Taq DNA多聚酶是(shi)耐熱(re)DNA聚合酶,是(shi)從(cong)水(shui)棲(qi)高(gao)溫(wen)菌(Thermus aquaticus)中分(fen)離(li)的(de),由分(fen)子量(liang)為109000的(de)壹(yi)條(tiao)多肽鏈構成。dna聚合酶具(ju)有幾(ji)種(zhong)功(gong)能:壹(yi)是(shi)聚合作用(yong),以(yi)DNA為模板(ban),將dNTP中的(de)脫氧單(dan)核(he)苷(gan)酸逐個(ge)加(jia)到(dao)3’末(mo)端。二是有3’→5’外切(qie)酶活(huo)力(li),能識(shi)別(bie)和(he)消(xiao)除(chu)錯配(pei)的(de)引(yin)物(wu)末(mo)端(duan),與(yu)復制(zhi)過程(cheng)中(zhong)校正(zheng)功(gong)能有關。三是(shi)5’→3’外(wai)切(qie)酶活(huo)力(li),它能從(cong)5’端水(shui)解(jie)核(he)苷(gan)酸,還(hai)能(neng)經(jing)過幾(ji)個(ge)核(he)苷(gan)酸起作(zuo)用(yong),切(qie)除(chu)錯配(pei)的(de)核(he)苷(gan)酸。在體(ti)外(wai)實(shi)驗中(zhong),Taq DNA聚合酶的(de)出錯率(lv)為10-4~10-5。
Taq DNA聚合酶具(ju)有以(yi)下(xia)特點:
1、耐高(gao)溫(wen),在70℃下(xia)反(fan)應2小時(shi)後其(qi)殘(can)留(liu)活(huo)性(xing)在90%以(yi)上(shang),在93℃下(xia)反(fan)應2小時(shi)後其(qi)殘(can)留(liu)活(huo)性(xing)是(shi)仍(reng)能(neng)保(bao)持60%,而在95℃下(xia)反(fan)應2小時(shi)後為原(yuan)來的(de)40%。
2、在熱(re)變性(xing)時(shi)不會(hui)被鈍(dun)化,故(gu)不(bu)必(bi)在擴(kuo)增(zeng)反(fan)應的(de)每輪(lun)循(xun)環完(wan)成後再加(jia)新(xin)酶。
3、壹(yi)般(ban)擴(kuo)增(zeng)的(de)PCR產物(wu)長(chang)度(du)可(ke)達(da)2.0 kb,且(qie)特異(yi)性(xing)也(ye)較高(gao)。
壹(yi)典型的(de)PCR反(fan)應約(yue)需(xu)的(de)酶量(liang)為2.5u(總反(fan)應體(ti)積為50ml時(shi)),濃度(du)過高(gao)可(ke)引(yin)起非(fei)特異(yi)性(xing)擴(kuo)增(zeng),濃度(du)過低則(ze)合成產物(wu)量(liang)減少。