PCR擴(kuo)增(zeng)後(hou)出(chu)現(xian)的條帶與(yu)預(yu)計(ji)的大小(xiao)不(bu)壹致，或大或小，或者同時(shi)出現(xian)特(te)異性擴(kuo)增(zeng)帶 與(yu)非(fei)特(te)異性擴(kuo)增(zeng)帶。非特(te)異性條(tiao)帶的出現(xian)，其原(yuan)因(yin)：

1、引(yin)物(wu)與(yu)靶(ba)序(xu)列(lie)不wan全互補、或引(yin)物(wu)聚合(he)形(xing)成二聚體。

2、Mg2+離(li)子濃度過高(gao)、退(tui)火溫度(du)過低(di)，及(ji)PCR循(xun)環(huan)次(ci)數(shu)過多有(you)關。其(qi)次(ci)，是(shi)酶的質和(he)量，往往壹些來源的酶易出現(xian)非特(te)異條帶而(er)另(ling)壹來源的酶則(ze)不(bu)出現(xian)，酶的量過多有(you)時(shi)也(ye)會(hui)出現(xian)非特(te)異性擴(kuo)增(zeng)。

其對策有(you)：

①必要時(shi)，重新設計(ji)引(yin)物(wu)。

②減(jian)低(di)酶(mei)的量或調換(huan)另(ling)壹來源的酶。

③降(jiang)低(di)引(yin)物(wu)量，適當增加(jia)模(mo)板(ban)量，減(jian)少循環(huan)次(ci)數(shu)。

④適當提(ti)高(gao)退火溫度(du)或采(cai)用(yong)二溫度(du)點(dian)法(93℃變(bian)性(xing)，65℃左右退火與(yu)延伸，也(ye)叫(jiao)兩(liang)步法(fa))。