PCR反應五要素(su)： 

參加(jia)PCR反應的(de)物(wu)質主(zhu)要有(you)五種(zhong)即(ji)引(yin)物(wu)、酶(mei)、dNTP、模板(ban)和(he)Mg2+

引(yin)物(wu)：引(yin)物(wu)是(shi)PCR特(te)異(yi)性反應的(de)關(guan)鍵(jian)，PCR 產物(wu)的(de)特(te)異(yi)性取(qu)決於(yu)引(yin)物(wu)與(yu)模板(ban)DNA互補的(de)程度(du)。理(li)論(lun)上(shang)，只要知(zhi)道(dao)任何壹(yi)段(duan)模板(ban)DNA序(xu)列， 就(jiu)能按(an)其設(she)計(ji)互(hu)補的(de)寡核苷酸(suan)鏈(lian)做(zuo)引(yin)物(wu)，利(li)用PCR就(jiu)可(ke)將(jiang)模板(ban)DNA在體(ti)外大(da)量擴增(zeng)。設(she)計(ji)引(yin)物(wu)應(ying)遵循(xun)以(yi)下原則(ze)： 

①引(yin)物(wu)長度： 15-30bp，常用為(wei)20bp左(zuo)右。

②引(yin)物(wu)擴(kuo)增(zeng)跨(kua)度(du)： 以(yi)200-500bp為宜，特(te)定(ding)條(tiao)件(jian)下(xia)可(ke)擴增(zeng)長至10kb的(de)片段。 

③引(yin)物(wu)堿(jian)基：G+C含(han)量以(yi)40-60%為宜，G+C太少(shao)擴(kuo)增(zeng)效(xiao)果(guo)不(bu)佳，G+C過多(duo)易(yi)出現(xian)非(fei)特(te)異(yi)條帶。ATGC*隨(sui)機(ji)分(fen)布(bu)，避(bi)免(mian)5個以(yi)上的(de)嘌呤(ling)或(huo)嘧啶(ding)核苷酸(suan)的(de)成(cheng)串排(pai)列。 

④避(bi)免(mian)引(yin)物(wu)內(nei)部出現(xian)二(er)級(ji)結構(gou)，避(bi)免(mian)兩條引(yin)物(wu)間(jian)互補，特(te)別(bie)是(shi)3'端的(de)互補，否則(ze)會形成(cheng)引(yin)物(wu)二(er)聚(ju)體(ti)，產生(sheng)非特(te)異(yi)的(de)擴增(zeng)條(tiao)帶(dai)。 

⑤引(yin)物(wu)3'端的(de)堿基(ji)，特(te)別(bie)是(shi)最(zui)末及(ji)倒數(shu)第二(er)個(ge)堿基(ji)，應嚴(yan)格(ge)要求(qiu)配(pei)對，以(yi)避(bi)免(mian)因末端堿基(ji)不(bu)配(pei)對而(er)導(dao)致PCR失(shi)敗。

⑥引(yin)物(wu)中(zhong)有或(huo)能加(jia)上合(he)適的(de)酶(mei)切位(wei)點， 被擴增(zeng)的(de)靶(ba)序(xu)列*有(you)適宜的(de)酶(mei)切位(wei)點， 這(zhe)對酶(mei)切分(fen)析或(huo)分(fen)子(zi)克隆(long)很(hen)有好(hao)處。

⑦引(yin)物(wu)的(de)特(te)異(yi)性：引(yin)物(wu)應(ying)與(yu)核酸(suan)序(xu)列數(shu)據(ju)庫(ku)的(de)其它序(xu)列無(wu)明顯同(tong)源(yuan)性。

引(yin)物(wu)量(liang)：每條引(yin)物(wu)的(de)濃度0.1～1umol或(huo)10～100pmol，以(yi)*引(yin)物(wu)量(liang)產生(sheng)所需要的(de)結果(guo)為(wei)好(hao)，引(yin)物(wu)濃度偏(pian)高(gao)會引(yin)起(qi)錯(cuo)配(pei)和(he)非特(te)異(yi)性擴增(zeng)，且(qie)可(ke)增(zeng)加(jia)引(yin)物(wu)之(zhi)間(jian)形成(cheng)二聚(ju)體(ti)的(de)機(ji)會。