人(ren)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he)實(shi)驗(yan)原理:
用純(chun)化的(de)抗(kang)體(ti)包被(bei)微(wei)孔(kong)板(ban),制(zhi)成固相載(zai)體(ti),往(wang)包被(bei)抗(kang)C3抗(kang)體(ti)的(de)微(wei)孔(kong)中依(yi)次加(jia)入標本(ben)或標(biao)準品(pin)、化的(de)抗(kang)C3抗(kang)體(ti)、HRP標(biao)記(ji)的(de)親和(he)素,經過*洗(xi)滌(di)後用底(di)物TMB顯(xian)色(se)。TMB在過氧(yang)化物酶(mei)的(de)催化下(xia)轉化成藍(lan)色(se),並在(zai)酸(suan)的(de)作(zuo)用下(xia)轉化成黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)深淺(qian)和(he)樣(yang)品中的(de)C3呈(cheng)正(zheng)相關(guan)。用酶(mei)標儀(yi)在450nm波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定(ding)吸光(guang)度(OD值),計算樣(yang)品濃(nong)度。
人(ren)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he)儲(chu)存及(ji)有效期:
未(wei)開封(feng)的(de)試(shi)劑盒(he):所(suo)有試劑均(jun)按試劑瓶(ping)標(biao)簽(qian)上(shang)所(suo)示(shi)保存。請註意,收(shou)到(dao)試劑盒(he)後請盡(jin)快將(jiang)TMB 洗(xi)滌(di)液(ye),終止(zhi)液(ye)保(bao)存(cun)於4℃,其他試(shi)劑保存(cun)於-20℃。
使(shi)用後的(de)試(shi)劑盒(he):剩余試劑仍需(xu)按照試(shi)劑瓶(ping)標(biao)簽(qian)所(suo)示(shi)的(de)溫度保存,開封(feng)後的(de)酶(mei)標板(ban)要(yao)加(jia)幹(gan)燥劑後密封(feng)保存(cun)於(yu)-20℃,避(bi)免潮濕(shi)。
人(ren)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he)試劑配制(zhi):
1、 標準品(pin)
(1) 從試(shi)劑盒(he)中取出壹支標(biao)準品(pin),於6000-10000rpm 離心30 秒。用1ml 樣(yang)本稀(xi)釋液(ye)溶解,並(bing)
用吸頭對(dui)準凍(dong)存管底(di)部(bu)反復吸打(da)5 次(ci)以(yi)助溶解,充(chong)分混勻(yun)得(de)到(dao)標準品(pin)S7,放(fang)置(zhi)備(bei)用。
(2) 取(qu)7 個(ge)1.5 ml 離心管(S0-S6)依(yi)次排列,各(ge)加(jia)入250μl 樣(yang)本稀(xi)釋液(ye)。吸取(qu)250μl 標(biao)準品(pin)
S7 到(dao)*個(ge)離心管中(S6),輕(qing)輕(qing)吹打混勻(yun)。從(cong)S6 中吸取(qu)250μl 到(dao)第二(er)個(ge)EP 管中(S5),
輕(qing)輕(qing)吹打混勻(yun)。以(yi)此(ci)類推進(jin)行標(biao)準品(pin)的(de)倍(bei)比(bi)稀(xi)釋。S0 為樣(yang)本稀(xi)釋液(ye)。
2、 洗(xi)液(ye)工(gong)作液(ye)
濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)按1:25倍用去(qu)離子水進(jin)行稀(xi)釋。例(li)如(ru)用量(liang)筒量取240ml去(qu)離子水,倒(dao)入燒(shao)杯(bei)或(huo)其(qi)
他(ta)潔凈(jing)容器中,再量取10ml濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye),均(jun)勻(yun)加(jia)入,攪拌(ban)混勻(yun),在(zai)臨(lin)用前(qian)配妥。濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)低(di)溫保
存(cun)會有鹽析出,稀(xi)釋時可在(zai)水浴中加(jia)溫助溶。
3、 標記(ji)抗體(ti)工(gong)作液(ye)
標(biao)記(ji)抗體(ti)液(ye)按1:100倍用標(biao)記(ji)抗體(ti)稀(xi)釋液(ye)進(jin)行稀(xi)釋。如(ru)10μl標(biao)記(ji)抗體(ti)加(jia)
990μl標(biao)記(ji)抗體(ti)稀(xi)釋液(ye),輕(qing)輕(qing)混勻(yun),在(zai)臨(lin)用*分鐘(zhong)內(nei)配(pei)妥(tuo)。
4、 辣(la)根(gen)過氧(yang)化物酶(mei)標記(ji)親和(he)素工(gong)作液(ye)
辣(la)根(gen)過氧(yang)化物酶(mei)標記(ji)親和(he)素按1:100倍用辣(la)根(gen)過氧(yang)化物酶(mei)標記(ji)親和(he)素稀(xi)釋液(ye)進(jin)行稀(xi)釋。如(ru)
10μl辣(la)根(gen)過氧(yang)化物酶(mei)標記(ji)親和(he)素加(jia)990μl辣(la)根(gen)過氧(yang)化物酶(mei)標記(ji)親和(he)素稀(xi)釋液(ye),輕(qing)輕(qing)混勻(yun),在(zai)臨(lin)用
*分鐘(zhong)內(nei)配(pei)妥(tuo)。