進(jin)口ELISA試劑盒(he)使(shi)用(yong)方(fang)法：

1、組織(zhi)固定(ding)於(yu)10%的(de)福(fu)爾馬(ma)林中，常(chang)規脫(tuo)水包(bao)埋(mai)。

2、切(qie)片厚(hou)4μm，常(chang)規脫(tuo)蠟(la)至水(shui)。

3、用(yong)配(pei)制(zhi)好(hao)的Weigert氧化(hua)劑氧化(hua)5min。

4、稍水(shui)洗(xi)。

5、用(yong)Weigert漂(piao)白劑漂(piao)白1~2min。

6、流水(shui)沖洗(xi)2min。

7、95%的(de)乙(yi)醇稍洗(xi)。

8、切片入(ru)裝(zhuang)有(you)Weigert品(pin)紅(hong)染(ran)色(se)液的染色缸(加(jia)蓋(gai))中，室(shi)溫(wen)下(xia)染色(se)1～3h。

9、用(yong)酸性分(fen)化(hua)液分(fen)化(hua)至無(wu)染(ran)液脫下(xia)，約2～3s。

10、流(liu)水沖洗(xi)10min。

11、VG染(ran)色(se)液復染(ran)30s。

12、急速用(yong)水洗壹下(xia)，立(li)刻用(yong)95%的乙醇快(kuai)速(su)分(fen)化(hua)和(he)脫水(shui)。

13、常(chang)規脫(tuo)水透明，中性樹(shu)膠封固。

進(jin)口ELISA試劑盒(he)操作步(bu)驟(zhou)：

1、標準品(pin)的(de)稀(xi)釋(shi)與(yu)加(jia)樣(yang)：在酶標包被(bei)板(ban)上設(she)標準品(pin)孔(kong)10孔(kong)，在di壹、第二(er)孔(kong)中分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)100μl，然(ran)後在di壹、第二(er)孔(kong)中加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻；然後從di壹孔(kong)、第二(er)孔(kong)中各(ge)取(qu)100μl分(fen)別(bie)加(jia)到(dao)第(di)三孔(kong)和(he)第四(si)孔(kong)，再(zai)在第三、第四(si)孔(kong)分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻；然後進(jin)口ELISA試劑盒(he)在第三孔(kong)和(he)第四(si)孔(kong)中先(xian)各(ge)取(qu)50μl棄(qi)掉(diao)，再(zai)各(ge)取(qu)50μl分(fen)別(bie)加(jia)到(dao)第(di)五(wu)、第六孔(kong)中，再(zai)在第五(wu)、第六孔(kong)中分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50ul，混(hun)勻；混(hun)勻後從第五(wu)、第六孔(kong)中各(ge)取(qu)50μl分(fen)別(bie)加(jia)到(dao)第(di)七、第八孔(kong)中，再(zai)在第七、第八孔(kong)中分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻後從第七、第八孔(kong)中分(fen)別(bie)取(qu)50μl加(jia)到(dao)第(di)九、第十孔(kong)中，再(zai)在第九第十孔(kong)分(fen)別(bie)加(jia)標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μl，混(hun)勻後從第九第十孔(kong)中各(ge)取(qu)50μl棄(qi)掉(diao)。（稀(xi)釋(shi)後各(ge)孔(kong)加(jia)樣(yang)量(liang)都(dou)為50μl，濃度(du)分(fen)別(bie)為(wei)300ng/L，200ng/L，100ng/L，50ng/L，25ng/L）。

2、加(jia)樣(yang)：分(fen)別(bie)設(she)空白孔(kong)（空白對(dui)照孔(kong)不加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶標試劑，其余(yu)各(ge)步操作相(xiang)同(tong)）、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)。在酶標包被(bei)板(ban)上待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)中先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然後再(zai)加(jia)待(dai)測樣(yang)品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)終稀(xi)釋(shi)度(du)為5倍(bei)）。

3、加(jia)樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於(yu)酶(mei)標板(ban)孔(kong)底(di)部，盡(jin)量(liang)不(bu)觸及孔(kong)壁，輕輕晃動混(hun)勻。

4、溫(wen)育：用(yong)封板(ban)膜(mo)封板(ban)後置37℃溫(wen)育30分(fen)鐘(zhong)。

5、配(pei)液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗(xi)滌液用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀(xi)釋(shi)後備(bei)用(yong)。

6、洗滌：小心揭掉(diao)封板(ban)膜(mo)，棄去(qu)液體，甩幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿進(jin)口ELISA試劑盒(he)洗滌液，靜置30秒(miao)後棄(qi)去(qu)，如(ru)此重復5次(ci)，拍幹。

7、加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標試劑50μl，空白孔(kong)除外(wai)。

8、溫(wen)育：操作同(tong)3。

9、洗(xi)滌：操作同(tong)5。

10、顯(xian)色：每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕輕震蕩(dang)混(hun)勻，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色15分(fen)鐘(zhong).

11、終止(zhi)：每(mei)孔(kong)加(jia)終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反(fan)應（此時(shi)藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃色）。

12、測定(ding)：以(yi)空白空調零(ling)，450nm波長(chang)依序(xu)測量(liang)各(ge)孔(kong)的吸光(guang)度(du)（OD值）。測定(ding)應(ying)在加(jia)終止(zhi)液後15分(fen)鐘(zhong)以內進(jin)行。