ELISA試(shi)驗(yan)包被的方(fang)式(shi)詳(xiang)述(shu)：
 

　　將抗(kang)原或抗(kang)體(ti)固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被(bei)即是抗原或(huo)抗(kang)體(ti)結(jie)合(he)到(dao)固相(xiang)載體(ti)表(biao)面(mian)的(de)過程。蛋(dan)白(bai)質(zhi)與(yu)(C8H8)n固相(xiang)載體(ti)是通(tong)過物理吸附結(jie)合(he) 的，靠的是蛋(dan)白(bai)質(zhi)分子結(jie)構(gou)上的(de)疏水(shui)基(ji)團與(yu)固相(xiang)載體(ti)表(biao)面(mian)的(de)疏水(shui)基(ji)團間(jian)的(de)作用(yong)力(li)。這種(zhong)物(wu)理吸附是非特(te)異性的(de)，受(shou)蛋(dan)白(bai)質(zhi)的(de)分子量、等電(dian)點(dian)、濃(nong)度(du)等的(de)影響(xiang)。載體(ti)對 不同(tong)蛋(dan)白(bai)質(zhi)的(de)吸附能力是不相(xiang)同的(de)，大(da)分子蛋(dan)白(bai)質(zhi)較(jiao)小(xiao)分子蛋(dan)白(bai)質(zhi)通(tong)常含有更(geng)多的疏水(shui)基(ji)團，故(gu)更(geng)易吸附到(dao)固相(xiang)載體(ti)表(biao)面(mian)。IgG對(dui)聚(ju)苯(ben)C2H4等固(gu)相(xiang)具有較強(qiang)的(de)吸附 力，其聯結(jie)多發(fa)生在Fc段(duan)上(shang)，抗體(ti)結(jie)合(he)點(dian)暴露於(yu)外，因(yin)此(ci)抗體(ti)的包(bao)被(bei)壹般均(jun)采用直(zhi)接吸附法。蛋(dan)白(bai)質(zhi)抗(kang)原(yuan)大(da)多也(ye)可采用與(yu)抗體(ti)相(xiang)似的(de)方法包(bao)被。當(dang)抗(kang)原決定簇(cu)存(cun)在(zai) 於(yu)或鄰(lin)近(jin)於(yu)疏水(shui)區(qu)域時(shi)，抗(kang)原與(yu)固相(xiang)載體(ti)的直(zhi)接吸附可使(shi)抗(kang)原決定簇(cu)不能充分暴露，在(zai)這種(zhong)情況(kuang)下(xia)，直(zhi)接包(bao)被效果不佳(jia)，可以(yi)采用間接的(de)捕(bu)獲(huo)包被(bei)法，即(ji)先將(jiang)針對該 抗(kang)原的(de)特(te)異抗(kang)體(ti)作預包(bao)被，其後(hou)通(tong)過抗原(yuan)抗(kang)體(ti)反應(ying)使(shi)抗(kang)原固(gu)相(xiang)化。此(ci)間接結(jie)合(he)在固相(xiang)上的(de)抗原遠離載體(ti)表(biao)面(mian)，其(qi)抗原決定簇(cu)也(ye)得以(yi)充分暴露。間(jian)接包被的(de)抗原(yuan)經固(gu)相(xiang) 抗體(ti)的親(qin)和(he)層析作用(yong)，包(bao)被在(zai)固相(xiang)上的(de)抗原純(chun)度大(da)大(da)提高(gao)，因此(ci)含雜質較多(duo)的(de)抗(kang)原也(ye)可采用捕獲(huo)包被(bei)法，試(shi)驗(yan)的特(te)異性、敏(min)感(gan)性均(jun)由(you)此(ci)得以(yi)改善(shan)，重(zhong)復性亦佳(jia)。間接 包(bao)被(bei)的另(ling)壹優(you)點(dian)是抗原用(yong)量少，僅為直(zhi)接包(bao)被的(de)1/10乃至於(yu)/100。不易(yi)吸附在(C8H8)n載體(ti)上的(de)非(fei)蛋(dan)白(bai)質(zhi)抗(kang)原(yuan)可(ke)采用特(te)殊(shu)的包(bao)被(bei)方(fang)式(shi)。例(li)如(ru)，在檢測抗 DNA抗體(ti)時(shi)，需(xu)用DNA作為包被抗原(yuan)，而(er)普(pu)遍的(de)固(gu)相(xiang)載體(ti)壹般不能直(zhi)接與(yu)核(he)酸(suan)結(jie)合(he)。可將(C8H8)n板先經(jing)紫外線(xian)照射(例(li)如(ru)30W紫外燈(deng)，75cm照射(she)12小 時(shi))，以(yi)增(zeng)加(jia)其吸附性能。固相(xiang)載體(ti)先用(yong)堿(jian)性蛋(dan)白(bai)質(zhi)，如(ru)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)、yu精蛋(dan)白(bai)等作預包(bao)被，也(ye)可提(ti)高(gao)核(he)酸(suan)的結(jie)合(he)力。也(ye)可用(yong)親和(he)素(su)生物su系統(tong)作間(jian)接(jie)包被(bei)，即用親和(he)素(su)先(xian)包(bao)被(bei)載體(ti)，然後(hou)加(jia)入(ru)生物su化的(de)DNA，這種(zhong)包(bao)被方法均(jun)勻(yun)、牢固(gu)，已擴大(da)應(ying)用(yong)於(yu)各種(zhong)抗(kang)原物質的(de)定量測(ce)定。
 

　　脂(zhi)類(lei)物(wu)質(zhi)無(wu)法與(yu)固相(xiang)載體(ti)結(jie)合(he)，可將其在有機溶(rong)劑(例(li)如(ru)乙(yi)醇(chun))中(zhong)溶(rong)解後(hou)加(jia)入(ru)ELISA板(ban)孔中，開蓋(gai)置冰(bing)箱過夜或冷(leng)風吹(chui)幹(gan)，待酒(jiu)精揮(hui)發後(hou)，讓脂(zhi)質自(zi)然幹(gan)固(gu)在(zai)固(gu)相(xiang)表(biao)面(mian)。抗(kang)心磷脂(zhi)抗體(ti)的ELISA試(shi)劑(ji)壹般采用這種(zhong)包(bao)被方式(shi)。