國(guo)產ELISA試(shi)劑盒(he)實(shi)驗原(yuan)理(li)：

本(ben)試(shi)劑盒(he)應(ying)用雙(shuang)抗(kang)體夾心(xin)法(fa)測定(ding)標(biao)本(ben)中(zhong)兔氧(yang)化低密度(du)脂蛋白(bai)（Ox-LDL）水平(ping)。用純化的(de)兔(tu)氧(yang)化低密度(du)脂蛋白(bai)（Ox-LDL）抗(kang)體包被(bei)微(wei)孔(kong)板(ban)，制成固(gu)相(xiang)抗(kang)體，往包(bao)被(bei)單抗(kang)的(de)微(wei)孔(kong)中(zhong)依次(ci)加(jia)入(ru)氧(yang)化低密度(du)脂蛋白(bai)（Ox-LDL），再(zai)與(yu)HRP標記(ji)的(de)羊(yang)抗(kang)兔抗(kang)體結合，形成抗(kang)體-抗(kang)原(yuan)-酶(mei)標抗(kang)體復合物，經過*洗(xi)滌後(hou)加(jia)底(di)物TMB顯色(se)。TMB在HRP酶(mei)的(de)催化下轉(zhuan)化成藍(lan)色(se)，並在(zai)酸的(de)作(zuo)用下轉(zhuan)化成*終(zhong)的(de)黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)深淺和(he)樣品(pin)中的(de)氧(yang)化低密度(du)脂蛋白(bai)（Ox-LDL）呈正(zheng)相(xiang)關。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在450nm波(bo)長(chang)下測定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)），通(tong)過(guo)標(biao)準(zhun)曲(qu)線計算(suan)樣品(pin)中兔氧(yang)化低密度(du)脂蛋白(bai)（Ox-LDL）濃(nong)度(du)。

國(guo)產ELISA試(shi)劑盒(he)樣本(ben)處(chu)理(li)及(ji)要(yao)求：

1. 血(xue)清：室溫(wen)血(xue)液自(zi)然(ran)凝(ning)固10-20分(fen)鐘(zhong)，離心20分(fen)鐘(zhong)左右（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上(shang)清，保存(cun)過(guo)程中(zhong)如出(chu)現沈(chen)澱，應(ying)再(zai)次(ci)離心。

2. 血(xue)漿(jiang)：應(ying)根據(ju)標(biao)本(ben)的(de)要(yao)求選擇EDTA或檸檬酸(suan)鈉(na)作為抗(kang)凝(ning)劑，混(hun)合10-20分(fen)鐘(zhong)後(hou)，離心20分(fen)鐘(zhong)左右（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上(shang)清，保存(cun)過(guo)程中(zhong)如有(you)沈(chen)澱形成，應(ying)該(gai)再(zai)次(ci)離心。

3. 尿(niao)液：用(yong)無(wu)菌(jun)管收集，離心20分(fen)鐘(zhong)左右（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上(shang)清，保存(cun)過(guo)程中(zhong)如有(you)沈(chen)澱形成，應(ying)再(zai)次(ci)離心。胸腹水、腦(nao)脊(ji)液(ye)參(can)照(zhao)實(shi)行。

4. 細胞(bao)培(pei)養(yang)上清：檢測分(fen)泌性的(de)成份(fen)時(shi)，用(yong)無(wu)菌(jun)管收集。離心20分(fen)鐘(zhong)左右（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上(shang)清。檢測細胞(bao)內(nei)的(de)成份(fen)時(shi)，用(yong)PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞(bao)懸液，細胞(bao)濃度(du)達(da)到(dao)100萬/ml左右。通(tong)過(guo)反(fan)復凍(dong)融，以使細胞(bao)破(po)壞(huai)並(bing)放(fang)出細胞(bao)內(nei)成份(fen)。離心20分(fen)鐘(zhong)左右（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上(shang)清。保存(cun)過(guo)程中(zhong)如有(you)沈(chen)澱形成，應(ying)再(zai)次(ci)離心。

5. 組(zu)織(zhi)標(biao)本(ben)：切割(ge)標(biao)本後(hou)，稱(cheng)取(qu)重量(liang)。加入(ru)壹定(ding)量(liang)的(de)PBS，PH7.4。用(yong)液氮迅(xun)速(su)冷(leng)凍(dong)保(bao)存(cun)備(bei)用。標(biao)本融化後(hou)仍(reng)然(ran)保持(chi)2-8℃的(de)溫(wen)度(du)。加入(ru)壹定(ding)量(liang)的(de)PBS（PH7.4），用(yong)手工(gong)或(huo)勻(yun)漿(jiang)器(qi)將(jiang)標(biao)本(ben)勻(yun)漿(jiang)充分(fen)。離心20分(fen)鐘(zhong)左右（2000-3000轉(zhuan)/分(fen)）。仔(zai)細收(shou)集(ji)上(shang)清。分(fen)裝後(hou)壹份(fen)待(dai)檢測，其(qi)余冷凍(dong)備(bei)用。

6. 標(biao)本(ben)采(cai)集(ji)後(hou)盡(jin)早(zao)進行提(ti)取(qu)，提取(qu)按(an)相(xiang)關文(wen)獻(xian)進行(xing)，提取(qu)後(hou)應(ying)盡快進行(xing)實(shi)驗。若不(bu)能(neng)馬(ma)上(shang)進(jin)行試驗，可將(jiang)標(biao)本放(fang)於-20℃保(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避免反(fan)復凍(dong)融.

7. 不能(neng)檢測含(han)NaN3的(de)樣品(pin)，因NaN3抑(yi)制辣根過氧(yang)化物酶的(de)（HRP）活性。