原(yuan)理 ：　

　細(xi)胞在(zai)培(pei)養(yang)瓶長成致(zhi)密單(dan)層後，已(yi)基(ji)本(ben)上(shang)飽(bao)和，為(wei)使(shi)細(xi)胞能繼續生長，同時(shi)也(ye)將細(xi)胞數(shu)量擴大(da)，就(jiu)必須進行(xing)傳(chuan)代(dai)（再(zai)培(pei)養(yang)）。傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)也(ye)是(shi)壹(yi)種將細(xi)胞種保存下去(qu)的方(fang)法。同時(shi)也(ye)是利(li)用(yong)培(pei)養(yang)細(xi)胞進行(xing)各種實(shi)驗的(de)必經(jing)過(guo)程(cheng)。懸(xuan)浮型(xing)細胞直接(jie)分瓶就(jiu)可以(yi)，而(er)貼壁(bi)細胞需(xu)經(jing)消化後才(cai)能分瓶。 　　

操作步(bu)驟 ：

　1、將長(chang)滿細(xi)胞的培(pei)養(yang)瓶中(zhong)原(yuan)來的培(pei)養(yang)液(ye)棄去(qu)。 　

　2、加入0.5—1ml 0.25%溶液(ye)，使(shi)瓶底細(xi)胞都浸入溶液(ye)中(zhong)。 　

　3、瓶口(kou)塞好(hao)橡皮塞，放(fang)在(zai)倒置(zhi)鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞。隨著(zhe)時(shi)間(jian)的推(tui)移(yi)，原(yuan)貼壁(bi)的細胞逐漸趨於(yu)圓(yuan)形，在(zai)還(hai)未漂(piao)起時(shi)將棄去(qu)，加入10ml培(pei)養(yang)液(ye)終(zhong)止消化。 　　觀察(cha)消化也可以(yi)用(yong)肉(rou)眼，當見到瓶底發(fa)白(bai)並出(chu)現細(xi)針孔空(kong)隙(xi)時(shi)終(zhong)止消化。壹(yi)般(ban)室溫(wen)消化時(shi)間(jian)約為(wei)1—3分(fen)鐘(zhong)。 　　

4、用(yong)吸(xi)管將貼(tie)壁的(de)細胞吹打(da)成懸(xuan)液(ye)，分(fen)到另外兩(liang)到(dao)三(san)瓶中(zhong)，實(shi)踐培(pei)養(yang)液(ye)塞(sai)好橡皮塞，置(zhi)37℃下(xia)繼續培(pei)養(yang)。第(di)二天觀察(cha)貼(tie)壁(bi)生(sheng)長(chang)情況。 　　

附：消化液(ye)配制方(fang)法： 　　稱取0.25克(ke)蛋白(bai)酶(mei)（活力(li)為(wei)1：250），加(jia)入100ml無Ca2+、Mg2+的(de)Hank’s液(ye)溶(rong)解，濾器(qi)過(guo)濾除菌，4℃保存，用(yong)前(qian)可在(zai)37℃下(xia)回溫(wen)。