ELISA試劑盒(he)隱(yin)秘(mi)試(shi)驗(yan)要(yao)點(dian)之保溫(wen)-洗(xi)刷以(yi)及(ji)加樣
ELISA隱(yin)秘(mi)要(yao)點(dian)之保溫(wen):
在(zai)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)中壹(yi)般有(you)二(er)次(ci)抗(kang)原抗體(ti)反響,即加標(biao)本(ben)後(hou)和加結(jie)合物(wu)後(hou),此刻(ke)反響的(de)溫(wen)度(du)和(he)時(shi)刻應(ying)按規則的要求(qiu),保(bao)溫(wen)容(rong)器(qi)是(shi)水浴箱,可使溫(wen)度(du)敏(min)捷平衡。各(ge)ELISA板(ban)不應(ying)疊(die)在(zai)壹(yi)起(qi)。為防止(zhi)蒸發(fa),板上應加蓋(gai),或(huo)將板(ban)平(ping)放在(zai)底(di)部墊(dian)有(you)濕(shi)紗布(bu)的濕(shi)盒(he)中。濕(shi)盒(he)應該(gai)是金屬的(de),傳(chuan)熱簡單(dan)。
常有(you)ELISA操(cao)作者(zhe)抱怨(yuan)試(shi)驗(yan)復雜(za),而經(jing)驗(yan)豐(feng)富(fu)的老(lao)師(shi)們會(hui)覺得很(hen)簡(jian)便,壹是熟(shu)能(neng)生(sheng)巧,二是把握了(le)其間(jian)的隱(yin)秘(mi)。
ELISA隱(yin)秘(mi)要(yao)點(dian)之洗(xi)刷:
洗(xi)刷在(zai)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)過程中不是(shi)反響聚,但卻(que)是(shi)決議(yi)試(shi)驗(yan)勝敗的關鍵(jian)。洗(xi)刷的(de)目的(de)是(shi)洗(xi)去反響液(ye)中(zhong)沒(mei)有(you)與固(gu)相(xiang)抗原或抗(kang)體(ti)結(jie)合的(de)物(wu)質(zhi)以(yi)及(ji)在(zai)反響過程中非特(te)異(yi)性(xing)吸(xi)附於(yu)固(gu)相(xiang)載體(ti)的(de)攪(jiao)擾(rao)物(wu)質(zhi)。洗(xi)刷如不*,特(te)別(bie)在(zai)後(hou)壹(yi)次(ci),如有(you)酶(mei)結(jie)合物(wu)的(de)非(fei)特(te)異性(xing)吸(xi)附,將使(shi)空白(bai)值升(sheng)高(gao)。別的(de),在(zai)間(jian)接(jie)法中如血(xue)清(qing)標本(ben)內(nei)的非(fei)特異(yi)性(xing)IgG吸(xi)附在(zai)固(gu)相(xiang)上而未被(bei)洗(xi)凈(jing),也(ye)將與酶(mei)標抗體(ti)效(xiao)果(guo)而(er)產(chan)生(sheng)攪(jiao)擾(rao)。
ELISA隱(yin)秘(mi)要(yao)點(dian)之加樣:
在(zai)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)中除(chu)了(le)包(bao)被(bei)外,壹(yi)般(ban)需(xu)進(jin)行45加樣。在(zai)定性(xing)測定中有(you)時(shi)不強(qiang)調加樣量的(de)性(xing),此刻(ke)應(ying)該運(yun)用相(xiang)同口徑的(de)滴管(guan),保持的加樣姿勢(shi),使(shi)每(mei)滴(di)液(ye)體(ti)的(de)體(ti)積(ji)根本(ben)相(xiang)同。在(zai)定量測定中則(ze)加樣量應(ying)力(li)求(qiu)。標本(ben)和(he)結(jie)合物(wu)的(de)稀(xi)釋(shi)液(ye)應(ying)按規則(ze)配制。加樣時(shi)應將液(ye)體(ti)加在(zai)孔(kong)底(di),防止(zhi)加在(zai)孔(kong)壁(bi)上(shang)部,並(bing)留(liu)意不可出(chu)現(xian)氣(qi)泡(pao)。