進行(xing)ELISA實驗(yan)時(shi)，試劑(ji)的準備(bei)是(shi)至(zhi)關重要的，它直(zhi)接影響(xiang)實驗(yan)結(jie)果的準確性和(he)可(ke)靠性。以(yi)下(xia)是壹些(xie)關於(yu)ELISA試劑(ji)準(zhun)備(bei)的關鍵(jian)點(dian)：

試劑(ji)盒(he)檢查:

1. 確認試劑(ji)盒(he)的有(you)效期：確保所使(shi)用的ELISA試劑(ji)盒(he)在有(you)效期內(nei)，因(yin)為過(guo)期的試劑(ji)可(ke)能會導(dao)致(zhi)實驗(yan)結(jie)果不(bu)可(ke)靠。

2. 核對組(zu)分是(shi)否(fou)齊全(quan)：檢查試劑(ji)盒(he)內所有(you)組(zu)分是(shi)否(fou)齊全(quan)，包(bao)括標準品、樣(yang)本稀釋(shi)液、酶標記(ji)抗(kang)體、底(di)物溶(rong)液(ye)、終(zhong)止液等(deng)。

試劑(ji)準(zhun)備(bei):

1. 回(hui)溫(wen)：實驗(yan)前(qian)，將所需試劑(ji)在(zai)室(shi)溫(wen)平衡2030分鐘，以確保其(qi)溫(wen)度與(yu)室(shi)溫(wen)壹致(zhi)，避(bi)免(mian)因(yin)溫(wen)度差異(yi)導(dao)致(zhi)的試劑(ji)濃度變(bian)化。註(zhu)意，HRP標記(ji)檢測(ce)抗(kang)體濃縮液(ye)不(bu)需要平衡室(shi)溫(wen)，即用即取。<cite>6</cite>

2. 洗(xi)滌(di)液的準備(bei)：如果洗(xi)滌(di)液有(you)晶(jing)體析(xi)出(chu)，需在37℃加熱(re)至(zhi)晶(jing)體全(quan)溶解(jie)。按(an)照1:20的稀釋(shi)倍數(shu)進行(xing)稀釋(shi)，如取30mL濃縮洗(xi)滌(di)液（20×），加入(ru)570mL超純水(shui)或(huo)去(qu)離(li)子水(shui)，得(de)到(dao)洗(xi)滌(di)液（1×）。

3. HRP標記(ji)檢測(ce)抗(kang)體的稀釋(shi)：開蓋前瞬時(shi)離(li)心，按(an)1:100的比例進(jin)行(xing)稀釋(shi)，根(gen)據實驗(yan)所需總量(liang)配(pei)制。例如，10μL HRP標記(ji)檢測(ce)抗(kang)體濃縮液(ye)（100×）加990μL抗(kang)體稀釋(shi)液進行(xing)配(pei)制，輕(qing)輕(qing)混勻。

4. 待檢測樣(yang)本的準備(bei)：不(bu)同的樣本應使(shi)用相(xiang)應(ying)的樣本稀釋(shi)液進行(xing)稀釋(shi)。如果樣本檢測(ce)值(zhi)超過標準曲(qu)線(xian)的最高(gao)範圍(wei)，可(ke)將樣(yang)本進行(xing)壹定(ding)的稀釋(shi)，使樣本的檢測(ce)值(zhi)處於(yu)標準曲(qu)線(xian)範圍(wei)內(nei)。具(ju)體稀釋(shi)倍數(shu)需自行(xing)優化，參考對應(ying)說(shuo)明(ming)書(shu)。

5. 梯度稀釋(shi)的標準品：根(gen)據說(shuo)明(ming)書(shu)操(cao)作(zuo)，不(bu)同靶點(dian)、不(bu)同樣本類型(xing)可(ke)能需要不(bu)同的稀釋(shi)方案(an)。

註(zhu)意事(shi)項(xiang):

1. 避免(mian)高(gao)溫(wen)解凍：切(qie)勿(wu)使用(yong)高溫(wen)解凍試劑(ji)，可(ke)提前(qian)1小時(shi)從(cong)20℃轉移至4℃，再室(shi)溫(wen)靜(jing)置(zhi)。

2. 底(di)物溶(rong)液(ye)的準備(bei)：TMB使用液由(you)TMB（10mg/5ml無水(shui)乙醇）0.5ml、底(di)物緩(huan)沖(chong)液（pH5.5）10ml和0.75% H2O2 32μl組(zu)成；ABTS使用液由(you)ABTS 0.5mg、底(di)物緩(huan)沖(chong)液（pH5.5）1ml和3% H2O2 2μl組(zu)成。底(di)物使(shi)用(yong)液必(bi)須新(xin)鮮配(pei)制，尤其是(shi)H2O2在臨用前(qian)加入(ru)。

3. 標準品的處理：如果標準品需要稀釋(shi)，應嚴格按照說(shuo)明(ming)書(shu)進(jin)行(xing)，以確保標準曲(qu)線(xian)的準確性。

通(tong)過(guo)以上(shang)步驟(zhou)，可(ke)以確保ELISA實驗(yan)中的試劑(ji)處(chu)於最佳狀(zhuang)態(tai)，從(cong)而提高(gao)實驗(yan)的準確性和(he)重(zhong)復性。