ELISA是(shi)酶(mei)聯(lian)接(jie)免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)劑測(ce)定(ding)( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免(mian)疫(yi)熒光和放(fang)射(she)免(mian)疫(yi)技(ji)術之(zhi)後發展起來(lai)的壹(yi)種免疫(yi)酶(mei)技(ji)術。在檢測(ce)時(shi)，受檢標(biao)本（測定其(qi)中的抗(kang)原(yuan)）與(yu)固(gu)相載體(ti)表面(mian)的抗(kang)體(ti)反(fan)應(ying)。洗滌後加(jia)入酶(mei)標(biao)記(ji)的抗(kang)體(ti)，通(tong)過反(fan)應(ying)結合(he)在固(gu)相載體(ti)上。加(jia)入(ru)酶反(fan)應(ying)的底物後，底物被酶催化成為有(you)色產物(wu)，產物(wu)的量(liang)與標(biao)本(ben)中(zhong)受檢物(wu)質的量(liang)直接(jie)相關(guan)，可根(gen)據呈色的深(shen)淺(qian)進(jin)行定性(xing)或(huo)定(ding)量(liang)分析(xi)。

 ELISA實驗(yan)過程中(zhong)時(shi)常發生重(zhong)做(zuo)的情(qing)況，實驗(yan)是否(fou)需(xu)要重(zhong)新進(jin)行，判斷(duan)可以(yi)根(gen)據(ju)評估(gu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線、檢測(ce)限、對(dui)照(zhao)反(fan)應(ying)、重(zhong)復性(xing)、交叉(cha)反(fan)應(ying)性、操(cao)作壹(yi)致(zhi)性(xing)和數(shu)據分析(xi)幾個(ge)關(guan)鍵(jian)指(zhi)標(biao)進(jin)行評估(gu):
1、標(biao)準(zhun)曲(qu)線的有(you)效性(xing):
 標(biao)準(zhun)曲(qu)線應(ying)該呈現良(liang)好(hao)的線性關(guan)系(xi), R2值(zhi)通常應(ying)接近(jin)1。如果R2值(zhi)遠低於預(yu)期, 或(huo)者(zhe)無法生成有(you)效的標(biao)準曲(qu)線,這可能(neng)意(yi)味(wei)著(zhe)實驗(yan)存在問題(ti)。
2、檢測(ce)限和定(ding)量(liang)限:
檢測(ce)限和定(ding)量(liang)限應(ying)該符合(he)試(shi)劑盒說明(ming)書(shu)的規(gui)定。如果實際檢測(ce)的結(jie)果低(di)於檢測(ce)限,或(huo)者(zhe)與(yu)預(yu)期值(zhi)相差很(hen)大(da),這可能(neng)表明(ming)試(shi)劑盒的靈敏度(du)不足(zu)。
3、陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)和(he)陰性對(dui)照(zhao)的反(fan)應(ying):
陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)應(ying)該顯示出明(ming)顯的信(xin)號,而(er)陰性對(dui)照(zhao)的信(xin)號應(ying)該接(jie)近(jin)背(bei)景水平(ping)。如果陽(yang)性對(dui)照(zhao)的信(xin)號過弱(ruo)或(huo)陰性對(dui)照(zhao)的信(xin)號過強(qiang),這可能(neng)是(shi)實驗(yan)操作不當(dang)或(huo)試(shi)劑盒質問(wen)題(ti)的表現。
4、重(zhong)復性(xing)和可重(zhong)復性(xing):
對(dui)同(tong)-樣(yang)本(ben)進(jin)行多次檢測(ce),以(yi)評估(gu)試(shi)劑盒的重(zhong)復性(xing)。如果結(jie)果之(zhi)間(jian)的差異較(jiao)大(da),這可能(neng)表明(ming)試(shi)劑盒的穩定(ding)性和(he)可靠性受到了(le)影(ying)響(xiang)。
5、效反(fan)應(ying)性:
如果試(shi)劑盒對(dui)非(fei)目標分析物(wu)有(you)非特(te)異性(xing)結(jie)合(he),可能(neng)會(hui)導致假(jia)陽(yang)性結果。通(tong)過檢測(ce)已(yi)知(zhi)不(bu)含(han)目標分析物(wu)的樣(yang)本,可以(yi)評估(gu)試(shi)劑盒的交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)性。如果出現非特(te)異性(xing)信(xin)號,可能(neng)需(xu)要 更(geng)換(huan)試(shi)劑盒或(huo)優(you)化(hua)實驗(yan)條件(jian)。
6、實驗(yan)操作的壹(yi)致(zhi)性(xing):
確保所(suo)有(you)實驗(yan)步(bu)驟按(an)照(zhao)標(biao)準(zhun)化的操(cao)作流程進(jin)行,包(bao)括樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)、試(shi)劑混(hun)合(he)、孵(fu)育時(shi)間(jian)和溫(wen)度(du)等(deng)。任(ren)何操作上的偏差都(dou)可能(neng)影(ying)響(xiang)實驗(yan)結果。
7、數(shu)據(ju)分(fen)析(xi)的正(zheng)確性(xing):
使(shi)用(yong)適(shi)當(dang)的統計(ji)方(fang)法(fa)對(dui)數(shu)據進(jin)行分析(xi),如t檢驗(yan)、ANOVA等(deng),以(yi)確定(ding)實驗(yan)結果的顯著性和可靠性。
如果在以上任(ren)何壹(yi)項(xiang)評估(gu)中(zhong)發現問題(ti),可能(neng)需(xu)要重(zhong)新進(jin)行ELISA實驗(yan)。在重(zhong)新實驗(yan)之(zhi),應(ying)仔(zai)細檢查(zha)所(suo)有(you)實驗(yan)步(bu)驟,並(bing)考(kao)慮(lv)可能(neng)的改(gai)進(jin)措(cuo)施(shi),如更(geng)換(huan)試(shi)劑盒、優(you)化(hua)實驗(yan)條件(jian)或(huo)改(gai)進(jin)樣本處(chu)理(li)方(fang)法(fa)。同(tong)時(shi),記(ji)錄(lu)所(suo)有(you)的觀(guan)察(cha)和測試(shi)結果,以(yi)便(bian)於未(wei)來(lai)的參考和(he)追蹤(zong)。