隨著流(liu)式細(xi)胞術的(de)日(ri)益發(fa)展(zhan)，流式抗(kang)體及(ji)熒(ying)光標記(ji)產品(pin)的(de)種類、數量(liang)也(ye)在不(bu)斷增(zeng)多(duo)，加上多(duo)色分析(xi)實(shi)驗方案(an)需求(qiu)的(de)增(zeng)長(chang)，逐(zhu)漸(jian)產生了(le)抗(kang)體(ti)難(nan)選(xuan)擇、熒(ying)光難搭(da)配等(deng)問(wen)題，如(ru)何選(xuan)擇合(he)適的(de)流(liu)式抗(kang)體，也(ye)成(cheng)為了流式技術是否能(neng)成(cheng)功(gong)的(de)關(guan)鍵(jian)因(yin)素之(zhi)1。

流(liu)式抗(kang)體的(de)選(xuan)擇：

1、流式抗(kang)體本(ben)身(shen)也(ye)是(shi)抗體，所以(yi)選(xuan)擇流式抗(kang)體定要(yao)滿足(zu)抗體(ti)選(xuan)擇最(zui)基本(ben)的(de)條(tiao)件：目標(biao)蛋(dan)白特(te)異(yi)性(xing)，反應種屬(shu)以(yi)及應用(yong)實(shi)驗。

2、流式抗(kang)體熒(ying)光標記(ji)的(de)方(fang)式包(bao)括直接(jie)標記(ji)和(he)間接(jie)標記(ji)兩(liang)種。在流式實(shi)驗過程(cheng)中(zhong)，盡量(liang)減(jian)少實驗工序(xu)和(he)過程(cheng)，以(yi)保(bao)證(zheng)實驗的(de)真實和(he)準確(que)性。因此(ci)在條件允(yun)許(xu)的(de)範圍(wei)內(nei)，建議(yi)盡量(liang)用(yong)直接(jie)標記(ji)的(de)抗(kang)體(ti)進行(xing)實驗而(er)不(bu)去做間接(jie)標記(ji)。

3、流(liu)式抗(kang)體熒(ying)光標記(ji)的(de)選(xuan)擇：如(ru)果實驗中(zhong)檢(jian)測單指標(biao)：不(bu)同熒(ying)光標記(ji)在不(bu)同的(de)儀(yi)器(qi)上強度(du)不(bu)同。FACS Calibur儀(yi)器為例：PE ＞APC ＞PE-Cy5 ＞PerCP ＞FITC ＞PerCP-Cy5.5，通常來(lai)說，PE*，適(shi)用於弱表(biao)達抗(kang)原(yuan)。FITC強度(du)較(jiao)弱，適(shi)用(yong)於強(qiang)表(biao)達抗(kang)原(yuan)，使用(yong)範圍(wei)比較(jiao)廣(guang)。用戶(hu)需根(gen)據(ju)檢(jian)測(ce)的(de)目標(biao)蛋(dan)白進行(xing)具體(ti)選(xuan)擇。如(ru)果同時(shi)檢測(ce)多(duo)個指標(biao)：確(que)認流(liu)式細(xi)胞儀能(neng)檢測(ce)多(duo)少個通(tong)道(dao)：流(liu)式抗(kang)體每個通道只(zhi)能(neng)選(xuan)擇1種熒(ying)光素。各個通(tong)道之(zhi)間(jian)的(de)熒(ying)光素可以(yi)隨意(yi)搭(da)配。如(ru)：實驗者同(tong)時(shi)檢測(ce)三(san)個(ge)指(zhi)標，可以(yi)在圖1中(zhong)綠(lv)色、黃色和(he)紅色(se)三(san)個(ge)通(tong)道中(zhong)各(ge)選(xuan)個(ge)適當(dang)的(de)熒(ying)光素標記(ji)，FITC、PE和(he)PE-cy5。切忌所有指標(biao)選(xuan)擇同個(ge)通道(dao)的(de)熒(ying)光標記(ji)，以(yi)防(fang)止(zhi)熒(ying)光的(de)重疊(die)和(he)相互(hu)幹(gan)擾，影(ying)響最(zui)後(hou)結果。因(yin)此(ci)，流式細(xi)胞儀的(de)通(tong)道(dao)越(yue)多(duo)，同份樣(yang)本能(neng)同時(shi)做的(de)表(biao)面(mian)/胞內(nei)標(biao)誌(zhi)就(jiu)越(yue)多(duo)。常用熒(ying)光標記(ji)包(bao)括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。

流式抗(kang)體的(de)選(xuan)擇使用(yong)註意(yi)事(shi)項：

1、建議(yi)實(shi)驗細胞的(de)數(shu)量(liang)和(he)抗體(ti)的(de)比例(li)要(yao)適當(dang)。細(xi)胞過量(liang)或抗體過量(liang)都可能(neng)使實(shi)驗結果(guo)受(shou)影響(xiang)，因此(ci)需要(yao)優化試(shi)驗條件。註：不(bu)同的(de)流(liu)式技術對(dui)抗體的(de)需(xu)求(qiu)量(liang)有(you)較(jiao)大(da)差(cha)異(yi)，例(li)如(ru)傳統(tong)流(liu)式細(xi)胞術（采用鞘(qiao)液(ye)流系統(tong)）需(xu)要1×106個(ge)細(xi)胞為起(qi)始(shi)上樣量(liang)，抗(kang)體用(yong)量為10μl，而(er)微(wei)流(liu)式細(xi)胞術則只需5×105個細(xi)胞，抗體(ti)用(yong)量(liang)減(jian)少到5μl。

2、 直標(biao)的(de)流(liu)式抗(kang)體應該(gai)4℃避光保(bao)存，不(bu)要冷凍(dong)。

3、 盡量(liang)選(xuan)擇經(jing)實驗驗證(zheng)的(de)流(liu)式抗(kang)體，以(yi)保(bao)證(zheng)實驗結果(guo)。