細胞(bao)培養被支(zhi)原體(ti)汙染(ran)是個世(shi)界(jie)性問(wen)題，在細胞(bao)培養中支(zhi)原體(ti)感(gan)染發生(sheng)率(lv)達到(dao)63%。支(zhi)原體(ti)是壹類無細胞(bao)壁，形(xing)態呈高度多形(xing)性(xing)，為圓(yuan)形(xing)、絲(si)狀或(huo)梨(li)形(xing)，其直(zhi)徑僅(jin)有0.13～0.18μm，變形(xing)能(neng)力(li)大，故能通(tong)過濾菌(jun)器(qi)，突(tu)出的(de)結構特(te)征是沒(mei)有細胞(bao)壁，對(dui)作(zuo)用於細胞(bao)壁生(sheng)物(wu)合(he)成的(de)抗生(sheng)素不(bu)敏(min)感(gan)。研究(jiu)表明(ming)，支(zhi)原體(ti)能耗盡(jin)營(ying)養物(wu)，促進(jin)代謝積(ji)累，導(dao)致(zhi)pH改變，對(dui)細胞(bao)造成(cheng)多(duo)種影(ying)響(xiang)，包(bao)括(kuo)生(sheng)長(chang)狀況(kuang)、生(sheng)化(hua)特(te)性(xing)、代謝、免疫(yi)、以(yi)及(ji)細胞(bao)存(cun)活(huo)等多(duo)方(fang)面的(de)改變，繼(ji)而(er)幹擾(rao)實(shi)驗(yan)結果，或造成(cheng)無(wu)法(fa)解釋的(de)差(cha)異(yi)。更加(jia)不(bu)幸的(de)是拯(zheng)救被(bei)感(gan)染的(de)細胞(bao)幾乎是不(bu)可能(neng)的(de)。下(xia)面介紹了(le)幾(ji)種(zhong)檢(jian)測(ce)方式(shi)，或許對(dui)妳(ni)的(de)實(shi)驗(yan)有用。

1、分離培養法(fa)

分離培養法(fa)是支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)的(de)金(jin)標方(fang)法(fa)，其檢(jian)測(ce)精(jing)確度(du)最(zui)高。這(zhe)種(zhong)方法(fa)是從可(ke)疑(yi)的(de)細胞(bao)培養體(ti)系(xi)中(zhong)取(qu)樣，並接種(zhong)到最(zui)適宜支(zhi)原體(ti)生(sheng)長(chang)的(de)瓊(qiong)脂(zhi)平板(ban)上。如(ru)果樣本(ben)中含(han)有支(zhi)原體(ti)，它們(men)就(jiu)會(hui)在(zai)這(zhe)種(zhong)瓊(qiong)脂(zhi)平板(ban)上生(sheng)長(chang)，最(zui)終形(xing)成(cheng)明顯可見(jian)的(de)特征性(xing)菌(jun)落(luo)。分(fen)離培養法(fa)基(ji)本不(bu)會(hui)出(chu)現(xian)假陰性結果，因此被譽為(wei)支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)金(jin)標準(zhun)。

但是，分(fen)離培養法(fa)也存(cun)在(zai)兩個弊端(duan)，壹是檢(jian)測(ce)時(shi)間太長(chang)，支(zhi)原體(ti)要長出(chu)明顯克(ke)隆至(zhi)少(shao)需(xu)要4周時(shi)間。二是盡(jin)管(guan)可以(yi)檢(jian)測(ce)絕大多(duo)數(shu)支(zhi)原體(ti)種類，分離培養法(fa)也有力(li)所不及的(de)時(shi)候，例如(ru)支(zhi)原體(ti)M. hyorhinis。

2、DNA檢(jian)測(ce)法(fa)，也稱(cheng)直(zhi)接培(pei)養法(fa)

將可(ke)疑(yi)樣(yang)品(pin)與(yu)指示(shi)細胞(bao)共(gong)同培(pei)養，壹般(ban)需(xu)要幾天(tian)時(shi)間。DNA檢(jian)測(ce)所用的(de)指示(shi)細胞(bao)通常是細胞(bao)質(zhi)區(qu)域較(jiao)大的(de)Vero細胞(bao)，如果原樣(yang)本中含(han)有支(zhi)原體(ti)，那麽當細胞(bao)DNA被熒光染(ran)料（如(ru)Hoechst染料(liao)）染(ran)色時(shi)，就可以(yi)在(zai)指示(shi)細胞(bao)的(de)核周(zhou)圍觀察(cha)到(dao)熒光斑點或(huo)熒光顆(ke)粒。

但是這(zhe)種(zhong)方法(fa)靈敏(min)度(du)太(tai)低(di)，當檢(jian)測(ce)成陽(yang)性時(shi)，細胞(bao)經常已經(jing)嚴重汙染(ran)。且(qie)Hoechst熒光染(ran)色：操(cao)作(zuo)復雜，操(cao)作(zuo)不(bu)當易造成(cheng)假陽(yang)性(xing)或假陰性。

3、PCR法(fa)

市面上(shang)有許多(duo)商(shang)機(ji)提供基(ji)於PCR的(de)支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒，如GeneCopoeia。這(zhe)種(zhong)方法(fa)已經(jing)比較成(cheng)熟，應(ying)用的(de)範圍(wei)也較為(wei)廣泛。

PCR法(fa)采(cai)用針對(dui)支(zhi)原體(ti)DNA的(de)引物(wu)用PCR檢(jian)測(ce)可疑(yi)樣(yang)本，其PCR引物(wu)可(ke)特異(yi)擴增(zeng)支(zhi)原體(ti)基(ji)因組(zu)中rDNA保守(shou)序(xu)列(lie)，包(bao)括(kuo)所有已知(zhi)的(de)支(zhi)原體(ti)，及細胞(bao)培養過程普遍(bian)遇(yu)到的(de)種屬(shu)，例如M. arginini、M. arthritidis、M. bovis、M. fermentans、M. genitalium、M. hominis、M. hyorhinis、M. neurolyticum、M. orale、M. pirum、M. pneumoniae、M. pulmonis、M. salivarium 和(he)U. urealyticum。在凝膠電(dian)泳過程中(zhong)，支(zhi)原體(ti)DNA會(hui)顯示為(wei)特異(yi)性條(tiao)帶(dai)，以(yi)此指示(shi)支(zhi)原體(ti)的(de)存(cun)在(zai)。

PCR法(fa)快速(su)，簡(jian)便(bian)，具有強(qiang)擴增(zeng)能力(li)和(he)高的(de)敏(min)感(gan)性，可(ke)以(yi)檢(jian)測(ce)大多(duo)數(shu)支(zhi)原體(ti)，但謹慎(shen)起(qi)見(jian)最(zui)好(hao)同時(shi)使(shi)用另(ling)壹種檢(jian)測(ce)方法(fa)來進(jin)行(xing)驗(yan)證(zheng)。PCR法(fa)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體(ti)只需(xu)幾(ji)個小時(shi)，是最(zui)快但(dan)也是最(zui)不靈敏(min)的(de)支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)方法(fa)。

4、酶學(xue)檢(jian)測(ce)

酶學(xue)檢(jian)測(ce)是將(jiang)可疑(yi)樣(yang)本添加(jia)到特定底物(wu)中(zhong)，在這(zhe)壹體(ti)系(xi)內(nei)支(zhi)原體(ti)的(de)酶可(ke)以(yi)將(jiang)ADP轉化(hua)為(wei)ATP，隨(sui)後(hou)能(neng)利(li)用ATP發光的(de)luciferase酶就(jiu)可(ke)以(yi)指示(shi)支(zhi)原體(ti)的(de)存(cun)在(zai)。

最後(hou)，建(jian)議妳(ni)進(jin)行(xing)定期(qi)檢(jian)測(ce)。

支(zhi)原體(ti)感(gan)染會(hui)影(ying)響(xiang)細胞(bao)的(de)正常(chang)生(sheng)長(chang)，因(yin)此對(dui)培(pei)養細胞(bao)定期(qi)進(jin)行(xing)支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)非(fei)常重(zhong)要。壹般(ban)來說(shuo)每1至(zhi)3個月(yue)就應該進(jin)行(xing)壹次(ci)支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)。將定期(qi)支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)常規化(hua)堅(jian)持(chi)下(xia)去(qu)，是細胞(bao)培養實(shi)驗(yan)室(shi)應對(dui)支(zhi)原體(ti)感(gan)染的(de)關(guan)鍵(jian)。

 通常(chang)來(lai)說(shuo)，被(bei)汙染(ran)的(de)細胞(bao)應該丟棄(qi)，以(yi)避(bi)免成(cheng)為汙染(ran)源。但(dan)對(dui)於珍(zhen)貴的(de)細胞(bao)，以(yi)往(wang)別(bie)的(de)品(pin)牌(pai)的(de)支(zhi)原體(ti)清除(chu)劑，其實(shi)只是抑(yi)制(zhi)劑，它們抑(yi)制(zhi)支(zhi)原體(ti)的(de)DNA合成(cheng)和(he)蛋白合(he)成(cheng)，但(dan)無法(fa)殺除(chu)。Mynox®是市(shi)面上(shang)壹款具有殺(sha)滅作(zuo)用的(de)清除(chu)劑。它提取(qu)自(zi)枯(ku)草桿(gan)菌(jun)，可與(yu)支(zhi)原體(ti)膜特(te)異(yi)性結合(he)，破壞膜通(tong)透性(xing)，導(dao)致(zhi)支(zhi)原體(ti)膨(peng)脹破裂而(er)死。