乳酸(suan)脫氫(qing)酶(mei)活性(xing)(WST-8法) 微(wei)量(liang)法說明(ming)書

‌乳酸(suan)脫氫(qing)酶(mei)（LDH）活性(xing)微量(liang)法說明(ming)書測定的原理(li)‌是通(tong)過檢(jian)測LDH催化(hua)丙酮(tong)酸還原為(wei)乳酸(suan)的過程中NADH的生(sheng)成量(liang)來間(jian)接(jie)測定LDH的活性(xing)。

具體過程如下：

‌反(fan)應原(yuan)理(li)‌：在(zai)LDH的作(zuo)用下，NAD+被(bei)還原生(sheng)成NADH。NADH與(yu)WST-8相(xiang)互作(zuo)用產(chan)生(sheng)顏色，從(cong)而進行比色測定（λmax=450 nm）‌。

‌反(fan)應條(tiao)件(jian)‌：LDH將NAD還原為(wei)NADH，NADH與WST-8相(xiang)互作(zuo)用產(chan)生(sheng)顏色。這個反(fan)應在(zai)冰(bing)上(shang)避光進行，各組分(fen)（如(ru)Assay Buffer、Lactate、NAD、WST-8、Enhancer）需在(zai)實(shi)驗前從(cong)冰(bing)箱(xiang)中取(qu)出並(bing)平(ping)衡至室(shi)溫(wen)，整(zheng)個過程需避光操作(zuo)‌。

‌吸(xi)光度(du)測量(liang)‌：在(zai)450 nm波(bo)長下測量(liang)吸(xi)光度(du)，吸(xi)光度(du)與LDH活(huo)性(xing)成正(zheng)比(bi)，可以通(tong)過比色(se)法(fa)測定LDH的活性(xing)‌。

‌實(shi)驗步驟(zhou)和(he)所需設備‌：

‌實(shi)驗步驟(zhou)‌：準備工(gong)作(zuo)液（1×Assay Buffer、NAD、WST-8、Enhancer和(he)Lactate混合(he)均(jun)勻），將(jiang)工(gong)作(zuo)液加入96孔板或微(wei)量(liang)玻(bo)璃比(bi)色(se)皿中，加入待測樣(yang)品(pin)，37℃恒(heng)溫(wen)孵育壹定時間(jian)後測量(liang)吸(xi)光度(du)‌。

‌所需設備‌：酶標儀(yi)或可(ke)見(jian)分(fen)光光度(du)計（能測450 nm處的吸(xi)光度(du)）、恒(heng)溫(wen)箱(xiang)、制冰(bing)機、低(di)溫(wen)離(li)心(xin)機、96孔板或微(wei)量(liang)玻(bo)璃比(bi)色(se)皿、可調(tiao)節式移液槍及槍頭(tou)、去(qu)離(li)子水、勻(yun)漿器（如(ru)果(guo)是(shi)組織(zhi)樣本）‌。

實(shi)驗註(zhu)意事項‌：

‌試(shi)劑(ji)保存‌：各(ge)組分(fen)（如(ru)Assay Buffer、Lactate、NAD、WST-8、Enhancer）需在(zai)冰(bing)上(shang)避光保存，避免反(fan)復凍融‌。

‌操作(zuo)註(zhu)意事項‌：整(zheng)個實(shi)驗過程需在(zai)冰(bing)上(shang)避光進行，避免光照影響結(jie)果(guo)‌。

公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產品(pin)：