ELISA試劑(ji)盒(he)是(shi)壹(yi)種敏感(gan)性高,特異性強(qiang),重復(fu)性好的試驗(yan)確(que)診(zhen)方法(fa)。盡(jin)管(guan)ELISA試劑(ji)盒(he)的操(cao)作(zuo)過(guo)程看(kan)似(si)簡(jian)單(dan),但沒(mei)做到位的(de)話就會(hui)影(ying)響試驗(yan)的(de)作(zuo)用(yong)。所以(yi)ELISA試劑(ji)盒(he)在試(shi)驗(yan)過(guo)程中這幾(ji)點(dian)非(fei)常重要(yao): 1、重要(yao)的洗(xi)刷(shua):
不(bu)充分(fen)的洗(xi)刷(shua)會(hui)導(dao)致(zhi)差異(yi)和高布(bu)景,從而(er)帶來不(bu)抱負的試驗(yan)結(jie)果(guo)。假(jia)如(ru)未(wei)結合(he)的(de)材(cai)料殘(can)留在微孔板(ban)中,那麽它(ta)會添(tian)加(jia)布(bu)景噪音。有(you)必(bi)要(yao)的(de)話(hua),可添(tian)加洗(xi)刷(shua)液(ye)中的鹽濃度(du),這會阻止非特異結(jie)合(he)反響(xiang)。假(jia)如(ru)布(bu)景過高,置疑(yi)洗(xi)刷(shua)不(bu)行(xing)時(shi),能夠(gou)測驗(yan)添(tian)加(jia)洗(xi)刷(shua)次(ci)數(shu)。
2、關(guan)鍵(jian)的(de)關(guan)閉(bi):
關(guan)閉(bi)液(ye)的作(zuo)用(yong)是(shi)讓(rang)不相(xiang)關(guan)的(de)蛋(dan)白占(zhan)據(ju)微孔板(ban)中潛在的結(jie)合(he)位(wei)點(dian)。這就降(jiang)低了可產(chan)生(sheng)信(xin)號(hao)的抗體非(fei)特異結(jie)合(he)的(de)時(shi)機。假(jia)如(ru)布(bu)景過高,置疑(yi)關(guan)閉(bi)不(bu)充分(fen),那麽能(neng)夠(gou)測驗(yan)運(yun)用(yong)更高濃(nong)度(du)的(de)關(guan)閉(bi)液(ye),或(huo)適(shi)當(dang)延伸關(guan)閉(bi)時(shi)間。
現在(zai)主(zhu)要(yao)有(you)兩種(zhong)類(lei)型的(de)關(guan)閉(bi)液(ye):蛋白和非(fei)離子(zi)型去(qu)汙(wu)劑(ji)。ELISA試劑盒(he)運用(yong)的類(lei)型須(xu)取決(jue)於(yu)多個因素,包括(kuo)微孔板(ban)的表(biao)面試劑、吸附(fu)的(de)抗原、抗體(ti)和檢(jian)測試劑(ji)。好的關(guan)閉(bi)液(ye)應(ying)降低非(fei)特異性結合(he),但它不應(ying)當與(yu)抗(kang)原(yuan)、抗體或(huo)檢(jian)測試劑(ji)發生(sheng)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)。
3、抗體(ti)濃(nong)度(du)須(xu)優(you)化:
假(jia)如(ru)試(shi)劑稍有(you)不同(tong),則或(huo)許(xu)需求(qiu)優化抗體的量(liang)。非特異的(de)抗體(ti)結(jie)合(he)會(hui)添(tian)加(jia)布景。為了防止(zhi)這壹(yi)點,切勿(wu)運(yun)用(yong)過多(duo)的(de)壹(yi)抗或(huo)二抗。
4、檢(jian)測試劑(ji)要適(shi)量(liang):
切勿(wu)運(yun)用(yong)過多(duo)的(de)檢(jian)測試劑(ji)。假(jia)如(ru)濃(nong)度(du)過(guo)高,ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)或(huo)許(xu)未(wei)正確(que)稀釋(shi),則會(hui)導(dao)致(zhi)高布(bu)景。也不(bu)要(yao)顯色過(guo)度(du),如(ru)有(you)必(bi)要(yao),優(you)化壹(yi)下(xia)何時(shi)應(ying)加入(ru)終(zhong)止(zhi)液。
只要(yao)確保(bao)每(mei)壹(yi)步操(cao)作(zuo)都(dou)做(zuo)到(dao)位,才會出現的(de)試(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)。所以(yi)ELISA試驗(yan)的(de)每(mei)壹(yi)步都(dou)很重要(yao),不能(neng)夠(gou)漫(man)不經(jing)心。