ELISA的(de)用(yong)途(tu)：ELISA的(de)基礎(chu)是抗(kang)原或抗(kang)體的(de)固(gu)相(xiang)化(hua)及抗(kang)原或抗(kang)體的(de)酶標(biao)記。結(jie)合在(zai)固(gu)相(xiang)載體(ti)表面(mian)的抗(kang)原或抗(kang)體仍保(bao)持(chi)其(qi)免(mian)疫(yi)學活(huo)性，酶(mei)標(biao)記的抗(kang)原或抗(kang)體既(ji)保留(liu)其(qi)免(mian)疫(yi)學活(huo)性，又(you)保(bao)留(liu)酶(mei)的(de)活(huo)性。在(zai)測(ce)定時(shi)，受檢(jian)標(biao)本(ben)(測(ce)定其(qi)中的抗(kang)體或(huo)抗(kang)原)與固(gu)相(xiang)載體(ti)表面(mian)的抗(kang)原或抗(kang)體起反(fan)應(ying)。用(yong)洗(xi)滌(di)的方法(fa)使(shi)固(gu)相(xiang)載體(ti)上形(xing)成(cheng)的(de)抗(kang)原抗(kang)體復(fu)合物與(yu)液(ye)體中的其(qi)他物質(zhi)分(fen)開。再加(jia)入酶標(biao)記的抗(kang)原或抗(kang)體，也(ye)通過(guo)反(fan)應(ying)而(er)結(jie)合在(zai)固(gu)相(xiang)載體(ti)上。此時(shi)固(gu)相(xiang)上的(de)酶量(liang)與(yu)標(biao)本中受檢(jian)物質(zhi)的(de)量(liang)呈(cheng)壹(yi)定的比例(li)。加(jia)入酶反(fan)應(ying)的底(di)物後，底(di)物被(bei)酶(mei)催(cui)化(hua)成(cheng)為(wei)有色(se)產(chan)物，產(chan)物的(de)量(liang)與(yu)標(biao)本中受檢(jian)物質(zhi)的(de)量(liang)直接相(xiang)關，故(gu)可根據呈(cheng)色(se)的深(shen)淺進(jin)行定性或(huo)定(ding)量(liang)分(fen)析(xi)。由於酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)效率(lv)很高(gao)，間(jian)接地放大(da)了免(mian)疫(yi)反(fan)應(ying)的結(jie)果，使(shi)測(ce)定方法(fa)達(da)到(dao)很高(gao)的(de)敏感(gan)度(du)。 ELISA可用(yong)於測(ce)定抗(kang)原，也(ye)可用(yong)於測(ce)定抗(kang)體。然(ran)而(er)，影(ying)響Elisa試驗(yan)結(jie)果的(de)因素很多，故(gu)加(jia)強各(ge)個環節的質(zhi)量(liang)保(bao)證(zheng)才能(neng)充(chong)分(fen)發揮其方法(fa)學的優點(dian)。

ELISA試(shi)劑盒變質(zhi)是ELISA試驗(yan)中比較常(chang)見的(de)問題，那(na)麽，ELISA試劑(ji)盒變質(zhi)是因為(wei)什麽(me)呢(ne)？現(xian)為(wei)大(da)家詳(xiang)細分析下。

1、試(shi)劑因素

     不同(tong)批(pi)次(ci)的ELISA試劑(ji)在(zai)制(zhi)作過程(cheng)中很難保證(zheng)質(zhi)量(liang)*壹(yi)致(zhi)，即使(shi)是通過批(pi)批(pi)檢的(de)項目(mu)其檢測(ce)結(jie)果也(ye)存在(zai)差(cha)異，因(yin)此必(bi)須(xu)選(xuan)擇和(he)訂(ding)購長批(pi)號(hao)的試(shi)劑，並(bing)保證保存(cun)條(tiao)件(jian)。 嚴格執(zhi)行這壹標準(zhun)可以避免(mian)因(yin)試(shi)劑批(pi)號(hao)改(gai)變而(er)重(zhong)新建立質(zhi)控(kong)體系及(ji)重新評(ping)估(gu)試(shi)劑的復(fu)雜(za)過(guo)程(cheng)，並(bing)且能(neng)夠(gou)保(bao)證(zheng)結(jie)果的(de)穩(wen)定性；對(dui)於效(xiao)期短(duan)、使(shi)用(yong)率(lv)低(di)的試劑，應(ying)當(dang)小(xiao)量(liang)分(fen)裝(zhuang)，每次(ci)使(shi)用(yong)則(ze)取(qu)分(fen)裝部(bu)分(fen)即可，避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)造成(cheng)試(shi)劑(ji)的(de)失(shi)效。

2、樣(yang)本因素

     標(biao)本幹擾因素包括內(nei)源性幹(gan)擾因素和(he)外(wai)源性幹(gan)擾因素，前者包括類(lei)風(feng)濕因(yin)子(zi)、補(bu)體(ti)、異嗜性抗(kang)體、自(zi)身抗(kang)體、溶(rong)菌(jun)mei等(deng)，後者包括標(biao)本(ben)溶(rong)血、標本(ben)被細(xi)菌(jun)汙(wu)染(ran)、標本貯(zhu)存時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)、標本(ben)凝固(gu)不全(quan)、冷凍(dong)標(biao)本的反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)等(deng)。

3、操(cao)作因素

     ELISA操(cao)作步驟(zhou)復(fu)雜(za)，操(cao)作不當(dang)將引起較大(da)的誤(wu)差(cha)。加(jia)樣(yang)、溫(wen)育(yu)、洗(xi)滌(di)、顯色、比色。

4、方法(fa)學的影(ying)響

       ELISA測(ce)定模(mo)式(shi)包(bao)括以(yi)下幾種：雙抗(kang)體夾心法(fa)、間(jian)接法、雙抗(kang)原夾心法(fa)、IgM抗(kang)體捕(bu)捉(zhuo)法、競(jing)爭(zheng)抑(yi)制法(fa)，其(qi)中競(jing)爭(zheng)抑(yi)制法(fa)(HBeAb,HBcAb等(deng)采用(yong))因(yin)受操(cao)作時差(cha)所引(yin)起的bu公(gong)平競(jing)爭(zheng)等(deng)因(yin)素的影(ying)響，結(jie)果重(zhong)復(fu)性較(jiao)差(cha)，質(zhi)量(liang)較(jiao)難(nan)控(kong)制。

 5、灰區的(de)設(she)置(zhi)

      通(tong)常情況下，ELISA定(ding)性實驗(yan)以“陽(yang)性"和(he)“陰(yin)性"來(lai)報(bao)告結(jie)果，兩(liang)者間(jian)有(you)壹(yi)條(tiao)分界(jie)線被稱(cheng)為(wei)“陽(yang)性判斷(duan)值"(cut-off value，CO值)，這(zhe)是定性免(mian)疫(yi)測(ce)定結(jie)果報(bao)告的(de)依(yi)據(ju)。

6、標(biao)本復(fu)查

      ELISA手(shou)工檢(jian)測(ce)過程(cheng)復(fu)雜(za)，影(ying)響因素較多(duo)，即使(shi)室(shi)內(nei)質(zhi)控(kong)在(zai)控(kong)，也(ye)可能(neng)因(yin)孔(kong)間(jian)差(cha)異而(er)造(zao)成(cheng)結(jie)果的(de)差(cha)異，因(yin)此加(jia)大(da)復(fu)查力度是保證結(jie)果準(zhun)確性的(de)可靠方法(fa)，比如對(dui)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等(deng)項(xiang)目的可疑、弱(ruo)陽(yang)性標(biao)本(ben)及(ji)少見模(mo)式(shi)的(de)檢(jian)測(ce)結(jie)果進(jin)行復(fu)查。

7、常(chang)表示結(jie)果的(de)常用(yong)方法(fa)

      ⑴.定(ding)性測(ce)定。

      ⑵.半(ban)定量(liang)測(ce)定 結(jie)果壹(yi)般以滴(di)度(du)表示(shi)。

      ⑶.定(ding)量(liang)測(ce)定 即用(yong)已知量(liang)的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)作壹系列稀釋(shi)後進(jin)行ELISA測(ce)定，繪制(zhi)標(biao)準(zhun)曲線，結(jie)果以(yi)量(liang)或(huo)單(dan)位表(biao)示(shi)。在(zai)ELISA定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)中每壹(yi)塊(kuai)反(fan)應(ying)板都(dou)必(bi)須(xu)繪制(zhi)相(xiang)應的(de)標準(zhun)曲線。