酶聯免疫(yi)吸(xi)附試(shi)驗(yan)（ELISA）因(yin)其(qi)高靈敏(min)度(du)和特(te)異性被(bei)廣(guang)泛應(ying)用於生物醫(yi)學檢(jian)測，但(dan)其結(jie)果易(yi)受多種(zhong)因(yin)素(su)影(ying)響(xiang)，導(dao)致(zhi)出(chu)現(xian)假(jia)陽(yang)性、假(jia)陰(yin)性、高背(bei)景或無顯色(se)等(deng)異常(chang)情況(kuang)。準確(que)識(shi)別並排除這(zhe)些幹擾因(yin)素(su)，是確(que)保(bao)數(shu)據(ju)可(ke)靠(kao)性的關鍵。

常(chang)見ELISA結(jie)果異常(chang)類(lei)型(xing)及原(yuan)因(yin)分(fen)析(xi)

壹、跳(tiao)孔問(wen)題(ti)

‌原(yuan)因(yin)‌：加(jia)樣(yang)時(shi)吸頭(tou)未垂直(zhi)操作(zuo)，導(dao)致(zhi)液(ye)體(ti)濺出或未wanquan加(jia)入(ru)；移液器未校準或吸頭不匹配(pei)，造(zao)成(cheng)加(jia)樣(yang)量(liang)不準。

‌解決‌：使(shi)用校準後的(de)移液器，加樣(yang)時(shi)保持(chi)垂直(zhi)，避免觸及孔(kong)壁(bi)；更換(huan)匹配(pei)吸頭(tou)，確(que)保(bao)加(jia)樣(yang)量(liang)準確(que)。

二、信號(hao)弱(ruo)問(wen)題(ti)

‌原(yuan)因(yin)‌：

抗(kang)體(ti)或抗(kang)原(yuan)濃度(du)過低，或孵(fu)育時間不足。

底物反(fan)應(ying)時間過短(duan)，未充(chong)分(fen)顯(xian)色(se)。

‌解決‌：優(you)化(hua)抗(kang)體(ti)濃度(du)，延(yan)長(chang)底物反(fan)應(ying)時間；確(que)保(bao)孵(fu)育條件恒(heng)定（如(ru)溫(wen)度、時間）。

三(san)、鉤狀(zhuang)效(xiao)應(ying)（假(jia)陰(yin)性）

‌原(yuan)因(yin)‌：樣(yang)本(ben)濃(nong)度過(guo)高，導(dao)致(zhi)抗(kang)體(ti)被(bei)過(guo)度(du)消(xiao)耗，無法形成(cheng)有(you)效(xiao)信(xin)號。

‌解決‌：稀(xi)釋樣(yang)本(ben)後(hou)重新檢(jian)測；使(shi)用高動(dong)態(tai)範(fan)圍試(shi)劑盒(he)。

四、其(qi)他(ta)常(chang)見問(wen)題(ti)

‌高背(bei)景‌：洗板(ban)不幹凈(jing)或封(feng)閉(bi)不充分(fen)，需(xu)加(jia)強洗滌步(bu)驟(zhou)並延長封(feng)閉(bi)時(shi)間。

‌重復(fu)性(xing)差‌：移液操作(zuo)不壹致(zhi)或設備未校準，需(xu)規範(fan)操作(zuo)並定期(qi)維護(hu)移液器。

‌假(jia)陽(yang)性‌：樣(yang)本(ben)溶(rong)血或細菌汙(wu)染，需(xu)規範(fan)樣(yang)本(ben)處(chu)理流(liu)程。‌

建(jian)議

為減(jian)少ELISA結(jie)果異常(chang)，應(ying)：

1、優先(xian)排(pai)查標本(ben)質量(liang)：檢(jian)查是否溶(rong)血、汙(wu)染、反(fan)復(fu)凍融(rong)或含(han)有幹擾物(wu)質；

2、規範(fan)操作(zuo)流程：確(que)保(bao)試(shi)劑平衡、加樣(yang)準確(que)、洗滌充(chong)分(fen)、顯色(se)定(ding)時(shi)；

3、設置(zhi)合(he)理對照：包括空(kong)白、陰(yin)性、陽(yang)性對照，便於快速(su)定(ding)位(wei)問(wen)題(ti)環節。

通(tong)過(guo)綜合考慮(lv)上述因(yin)素(su)並采取相應(ying)的解決措(cuo)施(shi)，可以有效(xiao)減(jian)少ELISA實驗中(zhong)的假(jia)陽(yang)性與(yu)假(jia)陰(yin)性結(jie)果，提(ti)高檢(jian)測的(de)準確(que)性(xing)和(he)可靠(kao)性。