Reagent P質(zhi)量(liang)規(gui)格：>95.0%(T)
Pig MSC豬骨髓間質(zhi)幹(gan)細(xi)胞 Pig MSC of porcine bone marrow mesenchymal stem cells DMEM低(di)糖+10% FBS+glutamin正十(shi)二(er)烷(wan)基(ji)苯(ben)(analytical standard,≥99.5%(GC))質(zhi)量(liang)規(gui)格：analytical standard,≥99.5%(GC)1-Phenyldodecane

IL6 Protein Rat 重(zhong)組大鼠 IL6 / Ierleukin-6 蛋白2-苯(ben)乙醇(chun)(GC,>99.5%(GC))質(zhi)量(liang)規(gui)格：GC,>99.5%(GC)2-Phenylethal

RM1(大鼠肌肉成纖(xian)維樣細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 PC-12未(wei)分(fen)化(大鼠腎上腺嗜(shi)鉻細(xi)胞瘤)1,3-(Standard for GC,≥99.5%(GC))質(zhi)量(liang)規(gui)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)1,3-Propanediol

CL-0132KG-1(人(ren)急(ji)性骨髓性白血病(bing)細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2α-蒎(pai)1(Standard for GC,≥99.0%)質(zhi)量(liang)規(gui)格：Standard for GC,≥99.0%(−)-α-Pinene

TNFRSF14 Others Cymolgus 食(shi)蟹猴(hou) HVEM / TNFRSF14 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽(yang)性對(dui)照) 1,2,3,4-四(si)氫萘(THN)(標(biao)準(zhun)品(pin))質(zhi)量(liang)規(gui)格：分析(xi)標(biao)準(zhun)品(pin),≥99.5%(GC)1,2,3,4-Tetrahydronaphthalene
蒲(pu)公英(ying)PCR鑒(jian)定(ding)試劑(ji)盒(he)說明(ming)書BTC Protein Mouse 重組小鼠 BTC / Betacellulin 蛋白 (His & Fc 標(biao)簽)三乙(yi)基嶙酸鹽，英(ying)文(wen)名(ming)或(huo)英文(wen)縮(suo)寫：TEP，級(ji)別(bie)：高(gao)，97%，規(gui)格：500克(ke)

293E(人(ren)胚(pei)腎(shen)細(xi)胞(EBNA1基(ji)因修飾(shi))) 5×106cells/瓶(ping)×2 原代神(shen)經膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞特(te)制(zhi)基礎培(pei)養(yang)基(ji)Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：500/250/100ml Bemyl,95% 17804-35-2 5G 通(tong)用(yong)試(shi)劑(ji)

人(ren)絨毛膜(mo)內皮(pi)細(xi)胞HVCEC流醋 litxium sulfctq mohydrctq