取(qu)適(shi)量未(wei)變(bian)性(xing)的總蛋白溶(rong)液(ye)，用(yong) BCA 蛋白定(ding)量檢(jian)測試劑(ji)盒(G2026-200T；G2026-1000T)測蛋白濃度，蛋白濃度測定過(guo)程如(ru)下：
 

　　1.配制(zhi)蛋白標(biao)準貯(zhu)備(bei)液
 

　　取(qu)1 mL蛋白標(biao)準配制(zhi)液(ye)加入(ru)到蛋白標(biao)準品(pin)(BSA)蛋白標(biao)準管中，將25 mg蛋白標(biao)準品(pin)全溶(rong)解(jie)，即(ji)得到濃度為(wei)25 mg/mL的蛋白標(biao)準貯(zhu)備(bei)液。配制(zhi)成(cheng)的蛋白標(biao)準溶(rong)液(ye)可(ke)-20℃長(chang)期保存。
 

　　2.配制(zhi)蛋白標(biao)準工作(zuo)液(ye)
 

　　取適(shi)量25 mg/mL蛋白標(biao)準貯(zhu)備(bei)液，用(yong)PBS或生(sheng)理(li)鹽水(shui)稀(xi)釋(shi)50倍，得到終(zhong)濃度為(wei)0.5 mg/mL的蛋白標(biao)準工作(zuo)液(ye)。註意(yi)稀(xi)釋(shi)時(shi)按照(zhao)10倍梯度(du)方法(fa)稀(xi)釋(shi)，確保稀(xi)釋(shi)準確。
 

　　3.繪制標準曲(qu)線(xian)（酶標(biao)儀(yi)法(fa)）
 

　　將蛋白標(biao)準工作(zuo)液(ye)分別按(an)0、1、2、4、8、12、16、20 μL加到96孔(kong)板(ban)中，然(ran)後(hou)用(yong)PBS或生(sheng)理(li)鹽水(shui)依(yi)次(ci)加20、19、18、16、12、8、4、0 μL將上述梯度工作(zuo)液(ye)補足(zu)到20 μL。得到蛋白濃度依(yi)次(ci)為(wei)0、25、50、100、200、300、400、500 μg/mL的梯度(du)曲(qu)線(xian)。
 

　　4.準備(bei)待(dai)測樣品
 

　　將待(dai)測的蛋白樣(yang)品進(jin)行適(shi)當稀(xi)釋(shi)(可(ke)通過(guo)預(yu)實(shi)驗檢(jian)測，使樣品(pin)蛋白濃度在標(biao)準曲(qu)線(xian)範圍(wei)內(nei)，確保檢(jian)測結果可(ke)信(xin))，按(an)照(zhao)每個樣品(pin)20 μL的量加到96孔(kong)板(ban)中。待(dai)測樣品與(yu)蛋白標(biao)準品(pin)用(yong)相(xiang)同(tong)溶(rong)液(ye)稀(xi)釋(shi)。
 

　　5.配制(zhi)BCA顯(xian)色(se)工作(zuo)液(ye)
 

　　將BCA試(shi)劑(ji)與(yu)硫酸銅溶(rong)液(ye)按(an)照(zhao)50:1體(ti)積比(bi)充分混(hun)合(he)均勻(yun)，得到BCA顯色(se)工作(zuo)液(ye)。BCA顯色(se)工作(zuo)液(ye)可(ke)室溫(wen)保存，24 h內(nei)使用(yong)。每個待(dai)測樣品需(xu)200 μL，建(jian)議(yi)按需(xu)配制(zhi)，避(bi)免浪(lang)費。
 

　　6.檢(jian)測
 

　　向標準曲(qu)線(xian)樣品(pin)孔(kong)及(ji)待(dai)測樣品孔(kong)中每孔(kong)加入(ru)BCA顯(xian)色(se)工作(zuo)液(ye)200 μL，充分混(hun)勻(yun)(可(ke)將96孔(kong)板(ban)放在振(zhen)蕩(dang)器上振蕩(dang)30 s)，37℃反(fan)應(ying)30 min後(hou)，以(yi)標(biao)準曲(qu)線(xian)0號做參比(bi)，在562 nm波(bo)長(chang)下比色(se)測定，記錄(lu)各(ge)孔(kong)吸光(guang)度值。(註(zhu)：也(ye)可(ke)以(yi)在室(shi)溫(wen)反(fan)應(ying)2 h，或60℃反(fan)應(ying)30 min。如(ru)果(guo)蛋白濃度較(jiao)低(di)，建(jian)議(yi)置(zhi)於60℃反(fan)應(ying))
 

　　7.計(ji)算(suan)
 

　　以(yi)標(biao)準曲(qu)線(xian)中梯度(du)蛋白含(han)量(μg/mL)為橫坐(zuo)標(biao)，吸光(guang)值為(wei)縱(zong)坐標，繪出(chu)標準曲(qu)線(xian)。根據(ju)所(suo)測樣品的吸光(guang)值，在標(biao)準曲(qu)線(xian)上即可(ke)查得相(xiang)應(ying)孔(kong)中待(dai)測樣品的蛋白濃度(μg/mL)，再乘(cheng)以(yi)樣(yang)品稀(xi)釋(shi)倍數(shu)即(ji)為(wei)待(dai)測樣品實(shi)際蛋白濃度。