基(ji)質(zhi)效應是(shi)影響ELISA實(shi)驗(yan)結果準(zhun)確(que)性(xing)的重(zhong)要因素,它指(zhi)的是(shi)樣(yang)本(ben)中除目(mu)標分(fen)析(xi)物以外的其(qi)他成分對檢測(ce)過(guo)程產(chan)生的幹(gan)擾(rao)。這種(zhong)效應會導致測(ce)得(de)的分(fen)析(xi)物(wu)濃度與(yu)實(shi)際濃度(du)出(chu)現偏差。
壹(yi)、基(ji)質(zhi)效應的具(ju)體(ti)影響
基(ji)質(zhi)效應主要通過(guo)幹(gan)擾(rao)抗體(ti)與(yu)目(mu)標蛋(dan)白(bai)的結合(he)能力(li)來(lai)影響ELISA結果。具(ju)體(ti)表(biao)現包括(kuo):
導致OD值異常(chang):zui明(ming)顯的現象(xiang)是(shi)測(ce)得(de)的OD值(zhi)遠(yuan)低(di)於預(yu)期(qi)。
影響定(ding)量準(zhun)確(que)性(xing):基(ji)質(zhi)效應會造成(cheng)測(ce)量濃(nong)度與(yu)實(shi)際濃度(du)的偏差,影響實(shi)驗的(de)定(ding)量(liang)分(fen)析。
產(chan)生假(jia)陰(yin)性(xing)結果:當(dang)樣(yang)本值接(jie)近(jin)或低(di)於空(kong)白(bai)值時,可(ke)能是(shi)基(ji)質(zhi)效應導致的假(jia)陰(yin)性(xing)現象(xiang)。
二(er)、如何(he)判(pan)斷(duan)基(ji)質(zhi)效應
zui常(chang)用(yong)的判(pan)斷(duan)方法(fa)是(shi)進行(xing)加標回(hui)收(shou)率(lv)實(shi)驗。該(gai)實(shi)驗通過(guo)比較(jiao)添加(jia)已(yi)知(zhi)濃(nong)度(du)標準(zhun)品(pin)後(hou)測(ce)得(de)的濃(nong)度(du)與(yu)理(li)論(lun)濃(nong)度的比例(li)(回(hui)收(shou)率(lv))來(lai)評(ping)估(gu)基(ji)質(zhi)效應:
回(hui)收(shou)率(lv)在(zai)80%-120%之(zhi)間(jian):認(ren)為無(wu)顯著基(ji)質(zhi)效應
回(hui)收(shou)率(lv)低(di)於80%:表明(ming)存在基(ji)質(zhi)效應
三(san)、如何(he)克服(fu)基(ji)質(zhi)效應
克服(fu)基(ji)質(zhi)效應的常(chang)用(yong)方法(fa)包(bao)括(kuo):
稀(xi)釋(shi)樣本(ben):用(yong)與(yu)稀(xi)釋(shi)標準(zhun)品(pin)相同(tong)的緩沖液將(jiang)樣(yang)本至少(shao)稀(xi)釋(shi)2倍
使(shi)用(yong)基(ji)質(zhi)緩沖液:壹些ELISA試(shi)劑盒會提供特殊配方的(de)"基(ji)質(zhi)稀(xi)釋(shi)液"來(lai)抵(di)消(xiao)基(ji)質(zhi)效應
建立校(xiao)正(zheng)曲線(xian):通過(guo)已(yi)知(zhi)分(fen)析(xi)物(wu)濃度的標準(zhun)樣(yang)品(pin),在(zai)保持(chi)樣(yang)本基(ji)質(zhi)不(bu)變(bian)的(de)情(qing)況下(xia)建立校(xiao)正(zheng)曲線(xian)。
基(ji)質(zhi)效應是ELISA實(shi)驗(yan)中需要特別關(guan)註的(de)問題,通過(guo)合(he)理的(de)實驗設(she)計(ji)和質(zhi)量控(kong)制(zhi)措(cuo)施(shi),可(ke)以有(you)效減(jian)少(shao)其(qi)對實驗(yan)結果的(de)影響。