1、內(nei)源性物質

　　普遍(bian)認為大(da)約(yue)40%的(de)人(ren)血(xue)清(qing)標(biao)本中含有非特(te)異性幹擾(rao)物質，可(ke)以(yi)不同(tong)程度(du)影響檢(jian)測結果。常(chang)見(jian)的(de)幹(gan)擾(rao)物質有：類(lei)風(feng)濕因(yin)子(zi)、補(bu)體(ti)、嗜(shi)異性抗(kang)體(ti)、嗜(shi)靶(ba)抗(kang)原(yuan)自身抗(kang)體(ti)、醫(yi)源(yuan)性誘(you)導的(de)抗(kang)鼠Ig（s）抗(kang)體(ti)、交(jiao)叉(cha)反(fan)應物質和(he)其它(ta)物質等(deng)。

　　（1）補(bu)體(ti)

　　ELISA系(xi)統中(zhong)固(gu)相(xiang)壹(yi)抗(kang)和(he)標(biao)記(ji)二抗(kang)過程中，抗(kang)體(ti)分(fen)子(zi)發(fa)生(sheng)變(bian)構，其FC段的(de)補(bu)體(ti)C1q分(fen)子(zi)結(jie)合(he)位(wei)點被(bei)暴(bao)露出(chu)來(lai)，使(shi)C1q可(ke)以(yi)將二者連(lian)接起來(lai)，從(cong)而(er)造成假(jia)陽(yang)性。解決(jue)的(de)辦法是：①用(yong)EDTA稀釋標(biao)本；②用(yong)53℃，10min或(huo)56℃，30min加熱血(xue)清(qing)使C1q滅(mie)活。

　　（2）類(lei)風(feng)濕因(yin)子(zi)

　　人(ren)血(xue)清(qing)中IgM、IgG型(xing)類(lei)風(feng)濕因(yin)子(zi)（RF）可(ke)以(yi)與ELISA系(xi)統中(zhong)的(de)捕(bu)獲(huo)抗(kang)體(ti)及(ji)酶標(biao)記(ji)二抗(kang)的(de)FC段(duan)直接結合(he)，從而(er)導致(zhi)假(jia)陽(yang)性。解決(jue)該(gai)情(qing)況的(de)辦法是：①用(yong)F（ab）2替(ti)代(dai)完整(zheng)的(de)IgG；②標(biao)本用(yong)聯(lian)有熱變(bian)性（63℃，10min）IgG的(de)固(gu)相(xiang)吸(xi)附(fu)劑(ji)處理(li)（將(jiang)熱變(bian)性IgG加入(ru)到標(biao)本稀釋液中同樣有效）；③檢測抗(kang)原(yuan)時(shi)，可(ke)以(yi)用(yong)2-巰基(ji)乙醇等(deng)加入(ru)到標(biao)本稀釋液中，使RF降(jiang)解。

　　（3）嗜靶(ba)抗(kang)原(yuan)的(de)自身抗(kang)體(ti)

　　抗(kang)甲(jia)狀腺球蛋白(bai)、抗(kang)胰(yi)島(dao)素等(deng)嗜(shi)靶(ba)抗(kang)原(yuan)的(de)自身抗(kang)體(ti)，ELISA試劑盒有時(shi)能與靶(ba)抗(kang)原(yuan)結合(he)形成復合物，在(zai)ELISA方法中均(jun)可(ke)幹擾(rao)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)測定結果。為(wei)避(bi)免以(yi)上情(qing)況(kuang)出(chu)現(xian)，解決(jue)的(de)辦法是：測定前(qian)需(xu)用(yong)理(li)化(hua)方法將其解離後(hou)再測定。

　　（4）嗜異性抗(kang)體(ti)

　　人(ren)類(lei)血清(qing)中含有能與嚙齒(chi)類(lei)動物（如(ru)鼠等(deng)）Ig（s）結(jie)合(he)的(de)天(tian)然嗜(shi)異性抗(kang)體(ti)，可(ke)將ELISA系(xi)統中(zhong)壹(yi)抗(kang)和(he)二抗(kang)連(lian)接起來(lai)，也(ye)能造(zao)成假(jia)陽(yang)性。解決(jue)的(de)辦法是：可(ke)在(zai)標(biao)本稀釋液中加入(ru)過量(liang)的(de)動(dong)物Ig（s），但加入(ru)量(liang)不(bu)足或(huo)亞類(lei)不同(tong)時(shi)無(wu)效(xiao)。

　　（5）醫源(yuan)性誘(you)導的(de)抗(kang)鼠Ig（s）抗(kang)體(ti)

　　人(ren)ELISA試劑盒臨(lin)床(chuang)開(kai)展的(de)用(yong)鼠源性CD3等(deng)單(dan)克(ke)隆抗(kang)體(ti)治療，用(yong)放(fang)射性同位(wei)素(su)標(biao)記(ji)鼠源性抗(kang)體(ti)的(de)影像診斷(duan)及(ji)靶(ba)向(xiang)治療等(deng)新(xin)技術，均(jun)有可(ke)能使(shi)這些病人(ren)體(ti)內(nei)產(chan)生(sheng)抗(kang)鼠抗(kang)體(ti)；另外(wai)，被鼠等(deng)嚙(nie)齒(chi)類(lei)動物咬傷(shang)的(de)病人(ren)體(ti)內(nei)也(ye)可(ke)以(yi)產生(sheng)抗(kang)鼠Ig（s）抗(kang)體(ti)。這(zhe)些(xie)病人(ren)ELISA測定時(shi)均(jun)可(ke)產生(sheng)假(jia)陽(yang)性。解決(jue)的(de)辦法是：測定抗(kang)原(yuan)時(shi)，在(zai)標(biao)本中加入(ru)足量(liang)的(de)正(zheng)常(chang)鼠Ig（s），從而(er)克(ke)服由於(yu)上(shang)述原(yuan)因(yin)造(zao)成的(de)假(jia)陽(yang)性。

　　（6）標(biao)本中其它(ta)成分(fen)的(de)影響血(xue)清(qing)脂(zhi)質過高(gao)、、血紅(hong)蛋(dan)白(bai)及(ji)血(xue)液粘度(du)過大等(deng)，均(jun)對ELISA測定結果有幹擾(rao)作用(yong)。

　　（7）交(jiao)叉反應物質

　　類(lei)di高(gao)辛、類(lei)AFP樣物質等(deng)，是與(yu)靶(ba)抗(kang)原(yuan)有交叉反應的(de)物質。在(zai)用(yong)多(duo)抗(kang)測定抗(kang)原(yuan)時(shi)對測定結果影響不(bu)大(da)，但在(zai)用(yong)單(dan)克(ke)隆抗(kang)體(ti)測定抗(kang)原(yuan)時(shi)，如(ru)果交(jiao)叉抗(kang)原(yuan)決(jue)定(ding)簇(cu)正(zheng)好是所(suo)用(yong)單(dan)克(ke)隆抗(kang)體(ti)相(xiang)對應的(de)靶(ba)決(jue)定(ding)簇(cu)時(shi)，也會出(chu)現(xian)假(jia)陽(yang)性結果。

　　2、外(wai)源性物質

　　外(wai)源性物質常(chang)常是由(you)於(yu)用(yong)於(yu)ELISA測定的(de)血(xue)標(biao)本的(de)采(cai)集(ji)、貯(zhu)存(cun)不(bu)當等(deng)原(yuan)因(yin)所(suo)致。如(ru)標(biao)本溶血(xue)、標(biao)本被細(xi)菌(jun)汙(wu)染、標(biao)本貯(zhu)存(cun)過久(jiu)、標(biao)本凝集(ji)不(bu)全和(he)中添加物等(deng)影響。

　　（1）標(biao)本溶血(xue)

　　由於(yu)各(ge)種人(ren)為(wei)原(yuan)因(yin)引(yin)起的(de)標(biao)本溶血(xue)，均(jun)可(ke)因(yin)紅(hong)細(xi)胞破(po)壞(huai)溶解時(shi)釋放出(chu)大量(liang)具(ju)有過氧化(hua)物酶活性的(de)血(xue)紅(hong)蛋(dan)白(bai)，在(zai)以(yi)辣根(gen)過氧化(hua)物酶為標(biao)記(ji)的(de)ELISA測定中，會導(dao)致非特(te)異性顯色(se)，幹(gan)擾(rao)測定結果。為(wei)克(ke)服上述幹(gan)擾(rao)作用(yong)，標(biao)本采集時(shi)必須(xu)註(zhu)意避(bi)免溶血(xue)。

　　（2）標(biao)本保存(cun)不(bu)當

　　在(zai)冰箱中保(bao)存(cun)過久(jiu)的(de)標(biao)本，血清(qing)中IgG可(ke)聚合(he)成多(duo)聚體(ti)、AFP可(ke)形成二聚體(ti)，在(zai)間接法ELISA測定中會導(dao)致本(ben)底(di)過深、甚至造(zao)成假(jia)陽(yang)性；標(biao)本放置(zhi)時(shi)間過長（如(ru)壹(yi)天(tian)以(yi)上），有時(shi)抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體(ti)免(mian)疫(yi)活性減弱，亦可(ke)出現(xian)假(jia)陰(yin)性。為克(ke)服上述幹(gan)擾(rao)，ELISA測定的(de)血(xue)清(qing)標(biao)本宜為新(xin)鮮(xian)采(cai)集；如(ru)不(bu)能立(li)即測定，5天(tian)內測定的(de)血(xue)清(qing)標(biao)本可(ke)存(cun)放(fang)於(yu)4℃，1周(zhou)後(hou)測定的(de)血(xue)清(qing)標(biao)本應低溫(wen)凍(dong)存(cun)；凍(dong)存(cun)後(hou)融解的(de)標(biao)本，蛋白(bai)質局(ju)部濃縮(suo)，分(fen)布(bu)不(bu)均(jun)，應充(chong)分(fen)混(hun)合(he)後(hou)再測定，但混(hun)勻(yun)時(shi)應輕(qing)柔(rou)，不可(ke)強烈(lie)振(zhen)蕩(dang)。

　　（3）標(biao)本受細(xi)菌(jun)汙(wu)染

　　因(yin)菌(jun)體(ti)中(zhong)可(ke)能含有內源性辣根(gen)過氧化(hua)物酶，因(yin)此(ci)，被細(xi)菌(jun)汙(wu)染的(de)標(biao)本同溶血(xue)標(biao)本壹(yi)樣，亦(yi)可(ke)產生(sheng)非特(te)異性顯色(se)而(er)幹擾(rao)測定結果。

　　（4）標(biao)本凝集(ji)不(bu)全

　　在(zai)沒有促凝劑(ji)和(he)抗(kang)凝劑(ji)存(cun)在(zai)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia)，正(zheng)常(chang)血(xue)液采集後(hou)1/2~2h開始凝固(gu)，18~24h*凝固(gu)。臨(lin)床(chuang)檢(jian)驗(yan)工(gong)作中，有時(shi)為了爭取(qu)時(shi)間快(kuai)速檢測，常在(zai)血液還未(wei)開始(shi)凝固(gu)時(shi)即強行(xing)離心(xin)分(fen)離(li)血(xue)清(qing)，此時(shi)的(de)血(xue)清(qing)中仍(reng)殘(can)留(liu)部分(fen)纖維(wei)蛋白(bai)原(yuan)，在(zai)ELISA測定過程中可(ke)以(yi)形成肉眼可(ke)見(jian)的(de)纖維(wei)蛋白(bai)塊，易造成假(jia)陽(yang)性結果；這(zhe)類(lei)情況(kuang)於(yu)次(ci)日(ri)復(fu)查(zha)時(shi)因(yin)血(xue)凝已*，血清(qing)中不(bu)再有纖維(wei)蛋白(bai)原(yuan)存(cun)在(zai)，故復查結果變(bian)為陰(yin)性。為避(bi)免上(shang)述幹(gan)擾(rao)作用(yong)，解決(jue)的(de)辦法是血(xue)液標(biao)本采集後(hou)必須(xu)使(shi)其充分(fen)凝固(gu)後(hou)再分(fen)離(li)血(xue)清(qing)，或標(biao)本采集時(shi)用(yong)帶(dai)分(fen)離(li)膠(jiao)的(de)或(huo)於(yu)中(zhong)加入(ru)適當(dang)的(de)促(cu)凝劑(ji)。

　　（5）人(ren)ELISA試劑盒標(biao)本管中添加物質的(de)影響

　　抗(kang)凝劑(ji)（如(ru)肝(gan)素，EDTA）、酶抑制劑（如(ru)NaN3可(ke)抑制ELISA系(xi)統中(zhong)辣(la)根(gen)過氧化(hua)物酶活性）及(ji)快(kuai)速分(fen)離(li)血(xue)清(qing)的(de)分(fen)離(li)膠(jiao)等(deng)均(jun)對ELISA測定有壹(yi)定幹(gan)擾(rao)作用(yong)。

　　通(tong)過以(yi)上的(de)分(fen)析(xi)和(he)總結，臨(lin)床(chuang)檢(jian)驗(yan)ELISA測定中出現(xian)假(jia)陽(yang)性或假(jia)陰(yin)性等(deng)錯(cuo)誤(wu)的(de)結(jie)果，排(pai)除(chu)ELISA試劑盒因(yin)素(su)和操作因(yin)素(su)，再有就是從(cong)標(biao)本因(yin)素(su)進行(xing)分(fen)析(xi)，並(bing)應采(cai)取(qu)相(xiang)應措(cuo)施(shi)排除(chu)幹擾(rao)，從而(er)確保檢(jian)測結果的(de)準確性。