實驗(yan)涉(she)及(ji)在短時(shi)間(jian)內用放(fang)射性前體標(biao)記細(xi)胞(脈沖(chong),通常是(shi)在(zai)培養(yang)基(ji)中(zhong)添(tian)加放(fang)射性的和/或(huo)半),然後在(zai)蛋白質動(dong)力(li)學(xue)過(guo)程(cheng)中(zhong),在(zai)培養(yang)基(ji)中(zhong)添(tian)加未(wei)標(biao)記的前體,細(xi)胞被允(yun)許恢復(fu)。隨著帶有(you)標(biao)記前體的舊(jiu)蛋(dan)白在(zai)細(xi)胞內被(bei)降解,使用未標(biao)記前體的新(xin)蛋(dan)白同(tong)時(shi)被(bei)合(he)成(cheng)。
這(zhe)是壹(yi)種(zhong)追蹤蛋(dan)白質並估計(ji)其(qi)穩(wen)定(ding)性的傳(chuan)統(tong)方(fang)法,除(chu)了涉(she)及到處(chu)理(li)放(fang)射性,這(zhe)種(zhong)方法在(zai)測(ce)量蛋白質半(ban)衰(shuai)期(qi)時比(bi)其他藥理(li)方(fang)法具(ju)有(you)明(ming)顯(xian)的優勢,在實(shi)驗室(shi)中(zhong)仍(reng)然經(jing)常使(shi)用。它不僅(jin)能(neng)測量蛋(dan)白質半(ban)衰(shuai)期(qi),而且如(ru)果(guo)妳(ni)擅(shan)長(chang)放(fang)射自顯(xian)影(ying)和亞細(xi)胞分離(li),還(hai)可以追(zhui)蹤蛋(dan)白質並確定(ding)其亞細(xi)胞定(ding)位。
在不同的時間(jian)點(dian)免(mian)疫沈(chen)澱(dian)蛋(dan)白質,用放(fang)射自顯(xian)影(ying)法測(ce)量(liang)樣(yang)品(pin)中(zhong)的放(fang)射性。根據(ju)非放(fang)射性蛋白質取(qu)代(dai)放(fang)射性蛋白質的速(su)度(du),可以確定(ding)任(ren)何蛋(dan)白質的半衰(shuai)期(qi)。這(zhe)種(zhong)方法的另壹(yi)種(zhong)非放(fang)射性變異是zui近流行的bleach-chase(漂(piao)白追(zhui)蹤),具(ju)體方(fang)法是(shi)目(mu)的蛋白與熒光團融合(he),進(jin)而通(tong)過(guo)短暫(zan)的光脈(mai)沖(chong)來漂(piao)白,漂(piao)白促(cu)使(shi)標(biao)記蛋白分(fen)為(wei)了兩(liang)種(zhong)亞群:熒光蛋(dan)白和(he)非(fei)熒光蛋(dan)白,漂(piao)白後熒光恢復(fu)率(lv)與降解速(su)率(lv)相(xiang)關(guan)。