ELISA免疫(yi)分(fen)析(xi)是(shi)壹(yi)種利(li)用特定抗體(ti)與(yu)抗原(yuan)或半(ban)抗(kang)原發生(sheng)的(de)高選(xuan)擇性(xing)高特異性(xing)識(shi)別(bie)和結(jie)合(he)原(yuan)理(li)，對待(dai)測(ce)抗(kang)體(ti)或者(zhe)抗原進行分(fen)析(xi)測(ce)定的方法(fa)，酶(mei)聯免疫(yi)吸附(fu)分(fen)析(xi)（下稱(cheng)ELISA）是免疫(yi)分(fen)析(xi)的(de)壹(yi)種，分(fen)三(san)個部(bu)分(fen)組成(cheng)：免疫(yi)識(shi)別(bie)，信(xin)號(hao)輸(shu)出和數(shu)據(ju)處(chu)理(li)。在(zai)ELISA中，進行各項(xiang)實(shi)驗條件的(de)選(xuan)擇是很(hen)重(zhong)要的(de)，其中包(bao)括:

1、固相載(zai)體(ti)的(de)選(xuan)擇：許多物(wu)質可(ke)作(zuo)為(wei)固相載(zai)體(ti)，如(ru)聚氯乙(yi)烯、聚苯乙(yi)烯、聚丙酰(xian)胺和纖維(wei)素等。其形式(shi)可以(yi)是凹(ao)孔平(ping)板(ban)、試(shi)管、珠粒等。目(mu)前常用(yong)的(de)是40孔聚苯乙(yi)烯凹孔(kong)板(ban)。不(bu)管何種(zhong)載(zai)體(ti)，在(zai)使(shi)用(yong)前均(jun)可(ke)進行篩(shai)選(xuan)：用等量抗(kang)原(yuan)包(bao)被，在同(tong)壹(yi)實(shi)驗條件下進行反(fan)應(ying)，觀(guan)察(cha)其顯(xian)色(se)反(fan)應(ying)是(shi)否均(jun)壹(yi)性(xing)，據(ju)此(ci)判(pan)明(ming)其吸附(fu)性(xing)能(neng)是否良(liang)好(hao)。

2、包(bao)被抗體(ti)(或抗(kang)原)的選(xuan)擇：將抗體(ti)(或抗(kang)原)吸附(fu)在固相載(zai)體(ti)表(biao)面時(shi)，要(yao)求純(chun)度(du)要(yao)好(hao),吸附(fu)時壹(yi)般要(yao)求PH在(zai)9.0～9.6之間(jian)。吸附(fu)溫度(du)，時(shi)間(jian)及其蛋(dan)白量也(ye)有(you)壹(yi)定影(ying)響(xiang),壹(yi)般多采用4℃18～24小(xiao)時。蛋(dan)白質包(bao)被的最(zui)適(shi)濃度(du)需(xu)進行滴(di)定：即用不(bu)同(tong)的(de)蛋(dan)白質濃(nong)度(du)(0.1、1.0和10μg／ml等)進行包(bao)被後(hou)，在其它(ta)試驗(yan)條件相同(tong)時(shi)，觀(guan)察陽(yang)性(xing)標(biao)本的OD值(zhi)。選(xuan)擇OD值(zhi)最(zui)大(da)而(er)蛋(dan)白量最(zui)少(shao)的濃度(du)。對(dui)於(yu)多數(shu)蛋(dan)白質來(lai)說(shuo)通(tong)常為(wei)1～10μg／ml。

3、酶(mei)標記(ji)抗體(ti)工(gong)作(zuo)濃(nong)度(du)的(de)選(xuan)擇：首先(xian)用直(zhi)接ELISA法(fa)進行初步效價(jia)的(de)滴(di)定(見(jian)酶(mei)標記(ji)抗體(ti)部(bu)份(fen))。然(ran)後(hou)再固定其它(ta)條件或采取“方陣(zhen)法(fa)"(包(bao)被物(wu)、待(dai)檢(jian)樣(yang)品的(de)參(can)考品及(ji)酶(mei)標記(ji)抗體(ti)分(fen)別(bie)為(wei)不(bu)同(tong)的(de)稀(xi)釋度(du))在(zai)正(zheng)式(shi)實(shi)驗系統裏(li)準確(que)地(di)滴(di)定其工(gong)作(zuo)濃(nong)度(du)。

4、 酶(mei)的底物(wu)及供(gong)氫(qing)體(ti)的(de)選(xuan)擇：對供氫(qing)體(ti)的(de)選(xuan)擇要求是(shi)價(jia)廉、安(an)全(quan)、有(you)明(ming)顯(xian)地(di)顯(xian)色(se)反(fan)應(ying)，而(er)本身(shen)無色(se)。有些供(gong)氫(qing)體(ti)(如(ru)OPD等)有(you)潛(qian)在的(de)致(zhi)癌(ai)作用(yong)，應(ying)註(zhu)意(yi)防(fang)護(hu)。有(you)條件者(zhe)應(ying)使(shi)用(yong)不(bu)致(zhi)癌(ai)、靈敏度(du)高的(de)供(gong)氫(qing)體(ti)，如(ru)TMB和ABTS是(shi)目(mu)前較為(wei)滿(man)意(yi)的供(gong)氫(qing)體(ti)。底物(wu)作用(yong)壹(yi)段(duan)時(shi)間(jian)後(hou)，應(ying)加(jia)入強酸或強(qiang)堿以(yi)終止反(fan)應(ying)。通(tong)常底物(wu)作用(yong)時(shi)間(jian)，以(yi)10-30分(fen)鐘為(wei)宜(yi)。底物(wu)使(shi)用(yong)液必須新鮮(xian)配制，尤(you)其是H2O2在(zai)臨用前加(jia)入。