小(xiao)鼠(shu)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒試(shi)驗原理(li):

小(xiao)鼠(shu)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒是(shi)固(gu)相夾(jia)心法酶聯免疫吸附(fu)實(shi)驗(ELISA).已知(zhi)ALT濃度的標準品(pin)、未知(zhi)濃度的樣品(pin)加(jia)入微(wei)孔酶標板(ban)內進(jin)行檢測(ce)。先(xian)將ALT和(he)標記(ji)的(de)抗體同時(shi)溫育。洗滌後(hou)，加(jia)入親(qin)和(he)素標記(ji)過的HRP。再(zai)經(jing)過溫育和(he)洗滌，去(qu)除(chu)未結合的酶結(jie)合物，然後(hou)加(jia)入底(di)物A、B，和(he)酶結(jie)合物同時作用。產生(sheng)顏色(se)。顏色(se)的深淺和(he)樣品(pin)中(zhong)ALT的濃度呈比(bi)例關系。

小鼠(shu)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒註(zhu)意事項(xiang)：

1.小鼠(shu)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒從(cong)冷藏環(huan)境中(zhong)取出(chu)應(ying)在(zai)室(shi)溫平衡 15-30 分(fen)鐘(zhong)後(hou)方(fang)可(ke)使(shi)用(yong)，酶標包(bao)被板開(kai)封(feng)後(hou)如未用完(wan)，板(ban)條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入(ru)密封(feng)袋(dai)中(zhong)保存。

2.濃洗滌液(ye)可(ke)能會(hui)有結晶(jing)析(xi)出(chu)，稀釋時(shi)可(ke)在(zai)水(shui)浴中加(jia)溫助溶，洗滌時(shi)不影響(xiang)結果(guo)。

3.各(ge)步加(jia)樣均(jun)應(ying)使(shi)用(yong)加(jia)樣器，並經(jing)常(chang)校(xiao)對(dui)其(qi)準確性(xing)，以避(bi)免試(shi)驗誤(wu)差(cha)。壹(yi)次加(jia)樣時間控制在(zai) 5 分(fen)鐘(zhong)內，如(ru)標本(ben)數(shu)量多，使(shi)用(yong)排槍加(jia)樣。

4.請每次測(ce)定(ding)的同(tong)時做(zuo)標準曲線(xian)，做(zuo)復孔(kong)。如標本(ben)中(zhong)待測物質(zhi)含量過高（樣本OD 值大(da)於標準品(pin)孔(kong)*孔的OD 值），請(qing)先用樣品(pin)稀(xi)釋液(ye)稀釋壹(yi)定倍數（n 倍）後再測(ce)定，計算時(shi)請(qing)乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5.封(feng)板(ban)膜只限(xian)壹(yi)次性(xing)使(shi)用(yong)，以避(bi)免交(jiao)叉汙染。

6.底物請避(bi)光保存。

7.嚴(yan)格按(an)照說(shuo)明(ming)書的操作(zuo)進(jin)行，試(shi)驗結果判定必(bi)須以酶標儀(yi)讀(du)數(shu)為準.

8.所有樣品(pin)，洗滌液(ye)和(he)各(ge)種廢棄物都應(ying)按(an)傳染物處理(li)。

小(xiao)鼠(shu)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒操(cao)作(zuo)步驟：

1.標準品(pin)的(de)稀釋：本(ben)小鼠(shu)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒提(ti)供原(yuan)倍標準品(pin)壹(yi)支，用戶(hu)可(ke)按(an)照下列圖(tu)表在(zai)小(xiao)試(shi)管中進行稀釋。

2.加(jia)樣：分別(bie)設空白(bai)孔（空白對(dui)照孔(kong)不加(jia)樣品(pin)及酶標試(shi)劑，其余(yu)各(ge)步操作相同）、標準孔、待(dai)測樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標包(bao)被板上標準品(pin)準確加(jia)樣 50µl，待測樣品(pin)孔(kong)中先加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋液(ye) 40µl，然後(hou)再(zai)加(jia)待測(ce)樣品(pin) 10µl（樣品(pin)終稀(xi)釋度為 5 倍）。加(jia)樣將樣品(pin)加(jia)於酶標板(ban)孔(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)壁，輕輕晃動混(hun)勻(yun)。

3.溫育：用封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)後置 37℃溫育 30 分鐘(zhong)。

4.配液：將 30 倍濃縮(suo)洗滌液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾水(shui) 30 倍稀釋後(hou)備(bei)用

5.洗滌：小(xiao)心揭掉封(feng)板(ban)膜，棄去(qu)液體，甩幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液(ye)，靜(jing)置 30 秒(miao)後棄去(qu)，如此重復 5 次，拍幹。

6.加(jia)酶：每(mei)孔加(jia)入酶標試(shi)劑 50µl，空白(bai)孔(kong)除外(wai)。

7.溫育：操作(zuo)同 3。

8.洗滌：操(cao)作(zuo)同 5。

9.顯(xian)色(se)：每孔(kong)先加(jia)入顯(xian)色(se)劑 A50µl，再加(jia)入顯(xian)色(se)劑 B50µl，輕輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光顯色(se)
15 分鐘(zhong).

10.終止(zhi)：每(mei)孔加(jia)終止(zhi)液(ye) 50µl，終止(zhi)反(fan)應(ying)（此時(shi)藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃(huang)色(se)）。

11.測定(ding)：以空(kong)白空(kong)調(tiao)零，450nm 波(bo)長(chang)依(yi)序測量各(ge)孔的(de)吸光度（OD 值）。 測(ce)定應(ying)在(zai)加(jia)終止(zhi)液(ye)後 15 分鐘(zhong)以內進(jin)行。