小(xiao)鼠胚胎成纖維(wei)細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)：
壹(yi)、原理(li) 

　　細(xi)胞在培養瓶(ping)長(chang)成致(zhi)密(mi)單(dan)層後，已(yi)基(ji)本上飽和(he)，為(wei)使細(xi)胞(bao)能繼(ji)續(xu)生長(chang)，同時(shi)也(ye)將細胞數(shu)量(liang)擴(kuo)大(da)，就必須(xu)進行傳(chuan)代(dai)（再(zai)培(pei)養(yang)）。 　　傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)也(ye)是壹(yi)種將細胞(bao)種保(bao)存下去的方(fang)法。同時(shi)也(ye)是利用(yong)培(pei)養(yang)細(xi)胞進行各(ge)種(zhong)實驗的必經過程(cheng)。懸浮(fu)型(xing)細(xi)胞直接(jie)分(fen)瓶(ping)就(jiu)可(ke)以(yi)，而貼壁細胞(bao)需(xu)經消化後(hou)才能分(fen) 　　瓶(ping)。 　　
二(er)、材料(liao)和試(shi)劑(ji) 　　

1、細胞(bao)：貼壁細胞(bao)株 　　

2、試(shi)劑(ji)：0.25%、1640培養基(ji)（含10%小(xiao)牛(niu)血(xue)清(qing)） 　　

3、儀(yi)器和器材：倒(dao)置顯微鏡(jing)，培(pei)養箱(xiang)、培(pei)養瓶(ping)、吸管、廢(fei)液(ye)缸(gang)等(deng) 　
三(san)、操(cao)作步驟(zhou) 　

　1、將長(chang)滿細(xi)胞的培(pei)養(yang)瓶(ping)中原(yuan)來(lai)的培(pei)養(yang)液(ye)棄(qi)去(qu)。 　　

2、加入0.5—1ml 0.25%溶(rong)液(ye)，使(shi)瓶(ping)底(di)細(xi)胞都(dou)浸入溶(rong)液(ye)中。 　

　3、瓶(ping)口塞好橡(xiang)皮(pi)塞，放(fang)在倒(dao)置鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞。隨著時(shi)間(jian)的推(tui)移(yi)，原(yuan)貼壁的細(xi)胞(bao)逐(zhu)漸趨(qu)於圓(yuan)形(xing)，在還未漂(piao)起時(shi)將(jiang)棄去，加入10ml培(pei)養(yang)液(ye)終(zhong)止消化。 觀(guan)察(cha)消(xiao)化也(ye)可(ke)以(yi)用肉眼(yan)，當見到瓶(ping)底(di)發(fa)白並出現(xian)細針孔空隙時(shi)終(zhong)止消化。壹(yi)般(ban)室溫消化時(shi)間(jian)約為(wei)1—3分(fen)鐘(zhong)。 　　

4、用吸管將貼壁的細(xi)胞(bao)吹打成懸(xuan)液(ye)，分(fen)到(dao)另(ling)外(wai)兩(liang)到三(san)瓶(ping)中，實(shi)踐(jian)培(pei)養液(ye)塞好橡(xiang)皮(pi)塞，置37℃下(xia)繼續(xu)培養(yang)。第(di)二(er)天(tian)觀(guan)察(cha)貼壁生長(chang)情況。 　　

附(fu)：消化液(ye)配制(zhi)方(fang)法： 　　稱(cheng)取(qu)0.25克蛋(dan)白酶（活力(li)為(wei)1：250），加入100ml無(wu)Ca2+、Mg2+的Hank’s液(ye)溶(rong)解(jie)，濾器(qi)過濾除菌(jun)，4℃保(bao)存，用前可(ke)在37℃下(xia)回(hui)溫。 　　溶(rong)液(ye)中也(ye)可(ke)加(jia)入EDTA，使(shi)zui終(zhong)濃度(du)達0.02%。