細(xi)菌(jun)轉(zhuan)化(hua)操(cao)作(zuo)步驟：

1、事(shi)先將恒溫水浴(yu)的溫(wen)度(du)調到(dao)42℃。

2、從-70℃ 超(chao)低溫冰(bing)櫃(gui)中(zhong)取出壹管（100μl）感受態菌(jun)，立即(ji)用(yong)手指加(jia)溫融(rong)化(hua)後插(cha)入冰(bing)上(shang)，冰(bing)浴(yu)5~10min。

3、 加(jia)入5μl連(lian)接好(hao)的(de)質粒(li)混(hun)合(he)液(ye)（DNA含量(liang)不(bu)超過100ng），輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)後放置冰(bing)上(shang)20min。

4、 輕(qing)輕(qing)搖(yao)勻後插(cha)入42℃水浴(yu)中1~2min進行(xing)熱休克(ke)，然後迅速(su)放回冰(bing)中(zhong)，靜置3~5min。

5、 在超凈(jing)工作(zuo)臺(tai)中(zhong)向(xiang)上述各管中(zhong)分(fen)別加(jia)入500μl LB培(pei)養(yang)基(ji)（不(bu)含抗(kang)菌(jun)素）輕輕混(hun)勻，然後固(gu)定(ding)到(dao)搖(yao)床(chuang)的(de)彈(dan)簧(huang)架上(shang)37℃震蕩(dang)1h.

6、 在超凈(jing)工作(zuo)臺(tai)中(zhong)取上述轉(zhuan)化(hua)混(hun)合(he)液(ye)100~300μl，分(fen)別滴(di)到(dao)含合(he)適抗(kang)菌(jun)素的固(gu)體LB平板培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，用(yong)酒精燈(deng)燒過的(de)玻(bo)璃塗布(bu)棒塗布(bu)均勻（註(zhu)意(yi)：玻(bo)璃塗布(bu)棒上的酒精熄滅後稍(shao)等片(pian)刻(ke)，待(dai)其冷(leng)卻(que)後再塗）。

7、 如(ru)果(guo)載體和(he)宿主(zhu)菌(jun)適合(he)藍白斑篩(shai)選的話，滴完(wan)菌(jun)液(ye)後再在平板上(shang)滴(di)加(jia)40μl 2% X-gal，8μl 20% IPTG，用(yong)酒精燈(deng)燒過的(de)玻(bo)璃塗布(bu)棒塗布(bu)均勻。

8、 在塗好的培(pei)養(yang)皿(min)上(shang)做上(shang)標(biao)記(ji)，先放置在37℃恒溫(wen)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)30-60min直(zhi)到(dao)表(biao)面(mian)的(de)液(ye)體都滲透到(dao)培(pei)養(yang)基(ji)裏(li)後，再倒置過來放入37℃恒(heng)溫培(pei)養(yang)箱(xiang)過夜(ye)。

9、 在被細(xi)菌(jun)汙染(ran)的桌(zhuo)面上噴(pen)灑(sa)70%乙(yi)醇(chun)，擦(ca)幹桌面(mian)，寫實驗(yan)報告(gao)。

10、觀察平板上(shang)長出的菌(jun)落克(ke)隆，以(yi)菌(jun)落之間(jian)能(neng)互(hu)相(xiang)分(fen)開(kai)為好(hao)。註(zhu)意(yi)白色菌(jun)斑。